淋球菌外膜蛋白Porin I多抗的黏附抑制作用研究

目的:研究兔抗淋球菌外膜蛋白Porin I(P I)的多克隆抗体阻断淋病奈瑟菌对泌尿生殖道上皮的黏附作用。方法:将自行构建表达的淋球菌GST-P I融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,获得兔抗P I蛋白的多抗血清,纯化后得到P I-IgG抗体。建立淋球菌感染BALB/c小鼠模型,并通过观察阴道黏膜改变、分泌物涂片、冲洗液培养及阴道组织病理变化评价兔抗P I-IgG抗体对淋球菌黏附的影响。结果:经1 m g/m l兔抗P I-IgG处理后3 h再接种淋球菌的BALB/c小鼠生殖道黏膜未见红肿及脓液,分泌物涂片及阴道冲洗液未检及淋球菌,阴道组织病理检查也未见炎症细胞浸润。而低于浓度1 m g/m l及长于3 h兔抗P I-IgG处理的小鼠阴道组织病理可检及炎症细胞,但其它检查结果阴性。结论:纯化的抗淋球菌GST-P I融合蛋白的多克隆抗体,能有效抑制淋病奈瑟菌对小鼠泌尿生殖道上皮的黏附与感染,阻断作用及持续时间与抗体浓度有关。     

淋病奈瑟菌外膜Porin I蛋白多价抗血清的黏附抑制功能

大量资料证实淋病奈瑟菌入侵组织早期首先需黏附至泌尿生殖道上皮细胞表面,然后才能进入机体引起一系列病变。因此黏附是淋球菌致病的先决条件,一旦失去黏附能力,就不能引起淋病^[1,2]。我们在成功地构建、表达并纯化淋球菌外膜GST-PI融合蛋白后(GST:谷胱苷肽S转移酶)^[3],将其免疫家兔制备了PI蛋白的家兔多价抗血清,并观察了该多价抗血清对淋球菌黏附上皮细胞的抑制作用。现报道如下。     

淋球菌外膜Porin I蛋白多价抗血清的制备及其临床应用初探

目的 制备淋球菌外膜GST-PI融合蛋白多价抗血清,并探讨该多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合情况.方法 重组的淋球菌外膜GST-PI融合蛋白免疫家兔,获得多价抗血清;并用双向免疫扩散法鉴定家兔多价抗血清的效价.家兔多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合采用试管凝集法,出现棉絮状沉淀则为阳性;并把同一标本的试管凝集法结果与淋球菌培养结果相比较,观察两者的阳性符合率.同时以生理盐水和非淋菌性尿道炎患者的泌尿生殖道分泌物标本作为对照.结果 成功免疫家兔并获得了PI蛋白多价抗血清,经鉴定多价抗血清的效价达1：8;淋球菌培养阳性的35例分泌物标本中,试管凝集法阳性23例,两方法结果符合率为65.71%.而对照组试管凝集法结果均为阴性.结论 淋球菌外膜PI蛋白不仅具有一定的免疫原性,而且其免疫家兔产生的多价抗血清与淋病患者的分泌物标本有良好的结合率,特异性高.有望经纯化、标记后得到一种新的简单快速的淋病诊断试剂盒.     

系统性硬皮病肾危象2例病因分析

报告2例系统性硬皮病肾危象.2例患者均有系统性硬皮病病史,在接受治疗的过程中,1例因发生过敏性休克、1例因自行骤减糖皮质激素导致系统性硬皮病症状加重,并出现肾功能衰竭.肾脏穿刺组织病理检查示:肾小球硬化,肾小管坏死,小血管内膜增厚伴硬化.经文献分析显示过敏性休克、骤减糖皮质激素可能分别足硬皮病肾危象的诱发因素之一.     

