ST2作为Th2细胞亚群标志以及其与支气管哮喘的关系的研究

各自主要分泌IFN γ和IL 4的Th1和Th2亚群 ,与临床疾病的关系十分密切。如何从表面标志上加以区分是一项迫切需要解决的问题。ST2是近年来提出的Th2细胞的稳定标志物。本工作在体外成功地诱导人脐带血T细胞向Th1或Th2分化的基础上 ,应用逆转录PCR分析了ST2mRNA的表达特点。证实ST2在人Th2细胞上的选择性表达。为了探索ST2、Th2与支气管哮喘的关系 ,本工作进一步检测了正常人和支气管哮喘患者外周血单个核细胞中 β actin、ST2以及IFN γ和IL 4的mRNA水平。结果显示 :支气管哮喘患者ST2mRNA水平升高 ,IL 4水平也明显升高 ,但IFN γ无变化。这提示ST2作为Th2细胞的标志物 ,有可能成为Th2极化性疾病如哮喘发病机制研究的一个参考性标志 ,至于ST2是否有可能作为治疗的靶分子 ,有待进一步探讨     

鼠外周血中转基因胎儿细胞的检测及意义

目的 探讨仔鼠出生前后小鼠胎儿细胞在母鼠体内存在的情况，为应用循环于母血中的胎儿细胞进行基因诊断提供科学依据。方法 将非转基因的正常母鼠和以HS2、HS3元件、β-珠蛋白基因启动子指导的红系特异表达绿色荧光蛋白（GFP）基因的转基因公鼠交配，仔鼠出生前后采集母鼠的外周血用流式细胞仪检测其中表达GFP细胞的比例，并用PCR对母鼠和仔鼠的鼠尾DNA及母鼠的外周血进行检测。结果 在仔鼠出生前母体外周血中未检出表达GFP的细胞，而分娩后1～3周此类细胞含量达到峰值，4～5周后将逐步消失。PCR检测证实母鼠体内没有外源GFP基因的DNA片断，但分娩后其外周血中则存在GFP基因阳性片断，这与荧光激活细胞分选仪（FACS）的检测结果一致。结论 转基因细胞是一种良好的标记物，可以用来观察胎儿细胞在母体中存在的规律，为使用母体外周血进行基因诊断提供了依据。     

免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用

目的在胎山羊宫内移植人造血干细胞(hHSC)获得人／山羊嵌合体基础上，应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法对7头经荧光激活的细胞分选(FACS)、荧光原位杂交(FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊，在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织，制作石蜡切片，然后采用免疫组织化学的EnVision系统，用特异性人增殖期细胞核抗原(PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原(HSA)单抗及人β—2微球蛋白(β—2M)单抗鉴定这些组织中的人源细胞。结果7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞，肺和肾组织内有PCNA及β—2M抗体阳性染色细胞，正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色，而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞。结论胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活，并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞。免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符。此外，在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞。     

流式细胞术检测人/山羊嵌合体中人源细胞方法的建立与应用

目的 建立应用流式细胞术检测人/山羊嵌合体中人源细胞的方法.方法 通过宫内移植的方法将标记有绿色荧光蛋白(GFP)的人造血于/祖细胞(MIG细胞)移植入胎山羊腹腔内,从而获得人/山羊嵌合体模型(MIG羊).采集MIG羊的外周血,以数十种鼠抗人的抗体标记,筛选出对人源细胞特异性强而与山羊细胞无或仅有微弱交叉反应的抗体,列人流式细胞仪常规检测的首选抗体,继而在非移植山羊的外周血中加入不同比例(25%、50%、75%和100%)的人脐血细胞,用CD+34表面抗体标记来观察人脐血细胞和人CD+34细胞的分布,以决定"门"的区域和大小;取MIG羊的肝脏,应用流式细胞术检测灌流后肝实质细胞中GFP细胞的比例及DNA含量.结果 筛选出CD7、CD15、CD38、CD45CD20CD34CD14和血型糖蛋白A(GPA)等8种单抗作为检测嵌合体中人源细胞的首选抗体;确定了进行流式细胞分析时"门"的大小和区域;MIG羊肝实质细胞中,GFP+细胞的比例为29.1%(29 100/100 000);DNA含量测定结果显示MIG羊肝组织分选获得的GFP+细胞主要呈现2个峰,其位置与人的双峰位置相对应.结论 流式细胞术是研究干细胞在体内分化、归巢和生物学特征的快速、简便、有效的方法;表面抗体以及"门"的选择对于准确检测人/山羊嵌合体中人源细胞至关重要.