KLF4转染对口腔鳞癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察KLF4转染对人口腔鳞癌细胞系SCC15侵袭能力的影响.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,构建pReceiver-Lv105/KLF4慢病毒表达载体,包装病毒颗粒,感染SCC15后,puromycin筛选KLF4稳定表达的细胞系.荧光显微镜和免疫荧光细胞化学鉴定病毒感染成功.然后通过划痕实验检测KLF4转导对细胞体外迁移能力的影响.Transwell细胞侵袭实验检测KLF4转导对细胞侵袭能力的影响.实时荧光定量PCR检测与细胞侵袭和迁移密切相关的因子MMP-9和Twist1的表达.结果 与对照载体转导组SCC15/Lv105细胞相比,SCC15/KLF4细胞中KLF4的表达明显增强.SCC15/KLF4细胞的相对迁移率显著高于SCC15/Lv105细胞(P＜0.01).SCC15/KLF4组的侵袭穿膜细胞数明显多于SCC15/Lv105组(P＜0.05).另外,SCC15/KLF4细胞中MMP-9和Twist1 RNA的表达也高于对照组SCC15/Lv105细胞,其中MMP-9 RNA的表达升高更为显著(P＜0.01).结论 KLF4转导SCC15细胞后,可能通过增强MMP-9和Twist1的表达促进细胞的迁移和侵袭能力.     

宿主基质金属蛋白酶在乳牙牙本质胶原降解中的作用

目的 研究乳牙牙本质中的基质金属蛋白酶在乳牙牙本质胶原降解中的作用.方法 因滞留拔除的正常乳牙制备牙本质粉,分为空白组、醋酸氯己定组和6-去甲基-6-脱氧-4-去二甲氨基四环素(CMT-3)组;每组6份标本,每份标本50.0mg.各组标本置于脱矿液中6h,人工唾液中18h,进行pH循环,共7次.醋酸氯己定组和CMT-3组的脱矿液和人工唾液中分别加入0.2％醋酸氯己定和0.02％ CMT-3.收集各组的脱矿液和人工唾液的上清液,用羟脯氨酸酶联免疫试剂盒分别检测各组脱矿液和人工唾液上清中的胶原降解量.结果 空白组的脱矿液和人工唾液上清中的胶原降解量均高于醋酸氯己定组和CMT-3组,差异有统计学意义(P＜0.05).醋酸氯己定组和CMT-3组的胶原降解量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乳牙牙本质中的基质金属蛋白酶活化后可降解牙本质胶原,使用基质金属蛋白酶抑制剂可抑制牙本质胶原的降解.     

Garcinol对人口腔鳞癌细胞的抑制作用研究

目的 观察Garcinol对人口腔鳞癌细胞系SCC15增殖、细胞周期、凋亡和克隆形成能力的作用.方法 培养人口腔鳞癌细胞系SCC15,采用不同浓度的Garcinol处理细胞后,通过MTT法检测对细胞增殖的影响,PI单染色法流式细胞仪检测对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验检测对细胞克隆形成能力的影响.结果 Garcinol能显著抑制SCC15细胞增殖(P＜0.01),并呈浓度和时间依赖性.Garcinol能抑制SCC15细胞周期由G1期向S期转变(P＜0.01),并呈浓度依赖性.Garcinol还能够诱导SCC15细胞凋亡(P＜0.01),并呈浓度依赖性.同时,Garcinol能抑制SCC15细胞的克隆形成能力(P＜0.01),并呈浓度依赖性.结论 Garcinol作为一种化学预防制剂,对人口腔鳞癌细胞SCC15具有显著的抑制作用,其机制主要包括抑制SCC15细胞增殖、细胞周期和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞系Nrf2通路的激活作用

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)对人口腔鳞癌细胞系SCC-15中氧化应激Nrf2通路的作用。方法通过体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-15,采用细胞免疫荧光法检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游基因Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)表达水平的影响,计数平均光密度值。同时采用蛋白免疫印迹方法定量检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1和醌氧化还原酶表达水平的影响。结果不同浓度的AS2O3对Nrf2、血红素氧合酶1和醌氧化还原酶均有一定的激活作用,并呈剂量依赖关系。结论 AS2O3可激活口腔鳞癌细胞系SCC-15的Nrf2信号通路,具有促进抗氧化基因表达的作用。     

姜黄素和乳香酸对人口腔表皮样癌KB细胞中花生四烯酸代谢通路COX-2和5-LOX的作用

目的：观察姜黄素和乳香酸对人口腔表皮样癌细胞系KB中花生四烯酸代谢通路环氧化物酶（cyclooxygenase,COX）-2和5-脂氧化物酶（lipoxygenase,LOX）的作用。方法：培养人口腔表皮样癌KB细胞,采用不同浓度的姜黄素和乳香酸及二者联合处理KB细胞24、48、72h,光镜下观察不同浓度药物作用时,细胞形态的变化及贴壁生长的情况,MTT方法检测其对细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI染色法检测对KB细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western-blotting法检测花生四烯酸代谢通路中COX-2、5-LOX表达。结果：光镜下观察发现,姜黄素和乳香酸能一定程度上抑制KB细胞的贴壁生长。MTT结果显示,姜黄素和乳香酸均能抑制KB细胞增殖,呈现一定的浓度和时间依赖关系。流式细胞检测结果表明,姜黄素和乳香酸均能促进KB细胞凋亡,呈现一定的浓度依赖关系。两种药物联合应用抑制细胞增殖和促进凋亡的作用明显强于单独作用。RT-PCR及Western-blotting结果提示,姜黄素能抑制花生四烯酸代谢通路中限速酶COX-2和5-LOX的表达,乳香酸可以抑制5-LOX表达,且成一定的剂量相关性,两者联合应用时对COX-2和5-LOX的表达均有抑制作用,尤其是对5-LOX通路的抑制,联合应用较任何一种药物单独应用作用显著增强。结论：姜黄素能抑制人口腔表皮样癌细胞KB的增殖,促进凋亡,并能抑制炎症代谢通路中COX-2和5-LOX的表达,乳香酸能抑制人口腔表皮样癌细胞KB的增殖,促进凋亡,且能抑制5-LOX表达,提示天然植物药姜黄素和乳香酸可能通过抑制花生四烯酸代谢通路中COX-2、5-LOX的表达而发挥一定的口腔癌化学预防作用。     

