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目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western blot方法分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p-CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr约为42000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。 相似文献
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目的与方法从GenBank中下载了19株O型口蹄疫病毒的Lab、3C、3D基因,结合本实验室收录的FMDVOA/58Lab、3C、3D的序列信息,分析比较了三种FMDV蛋白酶(Lpro,3Cpro,3Dpol)的编码序列和氨基酸序列。结果这FMDV具有的蛋白酶的编码序列在突变上没有显著差异(P>0.05),而在氨基酸序列的突变上存在着显著差异(P<0.01)。通过多重比较发现Lpro与3Cpro和3Dpol在氨基酸突变上存在差异(P<0.05),而3Cpro和3Dpol之间突变差异不显著。结论利用Swiss-pdbViewer蛋白质分析软件模拟三种蛋白酶中各个突变热点氨基酸残基的替换,发现突变热点不影响三种蛋白酶的空间结构。这表明病毒基因组在复制过程中的突变只是FMDV变异的原始动力,而FMDV变异的方向性进化动力是感染FMDV的宿主细胞对病毒蛋白酶功能造成的选择压力。 相似文献
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环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用 总被引:7,自引:1,他引:7
环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。 相似文献
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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMD是OIE规定的A类动物疫病之一,严重影响畜牧业的发展,对世界公共卫生存在着巨大影响,造成巨大的经济损失,素有“政治经济病”之称。 相似文献
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目的:制备AsiaI口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法:用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白为抗原免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用SDS-PAGE电泳、间接ELISA以及微量细胞中和试验对所获得的mAb的特异性进行鉴定。结果:成功获得3株能稳定传代并分泌抗AsiaImAb的杂交瘤细胞株,分别命名为:188、5E1、5E2,其分泌的mAb为IgG1(188)和IgG2a(5E1、5E2)亚类,他们均能特异性的识别VP1重组蛋白和AsiaI型全病毒,其腹水效价在1:10^5~1:10^6。微量细胞中和试验表明该mAb能很好地识别灭活的FMDV,中和效价达1:1024以上。交叉试验表明该mAb具有高度特异性,型间无交叉反应,证明所获得的mAb均完全针对AsiaI FMDV抗原决定簇。结论:在口蹄疫病毒mAb的研究中,VP1重组蛋白有望代替活病毒来制备mAb。AsiaI口蹄疫病毒VP1 mAb的成功制备,为进一步研究和开发新型口蹄疫的检测方法和抗原表位奠定了基础。 相似文献
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病毒细胞受体是指能特异地与病毒结合,介导病毒进入并促使病毒感染宿主细胞的膜组分,被认为是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。病毒必须在细胞受体的参与下才可能入侵宿主细胞,进入扩增生命的循环,细胞也因此遭到破坏,甚至导致宿主机体的死亡。口蹄疫病毒(Foot—and—Mouth Disease Virus,FMDV)是引起口蹄疫(FMD)的病原,对口蹄疫病毒细胞受体的研究将有助于揭示口蹄疫病毒的感染途径、复制过程、致病机理和疫病预防及治疗等一系列问题,细胞受体的研究已经成为目前口蹄疫病毒研究中的重点领域,现将FMDV细胞受体研究进展综述如下。 相似文献
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口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性并可远距传播的动物传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类动物疫病之首,我国农业部也把FMD列为17个第1类动物疫病中的第1位,充分显示了国内外对FMD的关注程度. 相似文献
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目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8个分节段基因进行扩增,分别将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与同源性分析。结果CK/GS/2/99株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因的开放阅读框分别由2280、2274、2151、1683、1497、1401、759、864个碱基组成,分别编码759、757、716、560、498、466、252/97、231/122个氨基酸残基。该毒株HA上HA1和HA2裂解位点序列为PARSSR↓GLF,具有典型的低致病性禽流感病毒的特征。同源性分析显示,CK/GS/2/99株与1998-2002年间大部分中国大陆分离株遗传关系较近,尤其与CK/NX/4/99和CK/HB/31/00株遗传关系密切。结论CK/GS/2/99与大部分流行于中国内陆的H9N2亚型毒株均来源于共同的祖先毒株CK/BJ/1/94,这为了解中国H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学提供了资料。 相似文献
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病毒受体多为蛋白聚糖、糖脂或脂、糖蛋白且以单个或多个分子的复合体形式才能存在,硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)存在于细胞表面,是病毒特异性结合的主要糖蛋白受体,最初发现以硫酸乙酰肝素为受体的病毒是人类单纯疱疹病毒(HSV-1)和(HSV-2).硫酸乙酰肝素可作为多种病毒的受体,其可与病毒的多个吸附位点结合,它作为病毒受体来介导病毒进入细胞特定的部位或促进病毒与其第二受体的吸附.以硫酸乙酰肝素为受体的病毒有疱疹病毒、登革热病毒、口蹄疫病毒、人乳头瘤病毒、人免疫缺陷病毒、辛德毕斯病毒等多种病毒.研究发现,酸乙酰肝素可作为多种病毒的第一受体(表1). 相似文献
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