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骨髓移植配型中HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
HLAⅡ类基因是位于人类第 6号染色体短臂远端的一组高度多态的基因 ,主要包括HLA DR、DQ、DP3个亚区[1] 。HLAⅡ类基因配型对提高异基因骨髓移植存活率 ,减少GVHD ,具有重要意义[2 ] 。既往HLAⅡ类分型采用血清学微量淋巴细胞毒试验 ,近年国外实验室已转向基因分型 ,并已将其列为常规。我们采用序列特异性引物 (SSP)PCR技术对HLA DRB1,DQB1进行基因分型 ,快速简便 ,报告如下。1 材料与方法1 1 样本 原山东医科大学附属医院提供 2 2名拟行骨髓移植的恶性血液病患者及相关供者样本。1.2 DNA提取… 相似文献
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用PCR-SSP技术检测弱D型RHD基因1例 总被引:4,自引:2,他引:2
RhD抗原(ISBT004.001;RH1)是一种由RhD蛋白携带的非常重要的血型抗原,是引起新生儿溶血病的最主要原因[1]。极少数人红细胞的D抗原表达数目减少,被称之为弱D(以前叫作DU),在白种人中的比例为0.2%~1%,在黄种人中的比例则更低。一部分弱D被解释为RhD蛋白的质的变化,称之为部分D,通常是由RHD/RHCE杂化基因引起,另一部分弱D是由Cde单倍体反式位置的抑制作用引起,这些弱D可能有正常的RHD基因,其RhD抗原表达只是微量减少,被宽松地称之为高级DU,现在常被定为正常的RhD。最近笔者发现1名供血者红细胞为弱D型,且实验结果显示弱D型具有独特的基因结构,现报告如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象献血者,男,21岁,汉族,在校学生,来本中心献血时被确定为弱D;阴阳性对照血样亦均取自本中心献血者,民族为汉族。
1.2 序列特异性引物针对RHD和RHCE基因之间最具差异的区段设计多对不同引物,特异性地扩增RHD基因的第2~7,9,10外显子和RHCE基因的第1,2,4,5外显子,以及RHD和RHCE基因的第4内含子(表1)。另以人类生长激素(HGH)基因序列特异性引物作为内对照引物,扩增片段为429bp(以上引物均由美国G&T公司合成、纯化及鉴定)。
1.3 基因组DNA的制备使用美国G&T公司基因组DNA抽提试剂盒,采用盐析法从供血者外周血分离获得。0.3ml EDTA抗凝外周血加入1 ml红细胞裂解液,离心弃上清,沉淀加入170μl核裂解液及4μl SDS,剧烈振荡,再加入72μl NaCl溶液,10000r/min离心5min,取上清加入210μl异丙醇沉淀DNA,将DNA溶于100μl TE溶液中,保存待用。
1.4 特异性PCR扩增反应体系11μl,含1μl DNA,8μl引物混合物,1U Taq酶。扩增条件为95℃预变性5min,95℃变性30s,60℃退火30℃s,72℃延伸90s,30循环。PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测,电泳时间为25min。 相似文献
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经血液传播的病毒(Transfusion Transmitted Virus,TTV)是日本学Nishaizawa运用代表性差异技术(Representation difference analysis,RDA)从一名非甲-非庚型输血后肝炎患血清中克隆出一株编号为N22的、长约500bp的DNA序列。经测序分析,该基因片段两端有Sau3AⅠ酶切位点序列(GATC)。经与DDJB基因序列数据库中序列比较,发现与所有报道的核酸序列无同源性,也并非来自宿主基因DNA,证实是一种新的病毒基因序列。随后我国及英美等国的学相继对此病毒做了大量研究。综述如下。 相似文献
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中国汉族群体RhD—(—)个体D基因和CED基因外显子多态性研究 总被引:7,自引:2,他引:5
Rh血型系统是继ABO血型之后临床意义最大的一个血型系统,也是最复杂的血型系统之一。最新的分子生物学研究表明,RhD阳性个体的Rh基因座位是由RHD和RHCE两个结构基因组成[1],这两个基因均含有10个外显子,而RhD(-)个体仅有一个RHCE基因[2]。值得注意的是RhD基因结构存在种族差异,东方人、非洲黑人RhD(-)个体与高加索人种 RhD (-)个体的基因结构存在明显的差异[3,4]。笔者用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法特异性地扩增100名中国汉族RhD(-)个体的RHD基因,以探讨中国汉族RhD(-)个体的D基因结构,并与其他民族进行比较。 相似文献
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