重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)的细胞毒效应

应用本室纯化的重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)对悬浮的人白血病细胞HL-60和K562小鼠骨髓瘤细胞NS-1以及贴壁的小鼠纤维母细胞L929和人肝癌细胞SMMC7721进行了微量细胞毒试验,其中悬浮细胞采用~3H-TdR掺入法;贴壁细胞采用结晶紫染色法分别检测.实验表明,此rhTNF-β对HL-60有很强的杀伤作用;NS-1为相对敏感细胞株;而对SMMC7721及K562的杀伤率很低,具有一定抗性.与此同时,作者还应用FDA-PI荧光染色,用荧光显微镜,扫描电镜及透射电镜观察,DNA电泳以及流式细胞仪对细胞周期和凋亡百分率的检测等实验,进一步研究了rhTNF-β对L929和     

TNF的生物学功能与受体的信号传导

本文综述了近年来TNF发挥其多救生物学活性的分子结构基础、TNF与受体结合后所出现的一系列跨膜反应现象及其信号传导机理的研究进展。目前，对这一领域的研究尚处于起始阶段，已发现TNF可激发多种激酶的活化以及由此产生的级联反应，继而活化NF-kB以调节靶基因的转录,使靶细胞进入不同的反应状态。这些研究将为TNF的临床应用提供理论依据。     

β肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡的信号传导研究

本文采用与各种细胞信号传导相关的抑制剂阻断重组人β肿瘤坏死因子(rhTNF-β)对1929靶细胞的杀伤作用、并配合荧光染色、DNA电泳和FCM等实验手段,检测rhTNF-β)引起L929细胞凋亡及加入抑制剂以后的变化,这为研究TNF-β在杀伤肿瘤细胞过程中信号传导的特征提供了基础资料.hTNF-β为本实验室自行重组并纯化之产品,比活性5×10~5U/mg.信号传导仰制剂包括:Genistein (酪氨酸激酶抑制剂);Indomethacin(磷脂酶抑制剂);Quinacrine(磷脂酶抑制剂);Staurosporine(蛋白激酶 C抑制剂); TMB8(钙桔抗剂和蛋白激酶抑制剂);TPCK(丝氨酸蛋白激酶抑制剂); Verapamil(钙通道阻断剂); Wortmannin(磷脂酶 A2抑制剂)均为Sigma产品.采用:①信号传导阻断试验:将L929细胞加入96孔细胞培养板内,每孔1.5×10~4/0.1 ml/孔,培养12h后换以新鲜培养液,并加入50μl各种抑制剂及50μl rhTNF-β(终浓度62 U/ml),另设 rhTNF-β及1640培养液的对照孔.继续培养48h,用结晶紫染色方法计算存活率.②荧光染色:用以上相同的方法处理1929细胞,然后用PI及FDA双染色,荧光显微镜观察.③DNA电泳:经处理的L929细胞,通过     

人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白诱导K562细胞凋亡过程超微弱光子测定

本实验用对人γ干扰素(IFN-γ)、人β肿瘤坏死因子(TNF-β)具有一定抗性的K562细胞(人红白血病细胞株)为材料,观察人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白(γTNF-β)在诱导K562细胞凋亡中所产生的超微弱光量子的动态变化,初步探讨细胞凋亡与发光的关系.利用二维光子计数成象采集系统检测不同实验组细胞(1.6×10~6)的超微弱光子辐射量(连续计数3次的光子数平均值),以比较凋亡细胞与非凋亡细胞光量子数变化规津.实验设立不含药物的细胞对照组,以及用放线菌素D(0.2μg/ml)处理组、用TNF-β(62U/ml)处理组和用γTNF-β(62U/ML)处理组;观察了不同时间段(12h,24h,36h)的受试细胞发光情况,以及比较对照组细胞与用药组细胞的发光情况.结果发现,γTNF-β处理组细胞超微弱光子辐射量显著增加,并在典型凋亡细胞形态学出现之