超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。     

人工骨填充椎体成形术结合椎弓根螺钉内固定治疗胸腰椎压缩性骨折

椎弓根螺钉内固定是治疗胸腰椎骨折的常用手术方式,但存在一定的内固定失败率。自2003年以来,我们采用椎弓根螺钉内固定系统结合人工骨椎体成形术治疗胸腰椎压缩性骨折45例,取得了良好效果,现总结报告如下。     

pTet-on骨骺干细胞株的建立和pTRE-甲状旁腺相关蛋白(1-36)反应质粒的构建

目的 建立pTet-on骨骺干细胞株,克隆甲状旁腺相关蛋白[PTHrP(1-36)]基因并构建反应质粒pTRE-PTHHrP(1-36).方法 用脂质体介导的基因转染技术将pTet-on质粒转染于永生化骨骺干细胞,G418筛选得到稳定克隆,再瞬时转染pTRE-2Hyg-Luc质粒并筛选出高水平诱导、低背景表达的永生化骨骺干细胞系.以RT-PCR方法获得带有酶切位点PTHrP(1-36)基因片段,与载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定.结果 筛选到1株诱导后荧光素酶的表达活性增加50倍的骨骺干细胞系;经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒.结论 筛选得到的永生化骨骺干细胞株受强力霉素诱导后能够低背景、高水平表达;成功克隆PTHrP(1-36)基因并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(1-36),为进一步精确调控PTHrP(1-36)基因的表达奠定了基础.     

跟骨骨折内骨缺损的三维重建与参数测量

目的 应用跟骨骨折CT影像资料建立跟骨内部骨缺损的数字化模型,并进行相关参数的测量,为术中是否需要植骨提供参考.方法 回顾性分析2013年至2019年于我院进行检查的62例(66足)跟骨骨折病人的CT影像资料,其中男54例,女8例,年龄为(49.0±12.7)岁(27～79岁).应用Mimics软件进行三维重建、虚拟复...     

YIGSR抑制骨肉瘤细胞分泌MMP-2和MMP-9的实验研究

[目的]研究酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽（YIGSR）对人骨肉瘤细胞MG-63分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的抑制作用。[方法]在MG-63细胞中加入0、50、100μg／ml的YIGSR，用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化和明胶酶谱分析检测MMP-2和MMP-9的变化。[结果]免疫组化结果显示随YIGSR剂量增加，MMP-2、MMP-9平均光度递减。胞浆着色变浅；RT—PCR结果显示，随YIGSR剂量增加，MMP-2、MMP-9对应电泳条带亮度逐渐减弱：明胶酶谱分析也表明，随YIGSR剂量的增加，负染条带平均光度越来越低。结果均有显著性差异（P〈0．05）。[结论]YIGSR能有效抑制人骨肉瘤细胞MG-63分泌MMP-2和MMP-9，在抑制骨肉瘤的侵袭与转移中可能会发挥一定作用。     

体外RNA干扰抑制Ezrin表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:细胞膜-细胞骨架联接蛋白(埃兹蛋白,Ezrin)参与了许多细胞的功能,包括细胞黏附、细胞运动以及细胞的生存.最近的许多研究表明Ezrin参与调控了肿瘤的侵袭与转移.然而,在骨肉瘤中,Ezrin所扮演的重要角色还没有被很清晰的阐明.本研究拟探讨Ezrin蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:以骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对Ezrin编码基因设计小干扰RNA片段,重组其shRNA(short hairpin RNA)表达载体转染入细胞,筛选稳定表达的克隆,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-Blot)方法检测转染后Ezrin的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化.结果:RT-PCR和Western blot检测显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著下调作用.骨肉瘤细胞生长速度减慢,处于分裂期的细胞比例有明显的下降,由25.05%下降到18.36%,而G1期细胞比例则由60.57%上升到67.65%.穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少,由35.9±5.6减少为22.5±2.8(P＜0.01).结论:Ezrin在骨肉瘤的增殖和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子.     