亚甲蓝对玻璃离子水门汀物理特性的影响

目的为清晰辨别充填后玻璃离子水门汀和牙体组织间的界限,将亚甲蓝溶液加入玻璃离子水门汀中,通过观察亚甲蓝溶液对玻璃离子水门汀显微硬度、吸水性和溶解性的影响,探讨使用亚甲蓝改变玻璃离子水门汀颜色的可行性。方法将1%亚甲蓝染液1μl加入100μl的玻璃离子液中调匀,按产品说明书的粉液比要求调拌玻璃离子水门汀制作测试片,以未添加亚甲蓝的玻璃离子水门汀测试片为对照组,每组各制备40个。测量玻璃离子水门汀固化后1h、1周、2周的显微硬度及1周的吸水性和溶解性。结果亚甲蓝组和对照组玻璃离子水门汀的显微硬度、吸水性及溶解性差异无统计学意义（P〉0.05）。结论万分之一含量的亚甲蓝即可改变玻璃离子水门汀颜色,但对材料的表面硬度、吸水性和溶解性无明显影响。     

三氧化二砷联合放疗对口腔癌移植瘤小鼠治疗作用的研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3)和低剂量放疗联合应用对口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型的治疗作用.方法 将人口腔鳞癌细胞株Tca8113接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型;随机分为4组:对照(A)组、As2O3(B)组、放疗(C)组和As2O3放疗联合治疗(D)组,每组6只.自肿瘤接种后6 d开始:B组和D组腹腔内注射As2O3;C组和D组接受放射治疗;A组腹腔注射生理盐水.停药一周后处死动物,测量瘤块体积,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组织化学法检测各组标本中增殖相关蛋白Ki-67、凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、血管内皮损伤标志物von Willebrand Factor(vWF)的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(microvessel density,MVD)并进行统计学分析.结果 C、D组的移植瘤体积显著低于A组(P<0.05),D组与B、C组相比亦有显著降低(P<0.05).B、C、D组移植瘤生长抑制率分别为20%、57%、82%.免疫组化结果显示:D组中Ki-67在的表达及MVD值明显低于其他三组,Cleaved Caspase-3的表达显著高于其他三组,统计学均有显著性差异(P<0.01);与A组相比,B、C、D组Ki-67、Cleaved Caspase-3的表达以及MVD值均有显著性差异(P<0.001).结论 As2O3能够提高放疗对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用,其抗肿瘤作用的可能机制为抑制肿瘤细胞增殖和血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡.     

Neuropilin-1基因在CML骨髓基质细胞中的表达及其意义

目的　了解Neruophlin -1基因在慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓基质细胞中的表达情况 .方法　收集 14例CML和 2 0例正常对照骨髓标本 ,分离单个核细胞 .进行体外长期培养 ,收集贴壁细胞 (骨髓基质细胞 ) .利用RT -PCR方法分析两组骨髓基质细胞中的cDNA ,了解Neuropilin -1基因表达情况 .结果　建立了CML和正常人骨髓基质细胞培养方法 ,CML骨髓基质细胞中的Neuropilin -1基因表达率 (50 % )明显低于正常对照 (85% ) (p <0 .0 5) .结论　参与调控骨髓基质细胞的Neuropilin -1基因可表达于大部分正常人和部分CML患者骨髓基质细胞中 ,Neuropilin -1基因在部分CML骨髓基质细胞中的表达缺失可能与其调节造血功能异常有关     

Neuropilin-1基因在急性非淋巴细胞白血病骨髓基质细胞中的表达

目的 :了解neruophlin 1(NP 1)基因在急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)骨髓基质细胞中的表达情况。方法 :收集 12例ANLL和 2 0例正常对照骨髓标本 ,分离单个核细胞。进行体外长期培养 ,收集贴壁细胞 (骨髓基质细胞 )。利用逆转录 -聚合酶链反应扩增两组骨髓基质细胞中的cDNA ,了解NP 1基因表达情况。结果 :建立了ANLL和正常人骨髓基质细胞培养方法 ,NP 1基因在ANLL骨髓基质细胞中的表达率为 (4 7.1% ) ,明显低于正常对照 (85 % )P <0 .0 5。结论 :参与调控骨髓基质细胞的NP 1基因可表达于部分ANLL和大部分正常人的骨髓基质细胞中 ,NP 1在ANLL患者骨髓基质细胞中的低表达 ,可能与其调节造血功能异常有关。     

蜂胶涂膜抗乳牙人工龋的体外研究

采用混合培养变形链球菌和远缘链球菌形成体外致龋环境的方法，造成乳牙人工龋，选用蜂胶涂膜观察其对乳牙人工龋的预防效果，并与氟保护漆进行对比，为临床应用天然蜂胶制剂作为防龋药物提供理论依据。