二甲双胍通过AMPK/STAT3信号通路抑制星形胶质细胞的反应性

探讨二甲双胍对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞反应性的作用及机制。方法 使用三因子（TNF-α、IL-1α、C1q）诱导产生反应性星形胶质细胞,RT-qPCR及Westernblot检测补体3（C3）的表达;使用5、10、20 mM浓度的二甲双胍处理,Westernblot检测星形胶质细胞中腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）与信号转导和转录激活因子3（STAT3）磷酸化水平;采用AMPK抑制剂Compound C处理,检测AMPK和STAT3磷酸化水平。结果 形态学及RT-qPCR结果显示：与对照组相比,三因子处理改变了星形胶质细胞形态并显著提高了C3的表达（P＜0.05）,表明成功建立反应性星形胶质细胞模型。RT-qPCR结果及Westernblot结果显示：与对照组相比,二甲双胍对C3表达有明显的抑制作用,呈现浓度依赖性（P＜0.05）。在诱导星形胶质细胞反应性过程中,与对照组相比,AMPK的磷酸化水平显著降低（P＜0.05）,使用不同浓度二甲双胍处理后,AMPK的磷酸化水平显著增加且呈浓度依赖性（P＜0.05）,同时信号传导及STAT3的磷酸化水平显著降低且呈浓度依赖性（P＜0.05）。AMPK抑制剂Compound C处理后显著抑制了二甲双胍导致的AMPK活性升高及STAT3活性降低,同时抑制了C3表达下调（P＜0.05）。结论 二甲双胍通过AMPK/STAT3信号通路抑制星形胶质细胞的反应性     

Spastin基因突变对斑马鱼脊髓运动神经元的作用研究

目的:微管切割蛋白Spastin是遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia,HSP)的主要致病基因,本文旨在探讨Spastin基因突变对运动神经系统的形态和功能的影响.方法:鉴定斑马鱼spast敲除突变体的纯合子和杂合子,检测包括野生型的3种基因型spast+/+、spast+/ZK...     

大鼠坐骨神经夹伤过程中腓肠肌组织Kif11和Kif15基因的表达变化

目的：研究驱动蛋白家族成员11（kinesin family member 11,Kif11）和驱动蛋白家族成员15（kinesin familymember 15,Kif15）在大鼠失神经肌萎缩及再支配过程中的表达变化。方法：建立大鼠坐骨神经夹伤模型,测定腓肠肌湿重比了解肌萎缩程度,采用足迹实验测定坐骨神经功能指数了解神经损伤再支配恢复情况,采用Real-time PCR方法检测坐骨神经夹伤后不同时间腓肠肌组织中Kif11和Kif15 mRNA水平的表达变化。结果：在神经夹伤早期（1～7 d）,腓肠肌组织中的Kif11和Kif15 mRNA迅速上升,7～14 d达到高峰,随后mRNA水平逐渐下降,至28 d时基本接近正常表达水平;同时可观察到腓肠肌湿重比及坐骨神经功能指数的恢复。结论：Kif11和Kif15 mRNA的变化与坐骨神经损伤（夹伤）引起的肌萎缩程度呈正相关。     

活体成像技术观察胶质瘤荷瘤鼠中过表达SASH1基因的作用*

目的：采用小动物活体成像技术,观察过表达SASH1对荷胶质瘤裸鼠的抗肿瘤生长作用。方法：将稳定表达GFP绿色荧光蛋白及荧光素酶报告基因（luciferase）的胶质瘤SHG-44细胞接种于裸鼠皮下,待成瘤后,将ADV4-SASH1慢病毒注射入裸鼠肿瘤组织中,对照组注射相同剂量的ADV4-NC空载体对照病毒;1周后,腹腔注射底物荧光素（luciferin）,用小动物活体成像仪采集荧光值,分析肿瘤生长情况。结果：过表达SASH1的裸鼠中有70%（7/10）肿瘤减小;对照组中有71.4%（5/7）裸鼠肿瘤增加,且有30%（3/10）裸鼠死亡。过表达SASH1 1周后肿瘤大小减小至90%,对照组肿瘤增大至166%。结论：本实验表明活体成像技术可以实时观察荷瘤鼠异位接种的胶质瘤体的生长情况,初步结果表明在胶质瘤体中过表达SASH1基因可以抑制肿瘤的生长。     

