病毒基因组耦联报告基因用于筛选适宜丙型肝炎病毒培养的亚细胞克隆株

目的 快捷筛选到适合丙型肝炎病毒(HCV)培养的细胞系.方法 将荧光素酶报告基因耦联到JFHlHCV基因组中,检测了多个人肝细胞系对HCV的易感性,进一步利用耦联荧光素酶的HCV复制子模型筛选并经过IFN-α处理更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株.结果 实验结果显示BEL7402、BEL7404、QSG7701、SMMC7721、QGY7701、QGY7703和HepG等肝细胞均不易感染HCV,仅限于Huh7细胞能被HCV感染.同时实验获得了更适宜HCV培养的Huh7亚细胞克隆株——Huh7G3.结论 在利用IFN-α处理细胞的过程中,通过检测荧光素酶活性,显示IFN-α对HCV亚基因组的复制抑制效果具有剂量依赖效应,研究同时显示:HCV复制子细胞能否抵抗HCV的超感染依赖于细胞内是否存在HCV RNA复制而不是其复制水平的高低.     

shRNA沉默神经导向分子5A基因对A375细胞系增殖、转移和侵袭能力的影响

目的：探讨慢病毒介导短发夹RNA（shRNA）沉默神经导向分子5A（Semaphorin 5A）基因对恶性黑素瘤A375细胞系生物活性的影响。方法针对Semaphorin 5A设计2对shRNA引物及1对阴性对照引物,构建慢病毒载体,转染至人胚肾上皮HEK293T细胞系收获慢病毒,利用慢病毒感染A?375细胞系并通过嘌呤霉素筛选,成功获得稳定转染细胞系,实验分为实验组细胞（A375?shRNA1和A375?shRNA2）、阴性对照组细胞（A375?con）及空白对照组细胞（A375）。通过反转录PCR（RT?PCR）、Western印迹比较实验组细胞、阴性对照组细胞及空白对照组细胞Semaphorin 5A mRNA、蛋白表达水平的差异。噻唑蓝（MTT）检测细胞生长情况;侵袭试验及划痕试验比较转染前后细胞的侵袭运动能力。结果 Semaphorin 5A成功转染A375细胞后,经嘌呤霉素筛选,成功获得稳定转染实验组A375?shRNA2细胞系及对照组A375?con。反转录PCR及Western印迹检测,干扰后实验组A375?shRNA2较对照组A375?con、A375 Semaphorin 5A的转录水平及蛋白表达水平表达下调。MTT实验结果显示,A375?con与A375细胞生长差异无统计学意义（P>0.05）,A375?shRNA2细胞生长明显减慢,与A375和A375?con比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验结果显示,A375?shRNA2划痕处细胞无明显迁移,划痕未得到修复,而A375及A375?con划痕处细胞最终几乎将划痕覆盖。侵袭实验结果显示,A375组与A375?con组穿过的细胞数差异无统计学意义（P>0.05）;而A375?shRNA2通过小室的细胞明显少于A375及A375?con组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论慢病毒介导shRNA沉默Semaphorin 5A基因能使A375中的Semaphorin 5A有效下调,并抑制细胞的生长,降低细胞的侵袭以及运动能力。     

微针皮内免疫增强新型冠状病毒S1蛋白免疫原性研究

目的 研究新型皮内免疫方法对新型冠状病毒重组S1(rS1)蛋白的免疫效果。方法 112只BALB/c小鼠随机分为对照组[只注射Al(OH)3佐剂]、5μg S1组、5μg S1+Al(OH)3组、10μg S1组、10μg S1+Al(OH)3组、20μg S1组、20μg S1+Al(OH)3组,每组分别进行肌内免疫和微针皮内免疫,各组免疫所用S1蛋白与佐剂Al(OH)3质量比为1∶10,共14组,每组8只。免疫程序为0、2和4周3次免疫。通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）比较不同免疫途径和免疫剂量诱导的IgG、IgG1和IgG2a结合抗体水平。用SARS-CoV-2野生型（WT）和Omicron(BA. 5)假病毒来评估中和抗体的水平。通过酶联免疫斑点实验（enzyme-linked immunosorbent spot,ELISpot）对细胞免疫反应进行评估。抗体终点滴度和中和数据通过Kruskal-Wallis检验进行分析,细胞免疫数据使用单因素方差分析进行分析。结果 皮内免疫新型冠状病毒rS1蛋白诱导IgG...     

HIV-1疫苗诱导广泛中和抗体应答

 诱导中和抗体是许多有效疫苗的关键特征,也是在动物模型中唯一证明能完全阻断HIV感染的免疫应答.但是,HIV-1广泛的遗传变异性和复杂的免疫逃避机制,已经使得迄今为止所有利用HIv-1疫苗免疫原诱导有效中和抗体应答的尝试受到阻碍.最近对病毒免疫逃避机制有了进一步了解,同时对病毒包膜糖蛋白结构和免疫生物学特性的研究也不断深入,这些都将有助于克服困难,设计出新的免疫原诱导产生保护性抗HIV-1抗体.     

HIV-1C疫苗研究进展

 对于HIV-1,抗逆转录病毒药物能显著改善HIV/AIDS病人的健康并延长其寿命.但高昂的费用和治疗条件令大多数HIV患者望而却步,尤其在感染水平高、公共资源极度匮乏的发展中国家.到2004年底,撒哈拉以南非洲地区有2540万HIV感染者,该地区迄今仍是HIV-1C感染最严重的地区.几种候选HIV-1C疫苗目前正在进行临床前和临床研究.这些候选疫苗的设计主要是来自HIV-1C的HIV-1调控蛋白和结构蛋白.本文重点介绍HIV-1C疫苗的研究进展.     

HCV多表位抗原融合肽的表达与抗原性的研究

目的观察HCV复合多表位抗原融合肽的抗原性,探讨利用这种抗原融合肽制备的抗体在丙型肝炎抗原检测方面的潜在可行性。方法将人工合成的HCV复合多表位抗原基因B2克隆到表达载体pThioHis A中,并在大肠杆菌中表达融合蛋白(Trx-B2),纯化该蛋白后免疫小鼠及家兔,分析表达产物的免疫特异性及抗原性。结果融合蛋白(Trx-B2)能在原核表达系统中高效表达,并可诱发小鼠及家兔产生高滴度的特异性HCV抗体。结论偶联了融合蛋白的HCV复合多表位抗原具有良好的抗原性,其免疫实验动物后产生的抗体有望用于HCV的抗原检测。     

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言，单纯疱疹病毒的基因组巨人，基因数日繁多，根据其基因转录的先后顺序，分为立即早期、早期利晚期基因二类。作为病毒首先表达的立即早期基因，它们的表达产物都为非结构蛋白，可对病毒的复制进行调控，决定了病毒进入细胞后的命运。因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义     

流行性腮腺炎的流行病学及疫苗相关并发症的探讨

流行性腮腺炎为全世界常见的传染病之一,其临床病理除表现为腮腺炎本身外,尚可引起睾丸炎、卵巢炎、无菌性脑膜炎、耳聋等严重并发症及后遗症.流行性腮腺炎发病率极高,在大规模免疫接种疫苗后,发病率大大降低,但近年来又出现在免疫接种后人群中发病率增高及暴发流行的趋势.接种流行性腮腺炎单价减毒活疫苗及麻疹-腮腺炎-风疹三联疫苗后可引发腮腺炎、无菌性脑膜炎等相关并发症.