丝光绿蝇室内饲养方法的改进

丝光绿蝇 (L ucilia sericata)属于双翅目 ,丽蝇科 ,是一种常见的医学昆虫 ,可引起人类以及家畜、家禽的蝇蛆病 ,对畜牧业生产有较大的危害性 ,其在医学昆虫学、法医昆虫学及环境净化等方面有一定的研究意义。对于其室内饲养 ,Daniels[1 ]曾尝试以琼脂、马血、酵母为原料配制丝光绿蝇幼虫饲料 ,以用于研究丝光绿蝇幼虫生长发育与饲料组分的比例关系。Sherman[2 ]曾报道以肝、琼脂、啤酒酵母为原料饲养丝光绿蝇幼虫。许兵红等[3,4 ] 对丝光绿蝇的室内饲养曾有初步研究 ,本次在原研究的基础上 ,对饲养方法进行了一定的改进 ,现报道如下。材…     

丝光绿蝇室内连续5代成虫产卵特征观察

目的　观察丝光绿蝇室内连续人工饲养的各代成虫产卵特征。　方法　将丝光绿蝇引入室内 ,采用人工配制的幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,观察记录其室内第 1～ 5代成虫产卵结果。　结果　成虫第 1～ 5代产卵天数 (x± s)分别为 :5 .5 0± 0 .17,8.2 5± 0 .96 ,8.2 5± 0 .5 0 ,7.2 5± 1.5 0 ,8.5 0± 1.2 9;产卵次数分别为 :18.0 0± 1.41,2 7.75± 9.0 0 ,2 3.0 0± 8.12 ,2 3.5 0± 11.5 6 ,33.2 5± 12 .89;第 1、2、4、5代产卵指数分别为 :0 .36 0± 0 .0 18,0 .788± 0 .32 0 ,0 .6 42± 0 .2 91,0 .819± 0 .40 6。室内第 1代产卵天数少于第 2、3、5代 (P<0 .0 5 ) ,与第 4代无显著性差异 ,第 2～ 5代间产卵天数均无显著性差异 ;产卵次数及产卵指数室内第 1～ 5代间均无显著性差异。　结论　本次实验丝光绿蝇引入室内连续饲养的各代成虫产卵特征比较稳定。     

EGFP-Apoptin融合蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 观察EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位，探讨Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 构建EGFP-Apoptin融合蛋白真核表达载体，用脂质体转染技术将其导入人肝癌细胞株HepG2中，在荧光显微镜下观察Apoptin在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位；用TUNEL法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应。结果 转染细胞中EGFP-Apoptin在肿瘤细胞中得以高表达，转染24h后逐渐从细胞质迁移至细胞核，最后定位于细胞核内。转染4～5d后逐渐诱导肿瘤细胞凋亡。结论 EGFP-Apoptin融合蛋白在肿瘤细胞中具有核定位效应，并诱导肿瘤细胞凋亡；EGFP-Apoptin可以作为研究Apoptin在肿瘤细胞中分布和亚细胞定位的有效工具，用以探讨Apoptin在体外诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

两种饲料对丝光绿蝇产卵的影响

目的观察比较鱼粉、麦麸两种幼虫饲料对丝光绿蝇室内连续饲养的各代成虫产卵的影响。方法将丝光绿蝇引入室内 ,分成两组 ,即鱼粉组和麦麸组 ,在室内进行连续饲养 ,分别观察记录两组室内第 1～ 5代成虫的产卵天数和产卵次数 ,并计算产卵指数 ,进行比较。结果鱼粉组与麦麸组成虫室内第 1、5代产卵天数、产卵次数、产卵指数两组间差异无显著性 ,第 2～ 4代产卵天数、产卵次数、产卵指数 ,鱼粉组显著大于麦麸组。结论鱼粉组产卵力好于麦麸组 ,可能提示鱼粉饲料更有利于丝光绿蝇的发育与繁殖。     

TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因体外协同效应的研究

目的研究TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因在体外协同诱导肝癌细胞系HepG2凋亡的作用。方法从人外周血淋巴细胞总RNA中扩增出TRAIL基因的cDNA序列,构建含TRAIL基因的真核表达重组体,与鸡贫血病毒vp3基因在体外共转染HepG2细胞,研究其协同诱导HepG2细胞凋亡作用。结果 单独转染TRAIL基因与vp3基因均可诱导HepG2细胞凋亡;将两种基因共转染HepG2细胞,发现其凋亡率明显增加。结论TRAIL基因与vp3基因在诱导HepG2细胞凋亡中存在正协同效应。     

TAT透膜肽介导VP3蛋白诱导HepG2细胞凋亡效应的研究

目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过蛋白转导实验观察其穿透生物膜的效应,利用DAPI染色及TUNEL法观察其诱导HepG2细胞凋亡的效应。结果融合蛋白TAT-GFP及TAT-GFP-VP3可进入体外培养的HepG2细胞,在荧光下可见绿色荧光,融合蛋白TAT-VP3及TAT-GFP-VP3可诱导体外培养的细胞凋亡。结论在VP3的N端加上TAT透膜肽形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜,TAT-VP3融合蛋白能诱导HepG2细胞凋亡。     

两种饲料对丝光绿蝇蛹长和羽化率的影响

目的观察比较两组丝光绿蝇室内连续饲养的蛹期形态和羽化率。方法将丝光绿蝇引入室内 ,分成鱼粉组和麦麸组两种幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,对两组各代蛹期的蛹长、羽化率等进行比较观察。结果第 2～ 4代蛹长鱼粉组显著大于麦麸组 ;第 5代蛹长鱼粉组与麦麸组差异无显著性。第 1～ 4代羽化率两组差异无显著性 ,第 5代羽化率鱼粉组显著性高于麦麸组。结论鱼粉组蛹形态、羽化率等指标好于麦麸组 ,提示鱼粉组饲料饲养效果好于麦麸组饲料     

人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定

目的　制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体。方法　利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠 ,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体 2株N15C和N16D。结果　利用普通ELISA方法检测 2株单抗 ,小鼠腹水N16D滴度可达 1/ 32 0 0 0 ,N15C滴度达 1/ 80 0 0 ;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性。结论　N16D株单抗对人心肌肌钙蛋白具有较好的特异性和亲和性     

不同酶标反应板在人心肌特异性肌钙蛋白抗体检测中的性能分析

目的　考察不同种类的酶标反应板对酶联免疫吸附试验 (ELISA)的结果影响。方法　以 10 0 μl人心肌肌钙蛋白T(CTnT)为抗原 ,分别包被不同酶标反应板 ,运用普通酶联免疫吸附试验方法比较不同酶标反应板的性能。结果　 96孔硬脂进口反应板的CTnT抗体OD值 (P <0 .0 5 )和阴性血清OD值 (P <0 .0 1)高于国产 40孔硬板。结论　 96孔进口硬板的吸附能力最强 ,灵敏度高 ,且非特异性吸附较少     

6His-VP3融合蛋白的表达、纯化及其捕获细胞中相关蛋白的初步探讨

目的研究人肝癌细胞HepG2与人胎肝细胞L-02中与VP3蛋白相互作用的蛋白组分,以探讨VP3特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用PCR方法克隆vp3的DNA片段,将其插入质粒pET-28a( )构建含6个组氨酸标签6His-VP3融合蛋白的原核表达载体。利用亲和层析技术制备纯化的6His-VP3融合蛋白作为诱饵,分别从肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02的总蛋白中,通过pull-down技术捕获与VP3相互作用的特异性蛋白质组分。结果获得了高纯度的6His-VP3融合蛋白;以其作为诱饵从HepG2细胞和L-02细胞中捕获到的与VP3作用的相关蛋白质组分存在差异。结论肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02中,与VP3作用蛋白的差异与其在不同细胞中的生物学行为相对应。