沙利度胺联合三氧化二砷抑制SMMC7721裸鼠移植瘤生长及毒副反应观察

目的：研究高低剂量沙利度胺（Tha）联合三氧化二砷（AsT）干预SMMC7721裸鼠移植瘤生长,检测移植瘤微血管密度（MVD）和核转录因子（NF—κB）表达,观察毒副反应。方法：取人肝癌细胞株SMMC7721接种于BALB／c裸鼠颈部皮下,随机分为7组。一周后按实验设计开始给药,每周称裸鼠体重,测移植瘤体积,连续给药4周。实验结束处死裸鼠,检测移植瘤MVD及NF-κB表达,鼠肺、肝、肾行HE染色,鼠血行血常规、ALT、cr分析。结果：各组间裸鼠体重差异无统计学意义（P〉0．05）。裸鼠接种成瘤率100％,各组瘤体积：组4〈组5〈组1〈组2〈组3〈PG〈NG,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各组移植瘤MVD：组4〈组5〈组1〈组2〈组3〈PG〈NG,差异有统计学意义（P〈0．05）。各组移植瘤NF—κB表达：组4〈组5〈组3〈PG〈组1〈组2〈NG,差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组肺、肝、肾组织细胞结构及裸鼠血常规、ALT、Cr检测结果与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Tha联合AsT能够降低移植瘤MVD,下调NF—κB表达,具有协同抑瘤作用,毒副反应轻微,值得进一步研究。     

沙利度胺联合三氧化二砷腹腔注射对肝癌细胞SMMC7721移植瘤生长的影响及机制

目的观察沙利度胺(Tha)联合三氧化二砷(AsT)对肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其可能作用机制。方法将35只雄性BALB/c裸鼠随机分为7组各5只,均于颈部皮下接种人肝癌细胞株SMMC7721细胞悬液(密度为5×107/mL)0.2 mL,其后按如下方法处理:高、低剂量Tha组分别腹腔注射Tha 25、2.5 mg/kg,AsT组腹腔注射AsT 2.5 mg/kg,高、低剂量Tha联合AsT组分别同前联合给予Tha、AsT,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(CTX)20 mg/kg,阴性对照组腹腔注射生理盐水20 mL/kg,均连续给药4周。观察各组裸鼠皮下移植瘤体积变化及裸鼠行动、对外界刺激的反应;用药结束后处死裸鼠,取部分瘤组织采用RT-PCR法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,免疫组化法检测Bax、Caspase-3表达。结果裸鼠移植瘤成瘤率100%,瘤体积在高剂量Tha联合AsT组<低剂量Tha联合AsT组<高剂量Tha组<低剂量Tha组低剂量Tha联合AsT组>AsT单药组>高剂量Tha组>低剂量Tha组>阳性对照组>阴性对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 Tha联合AsT对SMMC 7721移植瘤的生长具有显著抑制作用,效果优于两单药;机制分别与通过下调VEGF mRNA表达抑制肿瘤血管生成、上调Bax及Caspase-3蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡相关。     

坐骨神经夹伤与心脏毒素注射导致腓肠肌功能损伤中Calpains和FoxOs的差异表达及相关性分析***◆

背景：钙蛋白酶家族和FoxO转录因子在肌萎缩过程中发挥着重要的作用。 目的：观察钙蛋白酶家族成员及FoxO转录因子(FoxO1和FoxO3a)在心脏毒素注射与坐骨神经夹伤致腓肠肌失功能损伤中表达的变化。 方法：分别采用坐骨神经夹伤和心脏毒素注射建立大鼠腓肠肌功能损伤模型,于造模后的第3,7,14,21天取大鼠腓肠肌进行实时荧光定量PCR检测,并采用线性回归法进行相关性分析。 结果与结论：结果显示,腓肠肌组织中的钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ和FoxO3a mRNA在坐骨神经夹伤7 d达到高峰,随后下降;钙蛋白酶Ⅲ和FoxO1 mRNA在坐骨神经夹伤后14 d达到高峰,随后下降。钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ、FoxO3a mRNA在心脏毒素注射后第3天达高峰,随后逐渐下降;FoxO1 mRNA在心脏毒素注射后7 d时达最高;而钙蛋白酶Ⅲ mRNA在心脏毒素注射后3 d时表达显著下降,随后逐渐恢复至正常水平。线性回归分析结果显示,在失神经肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅲ的表达与FoxO1呈正相关(r=0.901 5);在心脏毒素注射肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅰ(r=0.898 7)和钙蛋白酶Ⅱ(r=0.937 4)表达趋势与FoxO3a呈正相关。可见,在不同的肌损伤模型中,钙蛋白酶Ⅰ和钙蛋白酶Ⅱ的表达趋势相似,而钙蛋白酶Ⅲ的表达不同。     