YIGSR五肽对骨肉瘤细胞分泌VEGF和MMP-3的抑制作用

目的探讨酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(YIGSR)抑制肿瘤侵袭与转移可能的机制。方法在培养的人骨肉瘤细胞MG63中分别加入不同量的YIGSR，用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应分别定性和半定量检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的变化。结果加入不同量YIGSR的骨肉瘤细胞表达的VEGR和MMP-3也不同，加入YIGSR的量越多，VEGF和MMP-3的蛋白和mRNA的量就越少，呈剂量依赖性(P＜0．05)。结论YIGSR能有效地抑制骨肉瘤细胞VEGF和MMP-3的分泌，在抑制骨肉瘤的侵袭与转移中可能发挥了一定的作用。     

鼠骨骺干细胞免疫纯化和pTRE-PTHrP(38-94)反应质粒的构建

目的 免疫纯化新生大鼠骨骺干细胞,克隆甲状旁腺相关蛋白的中间片段PTHrP(38-94)基因并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(38-94).方法 采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的骨骺干细胞,分别以FGFR-3抗体和PCNA抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定.提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点PTHrP(38-94)基因片段,扩增的DNA片段与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接,转化、扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定.结果 免疫荧光证实所取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞;经限制性内切酶Barn H I、Not Ⅰ酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的 基因已经插入重组质粒.结论 运用显微取材和免疫纯化技术可以成功分离纯化骨骺干细胞;成功克隆PTHrP(38-94)基因并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(38-94),为进一步明确PTHrP(38-94)片段的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础.     

下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响

 目的研究Ezrin蛋白对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响。方法采用前列腺癌PC-3细胞系作为研究对象,针对Ezrin蛋白的编码序列设计小干扰RNA片段,重组为shRNA表达载体转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆,RT-PCR和Western blot分别检测Ezrin在基因和蛋白水平表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果PCR和Western blot显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用,转染后的前列腺癌细胞生长速度明显减慢,细胞周期显示处于分裂期的细胞比例由(24.58±4.23)%下降到(18.65±2.21)%,处于G1期的细胞数量则由(58.69±3.48)%上升到(66.54±4.13)%。穿过人工基底膜的细胞数量也由(38.6±5.4)减少为(24.5±2.7)(P<0.01)。结论Ezrin对于前列腺癌细胞的增殖和运动能力有重要影响,可能成为肿瘤治疗的重要靶点。     

骨内应力环境下复合血管内皮生长因子骨髓基质干细胞修复创伤性股骨头坏死的实验研究

目的探讨骨内应力对转染VEGF基因的骨髓间充质干细胞修复创伤性股骨头坏死的作用。方法设计制作能骨内加压的空心螺钉,骨髓间充质干细胞培养并转染VEGF基因,20只实验犬通过手术截断股骨颈方法造模,根据术后不同的处理方法分为四组:A组(单纯空心螺钉固定);B组(空心螺钉加人工骨填塞);C组(空心螺钉加复合转染VEGF的骨髓间充质干细胞的人工骨填塞);D组(空心螺钉加复合转染VEGF的骨髓间充质干细胞的人工骨填塞,同时加压)。造模20周后,行大体观察、X线及组织学、免疫组化及Western blot检测骨修复效果。结果通过手术方式成功制作出创伤性股骨头坏死的动物模型;在造模20周后,D组血管计数和VEGF的蛋白含量明显高于其他三组(P<0.05);C组血管计数和VEGF的蛋白含量高于A组和B组,有显著性差异(P<0.05),低于D组比较有显著性差别(P<0.05);A组和B组血管计数和VEGF蛋白水平远低于C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组和B组血管计数和VEGF蛋白水平之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨内加压能显著提高转染VEGF的骨髓间充质干细胞对创伤性股骨头坏死的再血管化,适当的应力刺激有利于骨组织的修复。