乙醇对大鼠骨骼肌胰岛素信号传递分子表达的影响

目的　探讨乙醇对大鼠骨骼肌葡萄糖摄取能力和胰岛素受体 (IR)、胰岛素受体底物 1(IRS1)和胰岛素受体底物 2 (IRS2 )及葡萄糖转运体 4(glut4)表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠 2 0只 ,随机分为对照组和饮酒组 ,每组 10只。饮酒组每天乙醇灌胃 1次 ,乙醇量为 5g (kg·d) ;对照组每天蒸馏水灌胃 1次 ,蒸馏水量 5g (kg·d)。喂养时间 5个月。测大鼠空腹血糖和胰岛素、口服糖耐量 2h血糖 ;体外胰岛素刺激实验检测骨骼肌糖摄取能力 ;用RT- PCR和Westernblot法测定IR、IRS1和IRS2mRNA和蛋白表达水平 ,Real- timePCR测定glut4mRNA水平。结果　与对照组相比 :(1)饮酒组大鼠空腹血糖、空腹血胰岛素和口服糖耐量 2h血糖未见差异 ;(2 )饮酒组大鼠骨骼肌细胞基础和胰岛素刺激后糖摄取能力显著下降 (P <0 . 0 5 ) ;(3 )饮酒组大鼠骨骼肌glut4mRNA水平显著下降 (饮酒组 :△CT =5 . 3 7± 0 .2 4,对照组 :△CT =4. 86± 0 .3 1,P <0 .0 1) ;(4 )饮酒组大鼠骨骼肌IR、IRS1和IRS2mRNA及蛋白水平明显增加 (P <0 . 0 5 )。结论　长期摄入乙醇可以通过下调glut4表达而损害大鼠骨骼肌胰岛素敏感性 ,而胰岛素受体及其底物 1、2表达呈代偿性上调。     

长期饮酒对大鼠睾丸睾酮合成和雄激素结合蛋白mRNA表达的影响

目的探讨饮酒对大鼠睾丸组织睾酮合成和雄激素结合蛋白（ABP）mRNA表达的影响。方法雄性Wistar大鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，即对照组（蒸馏水5g·kg^-1·d^-1）；大剂量饮酒组（酒精量5g·kg^-1·d^-1）；中剂量饮酒组（酒精量2．5g·kg^-1·d^-1）；小剂量饮酒组（酒精量0．5g·kg^-1·d^-1），喂养时间5个月。ELISA测定睾酮含量，RT—PCR测定睾丸组织外周型苯二氮革受体（PBR）、PPARα和ABP mRNA水平。结果与对照组相比，（1）大剂量饮酒组大鼠睾丸组织睾酮含量下降31．13％（P〈0．05），中剂量饮酒组下降26．8％（P〈0．05），小剂量饮酒组下降14．2％（P〉0．05）；（2）各饮酒组PBR mRNA水平明显降低（均P〈0．05），PPARα mRNA水平也明显降低（均P〈0．05）；（3）各饮酒组ABP mRNA水平明显下降（均P〈0．05）。结论长期饮酒可显著降低大鼠睾酮合成，PBR和PPARα表达降低是其可能机制之一；长期饮酒还可抑制大鼠ABP表达，影响睾酮生物学效应的发挥。     

饱和脂肪酸对AMPKa表达和活性的影响

目的探讨饱和脂肪酸对大鼠骨骼肌蛋白激酶(AMPKa)亚基表达及活性的影响,确定其在脂毒性发生中的地位和作用,为有效预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,即对照组、高脂组和高脂加AMPKa激活剂组[二甲双胍50 mg/(kg.d),n=10]。喂养20周后,测定大鼠空腹和服糖后2 h血糖;用体外骨骼肌糖摄取试验评价大鼠骨骼肌胰岛素敏感性,Western blot法测定大鼠骨骼肌中AMPKa亚基和磷酸化AMPKa亚基蛋白水平。结果(1)与对照组比较,高脂组大鼠空腹血糖增加21.5%(P<0.05),服糖后2 h血糖增加28.3%(P<0.05),骨骼肌基础和胰岛素刺激后的糖摄取分别下降37.2%(P<0.05)和57.89%(P<0.01);(2)高脂组大鼠骨骼肌P-AMPKa和总AMPKa亚基蛋白水平分别下降46.1%(P<0.05)和79.4%(P<0.05);(3)与高脂组比较:二甲双胍显著上调AMPKa亚基的表达(P<0.05)和活性增加(P<0.05)。结论饱和脂肪酸通过降调AMPKa亚基表达和活性诱导大鼠胰岛素抵抗。     

