小鼠抗人CD52功能性抗体的制备与鉴定

目的 鼠抗人CD52抗血清的制备与功能鉴定.方法 由人Hut-78细胞提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD52基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),用脂质体转染法转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、FACS、免疫组织化学技术检测目的蛋白的表达.用CD52合成肽免疫小鼠,通过间接ELISA和流式细胞术分析抗血清,用MTS实验鉴定抗体对白血病LCL细胞系的增殖抑制作用.结果 建立了稳定转染的CHO细胞系.鉴定出有高效价抗体存在.MTS实验检测免疫血清有抑制LCL细胞生长作用.结论 功能性抗体制备成功并建立了稳定转染CD52的CHO细胞系.     

放疗联合自身免疫细胞治疗宫颈癌的临床疗效

目的:对放疗联合自身免疫细胞治疗宫颈癌效果进行探究和分析.方法:从2010年10月到2012年10月本院收治的所有宫颈癌患者中随机选取90例作为对象,随机分为治疗组和对照组,对照组采用单纯放疗治疗,治疗组采用放疗联合自身免疫细胞治疗,对比两组患者的生活质量和临床疗效.结果:治疗组患者的临床疗效显著优于对照组,P<0.05,治疗组患者的生活质量显著提升优于对照组,P<0.05,有统计学意义.结论:采用放疗联合自身免疫细胞治疗宫颈癌能够有效提高临床疗效,这表明放疗联合自身免疫细胞治疗在宫颈癌的临床治疗中可以广泛推广.     

基因疫苗脾内免疫制备抗人c-kit单克隆抗体及其初步鉴定

目的：用基因脾内免疫方法制备抗人c-kil单克隆抗体，并通过对抗体生物学特性的初步研究，确定该方法制备抗体的可行性。方法：利用分子克隆方法构建重组质粒pcDNA3．1／c-kit胞外区，脾内免疫BALB／c小鼠一次，通过杂交瘤技术制备抗人c-kit单克隆抗体。采用流式细胞术、Western blot方法初步鉴定制备的抗体。结果：目的基因片段c-kit外区正确插入质粒pcDNA3．1，重组质粒免疫小鼠后通过杂交瘤技术获得了三株分泌抗人c-kit胞外区的杂交瘤细胞株6CA、2C5和5D5。其亚类均为IgM类，识别不同的抗原表位，其特异性与抗人c-kit抗体一致。结论：可用基因脾内一次免疫法制备抗人c-kit单克隆抗体。     

CD59天然抗原的制备及纯化

目的 构建人matureCD59-mFC-pBOS真核表达载体,转染COSa细胞进行瞬时表达,对表达产物进行鉴定及纯化.方法 在人Jurkat细胞中提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法 扩增matureCD59基因,定向克隆入带有mFC标签的真核表达载体pBOS中,大提质粒后通过电转仪转染COSa细胞,ELISA及特...     

CD52抗原的研究进展及其抗体在临床中的应用

人类CD52属于一个未命名的短链GPI锚定糖蛋白家族,其基因定位于人类1号染色体（1p36.1）,分子量为25～29KD.广泛分布于淋巴细胞、单核细胞等造血细胞上和雄性生殖系统中的某些细胞表面,在造血干/祖细胞表面没有表达.由于①其具有在淋巴细胞和很多造血系统恶性肿瘤细胞上的高密度分布;②其分子交联化可引起一系列信号传导,从而导致细胞因子分泌,细胞增殖、生长抑制及凋亡;③其分子在细胞表面排列整齐、密度大,与抗体结合后结合补体的能力受抗体亚类影响较小等特点,抗CD52单克隆抗体（CAMPATH-1系列）已经被广泛地用于临床治疗.CD52分子自身直接的生物学功能目前还知之甚少,被人们利用的大部分都与其GPI锚定蛋白的特性相关.除CAMPATH-1系列抗CD52单抗以外,HI186因识别表位不同,其在生物学功能和临床应用上的差别值得关注.     