白癜风皮损旁黑素细胞自噬相关蛋白表达的研究

目的通过比较体外培养的白癜风黑素细胞与正常黑素细胞中自噬标志物微管相关蛋白轻链3（LC3II/I）、自噬相关蛋白p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关基因5（Atg5）的表达差异,分析其在白癜风发病中的可能作用。方法分离并原代培养来自于泛发型白癜风患者皮损旁皮肤的黑素细胞（白癜风黑素细胞组）以及正常志愿者皮肤的黑素细胞（正常对照组）,采用免疫印迹法分别检测不同来源黑素细胞中自噬标志物LC3II/I、自噬相关蛋白p62、mTOR和Atg5的表达,同时以改良的多巴氧化法测定细胞中的酪氨酸酶活性。结果LC3II/I及Atg5的表达在白癜风黑素细胞组中明显高于正常对照组（t=10.36、13.01,均P＜0.01）,而p62、mTOR蛋白水平及酪氨酸酶活性在白癜风黑素细胞组中明显低于正常对照组（t=5.12、7.22、36.51,均P＜0.01）。结论体外培养的白癜风黑素细胞存在自噬的活化及上调并伴有黑素细胞黑素合成功能的下降,提示自噬可能与白癜风的发病有关。     

皮肤转移性印戒细胞癌1例

报告1例皮肤转移性印戒细胞癌。患者,女,56岁。躯干四肢多发疣状斑块1年半,左侧头面部疼痛5个月。右下眼睑肥厚性丘疹。组织病理检查示真皮散在或成片异型细胞浸润,核深染偏一侧,胞浆丰富,部分细胞呈印戒样。免疫组化示CK(+),AB/PAS(+)。诊断为皮肤转移性印戒细胞癌。骨髓活检组织病理示骨髓转移性印戒细胞癌。全身骨ECT示肿瘤全身骨转移。妇科B超示右侧附件区实质性包块为右卵巢转移可能。未能发现原发肿瘤。     

小干扰RNA对人乳头状瘤病毒6bE7基因表达的沉默作用

目的研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA(siRNA- HPV-6bE7)对靶基因表达的沉默作用。方法建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况。结果用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48 h,50 nmol/L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用最强(抑制率87.05%),1nmol/L抑制作用较低(9.14%);而在293T细胞,10nmol/L的siRNA对靶基因表达的抑制效应最大(78.87%),1nmol/L仍有一定抑制作用(46.92%)。50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后,靶基因的mRNA表达在24 h内开始受抑制(32.47%),48h作用最强(74.72%),96h作用很低(8.91%);25nmol/L和10nmol/L的siRNA转染293T细胞后,均在24h内起效(26.66%、20.31%),抑制作用至少能维持72h(65.93%、35.23%)。结论siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用,在不同细胞株达到最大抑制效应的siRNA浓度不同,但时效曲线的变化趋势基本一致,siRNA均在24h内起效,48～72h达到高峰,抑制作用至少能维持72h。本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据。     

淋病奈瑟菌外膜Porin I蛋白基因的构建、表达和鉴定

目的：构建、克隆淋病奈瑟菌外膜PorinI(PI)蛋白基因，并进行表达、纯化和鉴定。方法：用PCR法克隆淋病奈瑟菌外膜PI蛋白基因，再与pGEX-4T-2载体连接成表达重组体pGEX-4T-2/PI；经大肠杆菌P2392表达后，用SDS-PAGE、切胶、电洗脱回收等方法纯化GST-PI融合蛋白；然后用特异性淋球菌外膜PI蛋白的单克隆抗体进行斑点免疫层析试验鉴定该蛋白。结果：成功地获取了pGEX-4T-2/PI表达重组体，经诱导表达后能获得高表达的GST-PI融合蛋白，其相对分子质量为60000；斑点免疫层析试验显示其淋病奈瑟菌外膜PI蛋白特异性的。结论：本研究将有利于进一步研究淋病奈瑟菌外膜PI蛋白的功能。     

尖锐湿疣皮损中的端粒酶活性测定

目的 探讨端粒酶在尖锐湿疣皮损中的表达情况。方法 采用端粒重复序列扩增文件－酶标法（TRAP－ELISA）测定尖锐湿疣皮损中粒酶的活性，并与正常皮肤和恶性肿瘤对照比较。结果 尖锐湿疣皮损的端粒酶活性明显高于正常皮肤组织，但又显著低于恶性肿瘤组织和细胞株。结论 端粒酶不仅可以在恶性肿瘤中表达，也可以在一些非恶性皮肤组织 中表达；并且认为尖锐湿疣皮损中端粒酶活性的增加可能与尖锐疣的发病机制，尤其是与其表皮细胞的乳头瘤样增殖有某种关联。