PBL教学法在研究生分子生物学技术课程中的探索和实践*

旨在探索将基于项目的学习（project-based learning，PBL）教学法在分子生物学技术课程中的应用，依照研究生科研项目的工作实例，重新设计分子生物学技术的课程内容，通过课前提出项目要求、课上实施解决项目问题，促进研究生在掌握分子生物学基础技术技能的同时，培养独立设计、执行实验操作和分析结果的能力，为今后的科研工作提供科学方法的培训。     

中枢神经系统与周围神经系统发育和损伤过程中微管动态性的差异比较

目的 ：通过比较微管蛋白的酪氨酸化、去酪氨酸化水平,分析中枢神经和周围神经系统神经元发育和损伤后微管动态变化。方法：分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠孕18 d(E18)胎鼠的背根神经节神经元和海马神经元,采用免疫细胞荧光化学方法检测不同修饰微管蛋白的表达和定位,对培养的神经元进行划伤,采用活细胞拍摄对神经元胞体及轴突生长进行分析比较。提取SD大鼠生后发育不同时间点的坐骨神经和脊髓组织,同时建立SD大鼠的脊髓挫伤和坐骨神经夹伤模型,于术后不同时间提取蛋白,通过Western Blot方法检测不同修饰(酪氨酸化、去酪氨酸化)的微管蛋白表达情况。结果：免疫细胞化学结果显示,与神经元种植1 d相比,在3 d时,背根神经节神经元,酪氨酸化、去酪氨酸化微管蛋白均维持较高水平,而海马神经元中酪氨酸化微管蛋白表达较低;活细胞摄像观察显示,背根神经节神经元和海马神经元在体外发育和损伤再生过程中轴突的平均生长速率差异无统计学意义,但背根神经节神经元胞体运动速率显著高于海马神经元胞体。中枢神经和周围神经发育过程中,坐骨神经组织维持较高的酪氨酸化微管蛋白水平,而在脊髓组织中酪氨酸化微管蛋白的表...     

坐骨神经夹伤与心脏毒素注射导致腓肠肌功能损伤中Calpains和FoxOs的差异表达及相关性分析

背景：钙蛋白酶家族和FoxO转录因子在肌萎缩过程中发挥着重要的作用。目的：观察钙蛋白酶家族成员及FoxO转录因子（FoxO1和FoxO3a）在心脏毒素注射与坐骨神经夹伤致腓肠肌失功能损伤中表达的变化。方法：分别采用坐骨神经夹伤和心脏毒素注射建立大鼠腓肠肌功能损伤模型,于造模后的第3,7,14,21天取大鼠腓肠肌进行实时荧光定量PCR检测,并采用线性回归法进行相关性分析。结果与结论：结果显示,腓肠肌组织中的钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ和FoxO3amRNA在坐骨神经夹伤7d达到高峰,随后下降;钙蛋白酶Ⅲ和FoxO1mRNA在坐骨神经夹伤后14d达到高峰,随后下降。钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ、FoxO3amRNA在心脏毒素注射后第3天达高峰,随后逐渐下降;FoxO1mRNA在心脏毒素注射后7d时达最高;而钙蛋白酶ⅢmRNA在心脏毒素注射后3d时表达显著下降,随后逐渐恢复至正常水平。线性回归分析结果显示,在失神经肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅲ的表达与FoxO1呈正相关（r=0.9015）;在心脏毒素注射肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅰ（r=0.8987）和钙蛋白酶Ⅱ（r=0.9374）表达趋势与FoxO3a呈正相关。可见,在不同的肌损伤模型中,钙蛋白酶Ⅰ和钙蛋白酶Ⅱ的表达趋势相似,而钙蛋白酶Ⅲ的表达不同。