长期摄入不同剂量乙醇对大鼠骨骼肌G11 α表达及胰岛素抵抗的影响

目的：观察G蛋白家族中G11α和Gqα mRNA在乙醇诱导下对大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的作用.方法：①实验于2003-09/2005-03在山东省立医院中心实验室完成.选用雄性Wistar健康成年大鼠40只.随机将大鼠分为4组,对照组、大剂量饮酒组、中剂量饮酒组、小剂量饮酒组,每组10只.对照组：胃管灌注蒸馏水5.0 g/（kg&;#183;d）,1次/d;大、中、小剂量饮酒组：胃管灌注乙醇量5.0,2.5,0.5g/（kg&;#183;d）,1次/d,每组均喂养5个月.②采用强生血糖仪测定空腹血糖和糖负荷后2 h血糖.③采用液体闪烁计数仪分别测量基础状态下、胰岛素刺激后的组织非特异吸收的2-D-3H葡萄糖量.基础状态葡萄糖摄取=单位重量基础状态肌肉计数-单位重量煮沸变性肌肉计数;胰岛素刺激后葡萄糖摄取=单位重量胰岛素刺激后肌肉计数-单位重量基础状态肌肉计数.④采用反转录聚合酶链反应法测定G11α和Gqα mRNA水平.采用蛋白质印迹实验测定G11α和Gqα蛋白水平.⑤各组间比较采用单因素方差分析.结果：大鼠40只均进入结果分析.①各饮酒组大鼠空腹血糖和糖负荷后2 h血糖与对照组相近.②大、中剂量饮酒组大鼠基础状态骨骼肌糖摄取量与对照组比较,分别下降29%,72%（P＜0.05）;胰岛素刺激后,分别下降27%,61%（P＜0.05）;小剂量饮酒组大鼠无明显变化.③大、中、小剂量饮酒组大鼠骨骼肌G11α mRNA表达与对照组比较,分别下降57%,42%,38%（P＜0.05～0.01）;Gqα mRNA表达无明显变化.④大鼠长期摄入乙醇后骨骼肌G11α和Gqα蛋白水平变化与mRNA水平变化趋势一致.结论：①乙醇喂养5个月后,大鼠机体水平上没有表现出明显的糖代谢紊乱.②摄入乙醇剂量为5.0 g/（kg&;#183;d）和2.5 g/（kg&;#183;d）5个月后,大鼠骨骼肌产生明显的胰岛素抵抗.③长期摄入乙醇可影响大鼠骨骼肌G11α表达,并呈剂量依赖性.④各饮酒组大鼠骨骼肌Gq α mRNA表达及其蛋白水平变化不明显.     

AMPK在高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原过度表达中的作用

目的 观察高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原蛋白表达水平的变化,以及这种变化与AMP活化蛋白激酶（AMPK）的关系。方法 实验分4组：对照组（糖浓度5.6 mmol/L）,高糖组（22.0mmol/L）,低浓度5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸（AICAR）组（0.5mmol/L AICAR+高糖）,高浓度AICAR组（1.0mmol/L AICAR+高糖）。孵育24h后,用RT-PCR法测定AMPKα1 mRNA水平,用Western blot法分别测定总AMPKα蛋白（AMPK）、磷酸化AMPKα蛋白（p-AMPK）和Ⅳ型胶原蛋白α5（COL4α5）亚单位的表达水平。结果 高糖组AMPKα1 mRNA水平低于对照组（p＜0.01）;高糖组总AMPKα蛋白和磷酸化AMPKα蛋白表达水平均低于对照组（p＜0.01）,高糖组COL4α5亚单位表达水平高于对照组（p＜0.01）;AMPK激活剂AICAR可在不同程度上纠正上述变化。结论 高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原蛋白表达水平上调,这可能与AMPK表达下调及其活性降低有关。     

饮酒习惯与心脏-代谢危险因素的相关性

目前,对饮酒习惯的可变性及其对心血管系统的累积有害效应所知甚少.在大多数关于饮酒对长期健康状况影响的研究中,都是假设受访者既往的饮酒习惯相当稳定,然后根据某一时间点的饮酒情况估计总的饮酒量.     

大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响

目的 探讨高糖环境下大黄素能否通过抑制系膜区p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的过度活化而改善系膜细胞的收缩功能。方法 培养系膜细胞,调整培养液为以下5组：正常糖组（糖浓度5.6mmol/L,NG组）、高糖组（糖浓度30mmol/L,HG组）、低质量浓度大黄素组（50mg/L大黄素+高糖,LE组）、高质量浓度大黄素组（100mg/L大黄素+高糖,HE组）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662组（10μmol/L GW9662+高糖+高质量浓度大黄素,GW组）。系膜细胞收缩力以细胞收缩前后表面积的变化表示,采用Western blot和Real time PCR法测定p38MAPK的活性及PPARγ的表达水平。 结果 高糖组p38 MAPK的活性增加,系膜收缩功能明显下降（P<0.05）;大黄素组能明显抑制p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能,且具有剂量依赖性（50mg/L大黄素组p38活性降低了40%,100mg/L组降低了73%,P均<0.05）;大黄素组PPARγmRNA水平及其蛋白水平均明显升高（P均<0.05）;PPARγ抑制剂GW9662能有效地阻断大黄素所产生的保护效应（P<0.05）。结论 高糖环境下,大黄素通过激活PPARγ抑制系膜区p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能。     

