精子细胞输精管及附睾管内转染法建立转基因小鼠

目前，生产转基因动物主要的方法仍是受精卵显微注射法，所需设备复杂，技术难度大，成功率低。为此，人们都在寻找一种新的方法。利用精子携带外源DNA进入卵母细胞的精子载体法是设想之一。九十年代初，Mare和Rottmann等分别报导了电击法和脂质体转染法让精子在体外携带上外源DNA，再行体外受精的方法，引起了学者们的广泛关注，但其结果不稳定，阳性率极低。我们采用脂质体包裹外源DNA，直接注入输精管内，数天后与雌鼠交配的方法，得到了较为满意的结果，现简报如下。1材料和方法将构建好的WAP－t－PA质粒与脂质体混合制备成转染…     

狂犬病毒的新型疫苗株SAG_1

<正> 法国一实验室从狂犬病毒株 SAD(Street-Alaba-ma-Dufferin)的衍生株SADBern中筛选出一双位无毒变异株 SAG_1(SAD-Avirulent-Gif)。此毒株与亲本株比较,不论其免疫剂量和接种途径如何,对成年小鼠均表现非致病性,且在口服免疫狐狸时与亲本株一样具有良好的免疫原性。此毒株现在看来具有很大的发展潜力,本文对此毒株的研究情况作一介绍。     

电穿孔导入法在外源基因转染家兔精子的作用研究

<正> 目前建立转基因动物最常用的方法仍然是经典的受精卵显微注射法.但这一方法存在诸多的不足之外:所需的仪器设备价格昂贵;技术要求高;成功率低.电穿孔导入法,是通过高压电场使细胞膜通透性发生暂时性的可逆变化,从而使DNA分子进入细胞内的一种物理方法.目前已有一些穿孔导入法促使外源基因转染精子的报道,但由于各处实验室所使用的电击仪器不同,电击缓冲液及电击条件也不相同,因此,各实验结果的报道并不一致.我们用假阴道法采集家兔精子,经电击缓冲液洗涤3次,调整精子浓度至10~6个/ml.电击悬液总体积100ml,加入环状重组质粒pV-WAP-tPA(浓度20μg/ml).使用BAERON600型基因转移仪,设电击条件:周期10;脉冲数1000;脉冲宽度100;距离2.0mm;电压2000,4000,6000;脉冲时间500,1000,1500ms.另设电击悬液中不加质粒作     

大鼠β乳酪蛋白启动子调控的人尿激酶原乳腺定位表达载体的构建

大鼠β乳酪蛋白启动子调控的人尿激酶原乳腺定位表达载体的构建岳军明，张宏权，王允玲，周廷冲，王会信，俞炜源，殷震（军事医学科学院基础医学研究所）尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ），亦称单链尿激酶，是一种新型的溶血栓制剂，对血栓有特异的亲和性，临床应用引起全身系统...     

狂犬疫苗口服免疫的研究现状

狂犬疫苗口服免疫的研究现状长春农牧大学研究所病毒室岳军明，侯世宽，殷震狂犬病口服免疫的概念最早是在６０年代由北美的一些科学家提出的。之后研究人员对不同的狂犬病毒疫苗株就其安全性、有效性及稳定性和投送系统（Ｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ）在实验室进行了探...     

乳腺定位表达载体在小鼠乳腺中的活性检测

目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中,待小鼠产子、泌乳后,检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 ng/ml。结论 此方法可以作为从动物整体水平上检测乳腺定位表达载体表达效力的一种简便而有效的方法。     

人促红细胞生成素在CHO细胞上的表达

为了获得人促红细胞生成素(EPO)的高效表达,以EPO gDNA 为基础构建了两个真核表达载体pDE、pCE,将它们分别经脂质体转染CHO-dhfr-细胞,其48h瞬时表达量分别为27.5ng/ml与88.90ng/ml.然后用氨甲喋呤(MTX)对转染细胞进行加压并挑选细胞克隆,共获得3株高效表达EPO的工程细胞株A,B,C,其中A来自质粒pCE,B和C来自pDE,在2×10-6mol/L的MTX的压力下,它们48h的最高表达水平分别为A:8.7μg/ml,B:10.76μg/ml,C:16.44μg/ml.经网织红细胞法测得它们均具有体内生物活性.