有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病

糖尿病时 ,多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶 (MAPK)信号通路。MAPK激活后通过调节下游转录因子活性 ,控制基因表达 ,最终引起肾小球肥大和细胞外基质 (ECM)积聚 ,导致糖尿病肾病 (DN)的发生。     

电脉冲介导荧光素酶基因转移高效率的实验研究

目的 研究电脉冲介导的基因转移效率及其最佳基因转移电脉冲参数。方法 用微量注射器将pcDNA3-Luc质粒100μg注射入BALB/小鼠的股四头肌,5 min内在注射部位给予不同参数的电脉冲刺激,然后进行荧光素酶活性测定和组织病理切片。结果 电脉冲可明显增加荧光素酶基因的表达,电脉冲组的荧光素酶活性(7.26±3.72)×107 RLU/mg蛋白是单纯注射组(1.38±1.27)×104 RLU/mg蛋白的5 262倍(P=0.017)。组织病理检查发现电脉冲刺激无严重的肌肉组织损伤。电压100 V/cm,波宽60 ms,脉冲次数10次和频率0.75 Hz是最佳的电脉冲参数。结论 在最佳的电脉冲参数条件下,电脉冲介导的基因转移可获得较高的基因表达。     

有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病

糖尿病时，多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶（MAPK）信号通路，MAPK激活后通过调节下游转录因子活性，控制基因表达，最终引起肾小球肥大和细胞外基质（ECM）积聚，导致糖尿病肾病（DN）的发生。     

sOVA-linker-β2m融合蛋白构建表位特异的靶结构

目的　构建融合基因sOVA linker β2m ,探讨通过内源性途径递呈的肽在细胞表面形成MHCⅠ类分子复合物的情况。方法　构建了真核表达载体pcDNA3/sOVA linker β2m及不含有 β2m基因的对照载体 ,以研究 β2m是否能在此过程中起到辅助的作用。结果　RT PCR与原位杂交结果显示在各转导细胞中均有融合基因的正确表达 ,且二者的表达水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。进一步对细胞内、细胞表面H 2Kb OVA复合物的分布进行分析 ,表明各转导细胞中均有正确的蛋白质分子翻译合成 ,并能表达在细胞表面 ,但融合有 β2m基因的EL4 /eb2m细胞的表达量远远高于没有融合 β2m基因的转导细胞EL4 /OVA。结论　β2m基因与特异性抗原肽的融合 ,易于形成稳定的MHCⅠ类分子复合物 ,提高抗原呈递效率。     

电脉冲介导荧光素酶基因转移高效率的实验研究

目的研究电脉冲介导的基因转移效率及其最佳因因转移电脉冲参数.方法用微量注射器将pcDNA3-Luc质粒100μg注射入BALB/小鼠的股四头肌,5min内在注射部位给予不同参数的电脉冲刺激,然后进行荧光素酶活性测定和组织病理切片.结果电脉冲可明显增加荧光素酶基因的表达,电脉冲组的荧光素酶活性(7.26±3.72)×107RLU/mg蛋白是单纯注射组(1.38±1.27)×104RLU/mg蛋白的5262倍(P=0.017).组织病理检查发现电脉冲刺激无严重的肌肉组织损伤.电压100V/cm波宽60ms,脉冲次数10次和频率0.75Hz是最佳的电脉冲参数.结论在最佳的电脉冲参数条件下,电脉冲介导的基因转移可获得较高的基因表达.     

人β2微球蛋白基因启动子的克隆及其在P815细胞中的活性研究

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。