重组人腺病毒表达的MDV-1 VP22蛋白的不同定位模式

目的:研究MDV-1 CVI988 VP22蛋白的转导机制及细胞定位机理, 分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素.方法:构建表达VP22蛋白的重组人腺病毒, 将重组病毒感染的AD-293细胞裂解产物加至正常的MDBK细胞上, 通过免疫荧光(IFA)及Western blot鉴定VP22的蛋白转导功能.观察感染后不同时间VP22在AD-293细胞上的定位, 并与瞬时表达的VP22蛋白定位比较.结果:重组人腺病毒表达的VP22在MDBK细胞上能够进入几乎所有的细胞, 说明VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能.进一步鉴定VP22的细胞定位发现, 在重组病毒感染的AD-293细胞中, VP22首先聚集于细胞核周围, 随后以特殊的荧光粒子的形式散在于胞质中, 而AD-293细胞中瞬时表达的VP22及MDV感染的CEF中VP22均均匀分布于细胞核.结论:重组人腺病毒表达的VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能, 不同重组病毒表达的VP22在细胞中的定位模式有所差别.     

抗MDV-1 VP22羧基端单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定

目的：制备抗血清Ⅰ型马立克氏病病毒（MDV-1）VP22的单克隆抗体（mAb），并鉴定其免疫学特性。方法：在原核系统中表达VP22羧基端区域（94～243aa），获得融合表达产物GST-VP22C。将该表达产物切胶免疫小鼠，利用杂交瘤技术制备抗MDV-1VP22C的mAb，并通过ELISA、间接免疫荧光（IFA）、Western blot鉴定其特性。结果：获得了2株可稳定分泌抗MDV-1VP22C的mAb的杂交瘤细胞，命名为3F7、4FA。IFA鉴定表明，两株mAb均能与感染MDV-1的成纤维细胞反应，其中，3F7mAb染色呈现MDV空斑，而4FAmAb呈现整个单层的细胞核荧光。ELISA和Westernblot分析表明，3F7能与杆状病毒表达的VP22反应，4FA不具备该特性。对3F7mAb进一步鉴定，确定了该mAb针对的具体位置在94～193aa处，是蛋白转导域的预测位置。结论：成功地制备了抗MDV-1VP22C的mAb，为深入研究VP22蛋白的转导功能提供了有用的试剂。