脱细胞异种生物外科补片的免疫原性

文题释义：免疫原性：指能够刺激免疫系统的细胞引起某种抗原特异性免疫应答。当动物源性材料植入人体后,其细胞表面的α-Gal抗原与人体内存在的天然抗α-Gal抗体结合,会激活补体系统引起严重的超急性排斥反应;还可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用,引起异种移植排斥反应。对于异种材料植入人体所产生的潜在风险,有必要对其进行免疫原性风险评估。脱细胞技术：指通过物理、化学、生物学等一系列的方法处理同种异体的组织、器官,使其细胞内基质除去完全而保留相应的细胞外基质的方法。脱细胞技术可降低甚至除去异体组织、器官的免疫源性(如α-Gal抗原)等,降低异体生物材料移植引起的排斥反应,为异体生物材料的临床运用提供基础。背景：脱细胞异种生物外科补片的免疫原性直接关系到其植入人体后的成功与否,因而评价材料的免疫原性至关重要。 目的：评价脱细胞异种生物外科补片的免疫原性。 方法：将20只Balb/c小鼠随机分4组,每组5只：实验组与对照组背部皮下分别植入脱细胞异种生物外科补片与心包膜原材料;阴性对照组行假手术操作;阳性对照组背部皮下注射弗氏佐剂和牛血清白蛋白等体积混合液。植入4周后,记录小鼠体质量,计算各组脾脏和胸腺的脏脑系数,检测血清总IgG和IgM水平、体外淋巴细胞增殖活性及脾脏淋巴细胞亚型分布,并进行植入部位皮肤组织及脾脏、胸腺组织病理学观察。实验方案经四川省食品药品检验检测院安全评价中心实验动物管理和使用委员会批准(IACUC-2018-KYYL-008)。结果与结论：①实验组与阴性对照组体质量比较差异无显著性意义(P > 0.05),对照组大于阴性对照组(P < 0.05);②实验组与阴性对照组脾脏脏脑系数、胸腺脏脑系数比较差异均无显著性意义(P > 0.05),对照组脾脏脏脑系数大于阴性对照组(P < 0.05);③实验组与阴性对照组淋巴细胞增殖活性比较差异无显著性意义(P > 0.05),对照组高于阴性对照组(P < 0.05);④与阴性对照组相比,实验组CD3⁺CD8⁺细胞百分比降低(P < 0.05);与阴性对照组相比,对照组CD3⁺细胞、CD3⁺CD4⁺细胞、CD3⁺CD8⁺细胞、CD45⁺SSClow细胞百分比下降(P < 0.05),CD3^-CD19⁺细胞百分比升高(P < 0.05);⑤实验组、对照组血清IgM和IgG抗体水平与阴性对照组相比差异均无显著性意义(P < 0.05);⑥组织学显示,实验组与对照组脾脏和胸腺无明显病理改变,实验组植入部位无明显炎性反应,对照组植入部位出现严重肉芽肿性炎及纤维组织增生包裹、植入物坏死崩解等;⑦结果表明与原材料相比,经脱细胞处理的异种生物外科补片可有效降低免疫原性反应。ORCID: 0000-0003-3480-6101(程祥) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

HPLC测定黄连上清胶囊中大黄素、大黄酚含量

目的:建立黄连上清胶囊中大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法:HPLC测定黄连上清胶囊中大黄素、大黄酚的含量。采用InertsilC18柱,以流动相:甲醇 0. 1 磷酸溶液(85∶15);检测波长: 254nm。结果:此方法线性范围分别是大黄素 0. 013~0. 084μg(r=0. 999 9,n=5);大黄酚 0. 025~0. 16μg(r=0. 999 6,n=5)。平均回收率:大黄素 96. 77 ,RSD为 1. 06 ;大黄酚 99. 85 ,RSD为 1. 76 。结论:本方法简单、准确,可用于黄连上清胶囊质量控制。     

牛血清白蛋白残留量检测试剂盒内部参考品的制备及标定

目的    制备牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）残留量检测试剂盒的内部参考品,用于考察试剂盒的稳定性。方法   首先对乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中的3种工作液（病毒稀释液、病毒浸泡液、细胞上清液）进行BSA残留量检测。然后选择BSA含量适宜的工作液,适当稀释后制成内部参考品。由2名实验人员同时选取3个不同批号的试剂盒,在不同的日期进行3次检测,对内部参考品进行标定,并根据标定结果确定其赋值范围。分别采用方差分析和t检验对不同批号试剂盒和不同实验人员的检测结果进行比较。标定后连续8个月20次使用该参考品考察试剂盒的稳定性。结果   根据BSA残留量检测结果,选择病毒浸泡液,以疫苗冻干保护剂3倍稀释后制成内部参考品。2名实验人员的108次检测均值为33.46 ng/ml,标准差为2.15 ng/ml,变异系数为6.40%。根据标定结果,确定内部参考品的赋值范围为27.01～39.91 ng/ml。不同批号试剂盒检测结果的差异有统计学意义（F=11.497,P<0.01）,不同实验人员检测结果的差异无统计学意义（t=0.500,P>0.05）。采用5个批号试剂盒总共对该参考品进行20次检测,BSA残留量均在30.00～36.63 ng/ml范围内,均值为33.14 ng/ml,标准差为1.73 ng/ml,变异系数为5.20% ,不同批号试剂盒检测结果的差异无统计学意义（F=0.997,P>0.05）。结论   制备的BSA残留量检测试剂盒内部参考品可用于试剂盒的稳定性考察。