基孔肯亚病毒人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

目的　在CHO细胞中表达基孔肯亚病毒人 鼠嵌合抗体 ,并对其活性进行分析。方法以质粒pcDNA5 /FRT为骨架 ,应用pCI dhfr1(本室构建并保存 )的dhfr基因和hCMV启动子及SV4 0polyA ,构建了含有共扩增基因的哺乳动物双启动子表达载体 ,RT PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因 ,与人IgG1轻重链恒定区基因融合后亚克隆到表达载体pA的多克隆位点 ,构建了表达质粒pA HL ,脂质体转染CHO(dhfr )细胞 ,撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高MTX的浓度 ,筛选表达量高的克隆 ,扩大培养、收集上清 ,并纯化 ,纯化的嵌合抗体进行SDS PAGE、Western印迹、抗原结合活性和微量细胞中和实验。结果　在MTX的浓度为 2× 10 -7mol/L时 ,获得稳定表达细胞株 ,表达量为 5mg/L。结论　成功地在CHO(dhfr )细胞表达了具有中和活性的基孔肯亚病毒人 鼠嵌合抗体 ,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础。