运用蛋白质组学技术研究EB病毒诱导鼻咽癌细胞CNE2表达变化的蛋白质

【目的】寻找并鉴定CNE2细胞在EB病毒感染后表达发生变化的功能蛋白质，为阐明该病毒诱导鼻咽上皮细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。【方法】分别从EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞中抽提总蛋白质，通过双向电泳分离。运用软件比较分析上述两组的蛋白质表达图谱，寻找表达有差异的蛋白质点。从凝胶上切下差异蛋白质点，通过基质辅助激光解吸，离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。【结果】图像分析显示，EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞之间存在一些明显差异的蛋白质点。通过MALDI-TOF-MS成功地鉴定了其中4个蛋白质点，EB病毒感染CNE2细胞后蛋白质GRP78和硫氧还蛋白过氧化物酶1表达上调，蛋白质肌动蛋白胞浆组分2和蛋白酶体。链表达下调。【结论】EB病毒感染鼻咽上皮细胞后引起生物学变化的分子机制可能包括：①诱导细胞大量合成蛋白质以促进增生．同时上调蛋白质GRP78的表达而抗凋亡；②提高细胞内氧化状态而诱导蛋白质硫氧还蛋白过氧化物酶1的表达，并可能通过该蛋白质调控NF-κB和AP-1来影响细胞生长。     

α—粒子辐射诱BEP2D细胞系的差异蛋白质组研究

目的：建立一个全面的肺癌细胞系蛋白质组表达谱。方法：利用固相PH梯度等电聚焦双向电泳、最新生物质谱肽质量指纹谱和源后衰变技术以及生物信息学技术，对RH细胞系原代、20代、35代细胞进行功能蛋白组分析。结果：获得了RH细胞系原代、20代和35代蛋白表达谱。凝胶图象分析显示3个蛋白质点只在原代中表达。原代到20代细胞共43个蛋白质表达量发生变化。其中21个蛋白质表达量上升，22个下降，20个到35代细胞共66个蛋白质发生表达量变化，其中13个蛋白质的表达量上升，53个下降，质谱鉴定出40个蛋白质点，共获得7个差异表达蛋白质信息，其中HMG－1在RHO细胞内表达，而RH20和RH35细胞内不表达，Maspin在癌前阶段表达量下降，来源于肿瘤抑制基因区的氨酰酶1和5′甲硫酰苷磷酸化酶也在不同时期表达下降，结论：这些差异表达的，有或无的蛋白质，可能与肺癌的发生，发展和恶变存在一定关系。     

生物质谱技术应用及进展

生物质谱因其高灵敏度、高准确度、快速、易于自动化等特点,在生命科学领域的应用和研究日益广泛。该文这了近年来生物质谱在蛋白质、核酸、糖类、药物代谢以及微生物检验等方面的应用及进展。     

ANXⅠ在原发性肺癌及BEP2D转化细胞系中的表达

[目的]体内、外的许多感染模型证实,ANXⅠ介导糖皮质激素的抗炎症效应,被认为是糖皮质激素抗炎症效应中的第二信使。然而,ANXⅠ与原发性肺癌之间的相关性尚未知晓。本文对此进行研究。[方法]采用免疫组化方法检测60例原发性肺癌标本中ANXⅠ的表达分布;蛋白组学方法描绘ANXⅠ在永生化、转化与恶性转化中的表达状况。[结果]ANXⅠ的表达分布与原发性肺癌的组织学分型相关（P<0.05）;在永生化细胞中表达丰度低,转化细胞较高,恶性转化细胞中最高。[结论]ANXⅠ可能参与原发性肺鳞癌形成的启动或促进阶段,对人支气管上皮细胞恶性转化具有较为重要的作用。     

户尘螨过敏原指纹图谱研究

户尘螨是最重要吸入物过敏原，目前户尘螨过敏反应的发病率日益增加。户尘螨过敏可表现为过敏性鼻炎、过敏性哮喘、湿疹、特应性皮炎、荨麻疹、皮肤搔痒等。螨的浸出液可用于户尘螨过敏反应的诊断和治疗，为了对螨浸出液中的螨过敏原进行鉴定和标准化，本实验初步建立了一种指纹图谱方法。户尘螨（Dermatophagoidespteronyssinus）原料购自Allergon公司，以Trizol方法提取户尘螨蛋白，应用双向电泳，在考染和银染时出现５个特征性蛋白点，１个为酸性中分子量蛋白，等电点（pI）和相对分子质量（Mr）分别为４．４和１３３０００；２个蛋白…     

