Osteoglycin高表达降低小鼠肝癌Hca-F细胞淋巴环境中MMPs分泌能力

目的：研究Osteoglycin表达与肿瘤细胞分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）的关系。方法：构建真核表达载体pIRESpur03 Osteoglycin（＋），将其转染至高淋巴道转移能力小鼠肝癌Hca—F细胞，接种于615小鼠皮下，体内试验评价转移能力；同期采用酶谱法体外试验评价不同环境中Hca—F细胞表达Osteoglycin与其分泌MMPs的关系。结果：转染pIRESpuro3 Osteoglycin（＋）的Hca—F细胞Osteoglycin在mRNA和蛋白水平表达显著增高，体内试验显示，其外周淋巴结转移率明显降低（P=0．028）；体外试验表明，转染Osteoglycin基因显著降低了Hca-F细胞淋巴环境中MMPs分泌能力（P〈0．05或P〈0．01），然而未能影响肝匀浆或脾匀浆环境或DMEM培养基中肿瘤细胞MMPs分泌能力。结论：高表达Osteoglycin降低小鼠肝癌Hca—F细胞淋巴环境中MMPs分泌能力，抑制肿瘤细胞MMPs分泌能力可能是Osteoglycin调控肿瘤淋巴道转移机制之一。     

高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株抑制性消减杂交文库的构建

应用抑制性消减杂交（suppression subtracted hybridization,SSH）技术,分别构建2个不同淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株的SSH文库,高转移文库以高转移能力细胞株Hca-F为检测子（tester）,同源的低转移能力细胞株Hca-P为驱赶子（driver）;低转移文库则相反.随机筛选2个文库阳性克隆进行测序,并在GenBank数据库中进行同源性比较.成功构建高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株SSH文库,高、低转移文库中分别包含995个及967个阳性克隆;其中,95%的阳性克隆含有300bp～1 000bp不等的插入片段;随机测序显示,文库中含有已知的基因、ESTs及与任何序列无同源性的新基因片段.     

高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库的建立

目的:以抑制性消减杂交技术分离高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞HcaF和HcaP间差异表达的基因。方法:采用抑制性消减杂交技术,以高低转移力小鼠肝癌细胞HcaF为检测子,以低转移力HcaP细胞为驱赶子,分离高转移力癌细胞中高表达的基因的cDNA片段。将差异表达基因的cDNA片段插入T/A克隆载体,并通过热转化的方法转化大肠埃希菌DH5α,建立了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库。以菌液PCR的方法检测随机挑选的白色菌落中插入片段的出现频率。提取14个重组质粒进行序列分析。结果:在消减文库中共获800个白色菌落,对随机挑选的160个白色菌落进行菌液PCR扩增,发现95%的白色菌落中含有100～700bp的插入片段。对重组质粒的序列分析和同源性比对发现,所获的14个序列中3个为已知基因,分别来自小鼠热休克蛋白、ribosomalproteinS13、ethanolinduced6基因;4个可能来源于新基因;3个与3个不同的EST同源。结论:成功构建了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库,为今后高通量筛选癌淋巴道转移相关基因,奠定了坚实的基础。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡及拓扑异构酶Ⅱ的影响

目的观察华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及拓扑异构酶Ⅱ表达的影响。方法分为对照组与实验组(3个剂量0.10,0.21,0.42μg·mL-1华蟾素注射液);用MTT法观察华蟾素对HepG-2细胞增殖的影响;用流式细胞术法检测华蟾素对HepG-2细胞周期的影响;用逆转录—多聚酶连反应法检测华蟾素对肝癌HepG-2细胞拓扑异构酶Ⅱ(TOPO酶Ⅱ)的mRNA水平表达的影响;用蛋白免疫印迹法观察华蟾素对HepG-2细胞中TopoⅡ蛋白表达的影响。结果华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,呈时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期,可明显下调TopoⅡmRNA(P<0.05)及蛋白的表达(P<0.05),均呈剂量依赖性。结论华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,下调TOPOⅡ的表达是其可能的药效之一。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝还原法（MTT）观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;采用原位缺口末端标记法（TUNEL）及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用逆转录—多聚酶链反应技术（RT-PCR）检测华蟾素注射液对HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA水平表达的影响。[结果]华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和浓度依赖性;华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性（P〈0.05）;PT-PCR法检测表明华蟾素注射液抑制HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA表达,表现浓度依赖性。[结论]华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能通过下调TopoⅠ、TopoⅡ表达实现的。     

DIFFERENT EFFECT OF MOUSE HEPATOCARCINOMA CELLS WITH DIFFERENT METASTATIC POTENTIAL ON HOST IMMUNE SYSTEM

Metastasis is the most lethal attribute of cancer[1-3] and lymph nodes are often the first organ to develop metastasis and also a bridgehead for further metastasis[4,5]. A pair of synogenetic mouse hepatocarcinoma cell lines Hca-F and Hca-P present specific potential of lymphogenetic metastasis when inoculated subcutaneously in 615 mice. Hca-F shows a high metastatic potential (>80%), while Hca-P a low one (<30%)[6]. Some researches have showed that there is no difference in metastatic ra…     

shRNA沉默osteoglycin基因表达提高小鼠肝癌Hca-P细胞淋巴结转移能力

[目的] 研究osteoglycin表达与肿瘤转移的关系.[方法] 构建osteoglycin反义表达载体,将其转染至小鼠肝癌Hca-P细胞,评价osteoglycin表达对Hca-P细胞转移生物学行为的影响.[结果] 转染osteoglycin反义表达载体的Hca-P细胞迁移能力和侵袭能力显著提高;体内试验显示,其外周淋巴结转移率明显提高;然而细胞增殖能力及黏连能力未见明显变化.[结论] 低表达osteoglycin提高Hca-P淋巴结转移能力.     

Osteoglycin高表达降低小鼠肝癌Hca-F细胞淋巴结转移能力

[目的] 研究osteoglycin表达与肿瘤转移的关系.[方法]构建真核表达载体pIRE-Spuro3 osteoglycin( ),将其转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F,评价osteoglycin表达对Hca-F细胞转移生物学行为的影响.[结果]转染plRESpuro3 osteoglycin( )的Hca-F细胞迁移能力和侵袭能力显著下降;体内试验显示,其外周淋巴结转移率明显降低;然而细胞增殖能力及粘连能力Ζ未见明显变化.[结论]高表达osteoglycin降低Hca-F细胞淋巴结转移能力.