人血细胞DNA无酚提取法

目的 寻找最佳的从血液尤其是凝血中提取DNA的方法,减少实验和临床检测血液的用量.方法 静脉抽取30份健康体检者的血样,分别抗凝、不抗凝处理后,用经优化的不需要酶和有机溶剂的抽提程序提取DNA,通过电泳和PCR进行检测.结果 凝血和抗凝血的DNA产量分别是(40.2±8.86)mg DNA/L和(39.1±10.2)mg DNA/L;纯度分别为1.87±0.11和1.92± 0.12.所有样本的DNA分子质量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区ALU等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的.结论 该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究.     

泰山白花丹参提取物对人脐血内皮祖细胞增殖、黏附及分泌NO的影响

目的:观察单味中药泰山白花丹参提取物(SBE)对人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖、黏附及分泌一氧化氮(NO)的影响。方法:采用密度梯度离心法从脐血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度SBE继续培养24h;分别采用MTT比色法、黏附能力测定实验和硝酸还原酶法测定EPCs的增殖、黏附和分泌NO能力。结果:与对照组比较,SBE组EPCs增殖、黏附能力提高,培养上清中NO浓度增加(P<0.05),其作用在一定范围内随SBE浓度增加而增强。结论:白花丹参显著改善EPCs功能,这可能是其内皮保护的新机制。     

白花丹参叶制剂对乳腺癌BCaP-37细胞株增殖抑制的体外研究

目的 观察白花丹参叶制剂对于人乳腺髓样癌细胞株BCaP-37生长的抑制作用.方法 以体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察白花丹参叶制剂作用12h后对于人乳腺癌细胞株生长的影响.以流式细胞仪分析其对细胞周期和凋亡率的影响.结果 MTT法结果显示,白花丹参叶制剂作用12h可抑制BCaP-37的生长,并呈剂量依赖性.流式细胞仪测定结果显示,随白花丹参叶制剂浓度的增加,凋亡峰越来越显著,说明白花丹参叶制剂可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关;但对细胞周期无明显影响.结论 白花丹参叶制剂可抑制体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37增殖并促使癌细胞凋亡且呈一定的量效关系.     

白花丹参根制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白花丹参根制剂对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响.方法:用不同浓度白花丹参根制剂处理胃癌细胞BGC823后,噻唑蓝(MTT)检测细胞的相对存活率,流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测BGC823细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞形态.对结果进行统计分析,均数比较用t检验.结果:不同浓度白花丹参根制剂作用于BGC823细胞后,细胞的存活率明显下降且呈剂量依赖性(0.4 g/L:91.7%±10.6%;0.8g/L:66.8%±5.1%;1 g/L:57.5%±9.6%;1.5g/L:32.6%±7.3%;2 g/L:29.4%±9.4%).镜下可见凋亡细胞典型形态,流式细胞术分析表明经过白花丹参根制剂处理后早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数与对照组相比均显著增加(2.950%±1.575% vs 4.105%±2.393%,P＜0.05;3.848%±2.264% vs 21.465%±6.474%,P＜0.05).结论:白花丹参根制剂能有效地抑制胃癌细胞增生和诱导细胞凋亡.     

泰山白花丹参提取物对H2O2诱导的人脐血内皮祖细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究泰山白花丹参提取物对过氧化氢(H202)诱导的人脐血内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制.方法:通过密度梯度离心分离人脐血单个核细胞,EBM-2完全培养基诱导分化培养EPCs.以0.001％H2O2诱导EPCs损伤,以泰山白花丹参提取物干预,以eNOS抑制剂L-NMMA定位泰山白花丹参对EPCs的作用靶位.通过光镜观察细胞形态,以四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力,用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡变化,取各实验组上清行丙二醛(MDA)含量检测.结果:EPCs受到氧化损伤后,细胞活力明显降低,细胞凋亡明显增加,上清MDA含量明显增加,加入白花丹参提取物可明显改善上述结果,而1 mmol·L-1 L-NMMA+0.6 g·L-1白花丹参制剂+H2O2处理组与H2O2组比较细胞活力和细胞凋亡率都没有显著差异.结论:泰山白花丹参提取物对H2O2损伤后内皮祖细胞有显著保护作用,eNOS抑制剂L-NMMA能抵消这种保护作用,说明泰山白花丹参可能是通过eNOS途径对EPCs氧化应激损伤起保护作用(eNOS是白花丹参的作用靶点之一).     

从血液中提取DNA方法探讨

目的:研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法:静脉抽取血样,分别抗凝或不加抗凝处理后,提取DNA,通过电泳和PCR进行检测。结果:凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L,(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的。结论:该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究。     

菏泽市县级医院医务人员工作满意度与离职意向调查研究

目的：调查菏泽市县级医院医务人员工作满意度和离职意向现状,探讨工作满意度与离职意愿的相关性,制定降低医务人员离职,减少人才丢失的对策。方法：采用问卷调查法,以菏泽市7所县级医院908名医务人员为研究对象进行调查。结果：采用SPSS17.0软件进行结果分析,结果表明菏泽市县级医院工作满意度6个分维度水平由高到低依次为对直接上级、对同事、工作本身、总体满意度、提升机会、报酬。工作满意度各维度与离职意向呈负相关（P〈0.01）,报酬、总体满意度、工作本身3个变量联合解释离职意向总变异量的21.1%,其中报酬对离职意向的影响最大。结论：引起卫生管理部门重视,建议医院行政管理部门及时掌握医务人员的工作满意度与离职倾向现状,制定减少人才流失应对措施,并提高对福利待遇、改善工作环境、＂以人为本＂、加强人文关怀等方面问题的重视力度。