MTAP在人BEP2D细胞辐射致癌模型和肺癌中表达研究

目的探索甲硫腺苷磷酸化酶(Methyhhioadenosine Phosphorylase，MTAP)在人支气管上皮BEP2D永生化细胞的恶性转化过程和临床非小细胞肺癌中的表达变化。方法培养BEP2D和BERP35T-2细胞，制备细胞总蛋白，进行双相电泳和质谱分析；选择有表达差异的蛋白质点MTAP，在细胞模型中进行NorthernBlot分析；对获得的15例肺癌标本用RT—PGR方法分析验证MTAP的表达水平。结果双相电泳发现MTAP在恶性转化细胞BERP35T-2中表达降低；Northern Blot分析表明MTAP mRNA在BEP2D永生化细胞中表达水平很高，而在BERP35T-2恶转细胞中表达极低；对15例非小细胞肺癌进行RT-PCR分析，发现MTAP在73．3％(11／15)的肿瘤组织中低表达；在中／低分化组肺癌的低表达频率(90．9％)显著高于高分化组(25％)，在腺癌与鳞癌组则没有显著性差异。结论MTAP低表达现象与肺癌恶性转化密切相关，可能发挥抑癌基因的生物学功能。     

肿瘤研究中的蛋白质组学研究策略

 众所周知，基因表达调控存在严格的时空特异性，其表达产物mRNA由于存在贮存、转运、降解、翻译调控及产物的翻译后加工，难以准确地反映蛋白质的质与量。恶性肿瘤是由环境与遗传因素相互作用而导致的一种多基因复杂疾病，严重危害人类生命健康。蛋白质组学研究直接从生物功能的执行体——蛋白质人手，能够动态、整体地考察肿瘤发生、发展过程中蛋白质种类、数量的改变，从而能够在整体水平上发掘肿瘤发病机制、肿瘤分类、早期诊断、预后判断的蛋白标志物，并寻求潜在药靶。     

手性药物的新的分离方法:超临界CO_2中分离麻黄碱

含手性中心的药学活性物质往往以对映体成对存在 ,它们的物理性质相同 ,但分子构象不同 ,由于对映体中往往只有一种具有生物活性或药学相关性 ,对映体的分离成为制药工业的关键。外消旋化合物可通过结晶法 (过饱和、蒸馏 )、光学活性溶剂或热力学等方法分离 ,当目标化合物具有羧酸或有机碱基团时 ,可通过生成非对映异构体盐来分离 ,但一般情况下需多次重结晶。本文报道一种简单、可靠的方法 ,从超临界 CO2 中结晶分离外消旋麻黄碱 -苯乙醇酸化合物 ,该法一次分离便可得到高分离度的结晶。用超临界流体溶液增强分散 ( SEDS)装置获得了纯的…     

甲硫腺苷磷酸化酶在人支气管上皮细胞辐射致癌模型中的表达变化研究

目的研究甲硫腺苷磷酸化酶（Methyhhioadenosine Phosphoylase,MTAP）在人支气管上皮细胞（BEP2D）辐射致癌恶性转化前后的表达水平变化。方法培养永生化细胞BEP2D和恶性转化细胞BERP35T-2;制备细胞总蛋白质,进行双相电泳和质谱分析;选择有表达差异的蛋白质点MTAP,在细胞模型中进行Northern Blot和Western blot分析。结果双相电泳发现MTAP在恶性转化细胞BERP35T-2中基本没有表达;Northern Blot和Western Blot分析表明MTAP基因在BEP2D永生化细胞中转录和翻译表达水平均很高,而任BERP35T-2恶转细胞中表达极低;发现MTAP基因在两种细胞中的表达差别在10倍以上。结论MTAP的低表达与辐射致肺癌的发生有密切关系,是BEP2D受到α粒子辐射后基因表达谱的主要改变之一。     

基于开放式搜索的有机磷化合物与人血清白蛋白加合物结构与位点鉴定方法研究

目的 建立针对有机磷化合物（OP）新型加合物结构和位点的发现策略。方法 采用串联测序结合开放式搜索的方式,对OP与人血清白蛋白（HSA）反应形成的加合物结构和修饰位点进行解析。结果 建立了一种研究OP暴露后新型加合物结构及加合位点的新方法,利用开放式搜索策略发现半胱氨酸（C）为OP及其水解产物结合的新位点,可产生127.1370的质量增加,对应的二级质谱特征离子m/z为128.1439。结论 所建立的OP-HSA新型加合物结构及加合位点发现通用研究策略,可用于发现OP加合新位点和新底物,有助于从分子水平提升对OP急性、慢性毒性作用机制的认识。