西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉VCAM-1、NF-κB及PPARs的影响

目的观察西洛他唑对糖尿病大鼠主动脉血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、核因子(NF)-κB及过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR s)的影响,探讨西洛他唑影响VCAM-1表达的上游信号通路。方法腹腔注射链脲佐菌素(65 mg.kg-1)制备糖尿病模型,正常对照组大鼠腹腔注射柠檬酸钠缓冲液(NC,n=8)。随机将成模的32只糖尿病大鼠分为糖尿病模型组(DM,n=12)、高剂量西洛他唑组(GX,27mg.kg-1.d-1,n=10)与低剂量西洛他唑组(DX,9 mg.kg-1.d-1,n=10)。治疗8 wk,采用免疫组织化学法检测各组主动脉组织VCAM-1表达及P65亚基核转位情况;原位杂交和凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测主动脉VCAM-1 mRNA表达及NF-κB-DNA结合活性;RT-PCR或Real-Time PCR检测PPARα、PPARγmRNA表达。结果①与正常组相比,糖尿病大鼠主动脉内皮VCAM-1及其基因表达升高(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化增强(P<0.01),PPARγmRNA表达为正常大鼠的1.7倍,而PPARαmRNA表达下降(P<0.01)。②与糖尿病组相比,高剂量西洛他唑治疗组主动脉内皮VCAM-1及其基因表达降低(P<0.01),NF-κB P65核转位及活化被抑制(P<0.01),PPARγmRNA表达比糖尿病大鼠下降73%,而PPARαmRNA则上升(P<0.05)。结论高剂量西洛他唑抑制糖尿病大鼠主动脉内皮表达VCAM-1,这可能与其对PPARs表达、NF-κB核转位及其DNA结合活性的影响有关。     

Snail 在AP-1介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的：探讨Snail 在AP-1介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用及对细胞外基质分泌的影响。 方法：将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。细胞免疫化学法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,ELISA法测定培养液上清中纤连蛋白（FN）的浓度变化,用凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变, RT-PCR法检测vimentin mRNA和Snail mRNA的表达,Western blotting检测E-cadherin的表达。结果：高糖作用HK2细胞48h后,高糖组FN浓度较正常对照组显著增加(P<0.05),而AP-1阻断组浓度显著低于高糖组(P<0.05);高糖能够刺激AP-1结合活性,AP-1阻断剂可显著抑制AP-1的活化;高糖组Snail mRNA表达水平较正常对照组显著增加（P<0.05）,而AP-1阻断组其水平显著低于高糖组（P<0.05）;与正常对照组相比,高糖组E-cadherin蛋白表达明显降低（P<0.05）,而AP-1阻断组其水平显著高于高糖组（P<0.05）;高糖组vimentin mRNA和蛋白水平明显高于正常对照组（P<0.05）,而AP-1阻断组显著低于高糖组（P<0.05）。结论：高糖可导致肾小管上皮细胞AP-1活化,诱导Snail表达而下调E-cadherin,同时导致vimentin蛋白的表达、细胞外基质FN的分泌增加,诱导其表型转化,参与糖尿病肾病的纤维化进程。     

不同剂量乙醇对大鼠心肌糖代谢信号传递分子mRNA表达的影响

目的：观察长期摄入不同剂量乙醇对大鼠心肌糖代谢传导通路中主要信号IR、IRS1、IRS2、GLUT4、AMPKα、MEF2基因转录水平的影响,探讨乙醇影响葡萄糖转运的可能机制。方法： 雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、大、中、小剂量乙醇组。乙醇喂养22 周,留取左心室肌于液氮中保存。采用RT-PCR 检测心肌IR、IRS1、IRS2、GLUT4、 AMPKα1和AMPKα2 亚基、MEF2A和MEF2D 亚型mRNA的表达。结果：与正常对照组相比,除低剂量乙醇组MEF2D mRNA水平无明显变化外,其它饮酒组中各观察指标表达均下降（P<0.01或P<0.05）。除IR外,各饮酒组IRS1、IRS2、GLUT4、AMPKα、MEF2A、MEF2D mRNA水平的下降程度与摄入乙醇量存在剂量依赖关系,即摄入乙醇量越大,下降越明显。相关分析表明,GLUT4 mRNA 的改变与IRS1、IRS2、AMPKα、MEF2A、MEF2D的变化呈正相关,其中GLUT4 的表达水平与IRS1、MEF2A有较高相关性（r=0.683,　r=0.824,　P<0.01）。结论：长期摄入乙醇可降低大鼠心肌糖代谢信号分子的表达。