探索建立医学检验专业实验教学模式

重庆医科大学医学检验系 1 984年在国内首批成立。创始之初 ,由于国内无既定的模式 ,因此探索建立一套适合医学检验学生的理论和实验教学模式 ,培养理论水平丰厚、实验操作技能扎实、学生能力素质较高的毕业生一直是我们教学改革的目标。建系 1 7年来 ,经过长期的探索总结 ,我系在实验教学中形成了贯穿学生科研能力训练 ,重视学生实践能力和创造性思维培养 ,紧密结合临床的实验教学模式。该教学模式的实施 ,有效地提高了教学质量 ,强化培养了学生动手能力和思维能力 ,成效显著 ,受到学生的一致好评。总结长期实验教学的经验 ,我们重点抓了以…     

医学检验专业本科人才培养的探索

本文概括了重庆医科大学高等检验医学教育从创建到发展21年来,在学科建设、人才培养和优化课程体系等方面的探索和改革实践。初步形成了适应我国检验工作岗位的医学检验专业本科人才培养体系。     

新型二聚体蝎型探针技术在结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应中的应用

目的利用二聚体蝎型荧光探针技术，建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品，自行设计二聚体蝎型探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果（1）成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3IR。（2）建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^7拷贝／μ1；灵敏度：10^1拷贝／μ1；重复性：批内变异系数（CV）为2．35％，批间CV为3．17％，日间CV为4．06％；特异性100％；（3）初步临床应用证明：该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高，检测时间更短和成本也明显降低。结论本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础。     

蛋白质凝胶电泳银染色法的改进

目的探索一种快速、灵敏的蛋白质凝胶电泳银染色方法.方法对蛋白质凝胶电泳银染色过程中的多种因素进行了实验探索,在此基础上探索出一种改良的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法.结果改进方法灵敏度为Coomassie Brilliant Blue R-250法的100倍以上,对牛血清白蛋白的检测限在0.5ng以下,整个染色过程不超过60min,染色重复性好.结论改进后的方法比以前使用的方法简便、快速、灵敏、成本相对低廉.     

促凝剂和肝素处理标本对锂盐浓度监测的影响

目的探讨肝素钠抗凝剂和促凝剂处理标本对血锂浓度监测的影响。方法选择临床服用碳酸锂治疗达稳态的住院患者,使用真空采血系统分别采集普通管血液标本和含有肝素钠抗凝剂及促凝剂标本,在IMS972电解质分析仪上测定Li+浓度,比较两者结果的差异。结果(1)不使用添加剂处理的标本(普通血清)Li+浓度为(0.62±0.21)mmol/L;肝素钠抗凝血浆Li+浓度为(0.62±0.21)mmol/L;促凝剂处理的血清Li+浓度为(0.64±0.16)mmol/L。不同方式处理的标本间Li+浓度均无统计学差异(F=1.154,P>0.05)。(2)肝素钠抗凝剂和促凝剂处理标本与普通血清Li+浓度之间呈高度线性相关(r=0.993～0.995,P<0.001)。(3)肝素钠抗凝剂、促凝剂添加剂、普通血液标本不分离血凝块(红细胞)室温放置8h,Li+浓度较放置前结果增高,两者比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。(4)放置8h后,不同方式处理的标本间Li+浓度无统计学差异(F=2.769,P>0.05);并且线性相关有统计学意义(r=0.952～0.998,P<0.001)。结论促凝剂和肝素处理标本适用于锂盐的快速测定,若不能立即测定的标本应及时分离血清。     

通过矿化提高蛋白疫苗稳定性的研究

目的:通过原位矿化的方式制备肺炎链球菌蛋白质的磷酸钙矿化颗粒,并评价其在蛋白酶和热处理后的稳定性。方法:通过分子克隆技术表达并纯化蛋白野生型溶血素(WT-PLY)和其无溶血活性突变体(ΔA146PLY),在富含Ca~(2+)和PO_4~(3-)的弱碱性溶液(pH=7.5)中进行生物矿化,制备磷酸钙矿化的蛋白颗粒;通过TEM、FESEM、EDS等分析矿化颗粒的大小、形貌及表面成分;通过抗蛋白酶K降解实验、溶血实验等分析矿化疫苗的稳定性;通过体外细胞实验和体内动物实验评估热处理后矿化蛋白疫苗的保护效应。结果:在1 ml矿化体系中含有360μg蛋白、8.8μmol Ca~(2+)、8.8μmol Mg~(2+)和5.28μmol PO_4~(3-)的条件下,均可制备出WT-PLY和ΔA146PLY的矿化颗粒,BCA检测其包封率分别为44.4%和52.2%;矿化颗粒WT-PLY@CaP和ΔA146PLY@CaP在蛋白酶K处理15 min内其抗酶解活性高于其可溶性蛋白;矿化颗粒WT-PLY@CaP在55℃处理5 min和45℃处理60 min后,其溶血活性较其可溶性蛋白高;矿化颗粒ΔA146PLY@CaP在55℃处理5 min和45℃处理60 min后仍保持与未处理蛋白一致的免疫活性。结论:生物矿化有助于提高蛋白稳定性。这为疫苗蛋白及其他蛋白制品稳定性的提高提供了一种简便易行的矿化方法。     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆(血清)DNA如Ras和p53基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述，并简要展望了循环核酸测定的应用前景。     

环境因素诱导细菌致病基因的表达及其调节

研究细菌致病基因的表达及其调节特性 ,有助于定义潜在的毒力因子 ,鉴定新的致病基因和毒力因子。本文综述了特定的宿主产物、温度、Fe离子浓度、渗透压等环境信号诱导细菌致病基因表达的机理 ,以及两成分调节系统和DNA超螺旋的改变对细菌致病基因表达的调节。     

PspA免疫小鼠抗肺炎链球菌侵袭性感染研究

目的:获取原核表达的肺炎链球菌PspA重组蛋白并研究其作为疫苗的价值. 方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将编码PspA抗原表位在内的部分序列克隆到原核表达载体PET-32(a)内,酶切及测序鉴定重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,将获得的重组蛋白用Western Blot鉴定,镍柱纯化并透析除盐. 用重组蛋白免疫动物,观察PspA抗体对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用. 结果:DNA序列与GenBank中的数据相符,所表达纯化的蛋白经Western Blot证实为PspA,其抗体在肺炎链球菌感染中对小鼠有保护作用. 结论:重组PspA刺激产生的抗体能够有效抵抗肺炎链球菌TIGR4侵袭性感染,该重组蛋白可作为肺炎链球菌多肽联合疫苗的组成部分之一.     

临床检验诊断学实验教学示范中心建设的探索与实践

重庆医科大学临床检验诊断学实验教学中心以学科建设为先导，以实验室建设为平台，构建了以训练学生临床实验诊断能力为目标、以基本检验技术、临床检验技术两大模块为主线，将基本实验技能、综合实验能力和科研创新能力3个层次实验相结合的实验教学体系；形成了以学生为主体，以创新人才培养为核心，促进学生的知识、能力、素质的协调发展的教育思想；探索临床检验诊断学实验教学的新模式。