盛夏享口福——调出美味

已经进入到伏天了,数伏天的特点除了气温比较高,关键是闷热,这种情况下很多朋友休息不好,接踵而来的马上就是食欲不好,所以今天谈到调味品,能够促进食欲,改善大家的饮食状况。     

CD52抗原的研究进展及其抗体在临床中的应用

人类CD52属于一个未命名的短链GPI锚定糖蛋白家族,其基因定位于人类1号染色体(1p36.1),分子量为25~29KD。广泛分布于淋巴细胞、单核细胞等造血细胞上和雄性生殖系统中的某些细胞表面,在造血干/祖细胞表面没有表达。由于①其具有在淋巴细胞和很多造血系统恶性肿瘤细胞上的高密度分布;②其分子交联化可引起一系列信号传导,从而导致细胞因子分泌,细胞增殖、生长抑制及凋亡;③其分子在细胞表面排列整齐、密度大,与抗体结合后结合补体的能力受抗体亚类影响较小等特点,抗CD52单克隆抗体(CAMPATH-1系列)已经被广泛地用于临床治疗。CD52分子自身直接的生物学功能目前还知之甚少,被人们利用的大部分都与其GPI锚定蛋白的特性相关。除CAM-PATH-1系列抗CD52单抗以外,HI186因识别表位不同,其在生物学功能和临床应用上的差别值得关注。     

抗人CD33单克隆抗体(HIM3-4、WM53、M195)抗原识别表位的初步研究

目的：确定抗人CD33单克隆抗体（HIM3-4、WM53、M195）抗原识别表位所在区域，进而阐明抗体识别表位不同于其介导的生物学作用之间的关系。方法：将四个CD33胞外区不同长度的基因片段定向克隆入真核表达载体pDisplay，构建成真核表达载体pDisplay／EP1、2,3、4，分别将空载体和构建的质粒通过磷酸钙沉淀法转染入293T细胞，瞬时转染48小时后利用流式细胞仪通过抗血凝素A（HA）抗体标记以检测各质粒在细胞表面的表达，同时检测HIM3-4、WM53、M195和不同区段的结合活性。结果：抗人CD33单克隆抗体HIM3-4能识别pDisplay／EP1、2、3表达的蛋白，WM53能识别pOisplay／EP1表达的蛋白，M195则均能识别四个片段所表达的蛋白。结论：HIM3-4、WM53、M195识别的CD33抗原表位分别位于115—170、17—60、170—262氨基酸。     

特异性HER2单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备特异性识别天然构象的人表皮生长因子受体-2(HER2)的单克隆抗体(mAb),用以指导Herceptin的临床应用.方法:利用纯化的原核表达的HER2融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS1骨髓瘤细胞按常规方法融合,ELISA法进行杂交瘤的初步筛选.构建HER2酵母展示系统,用酵母cell base ELISA进行第2次筛选.将筛选到的阳性克隆株进行亚克隆获得稳定分泌细胞株,用免疫组织化学的方法鉴定其与SK-Br-3细胞和293a细胞的反应性.结果:通过ELISA筛选得到168株阳性杂交瘤,用酵母cell base ELISA最终得到8株阳性杂交瘤,此8株免疫组化检测均与SK-Br-3细胞反应,而与293a细胞无反应.结论:成功制备了8株识别天然构象的HER2的mAb,能够用于免疫组化,为临床上使用Herceptin进行个性化治疗乳腺癌打下了基础.     

人CD34真核表达载体构建及稳定转染细胞系的建立

目的:构建人CD34真核表达载体,转染到3T3细胞获得稳定表达CD34的细胞株。方法:在人KG1a细胞中提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD34基因,定向克隆入真核表达载体pCI-neo,通过电转仪转染3T3细胞,流式细胞仪分选建立稳定转染的3T3细胞系,用RT-PCR、FACS检测目的蛋白的表达。结果:构建了重组载体pCI-neo/CD34,建立了稳定表达CD34的3T3细胞系。结论:重组载体pCI-neo/CD34构建成功和稳定转染3T3-CD34细胞系的建立为制备抗人CD34单克隆抗体(mAb)做了准备,为进一步研究CD34分子的功能奠定了基础。