ltB-TpN47融合基因原核表达系统的构建

目的分别从梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）临床菌株和大肠杆菌DNA中扩增ltB和TpN47基因,构建ltB-TpN47融合基因及其原核表达系统。方法采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增TpN47基因和ltB基因片段、构建ltB-TpN47融合基因,T-A克隆后测定核苷酸序列。采用质粒pET32和宿主菌E.coliBL21DE3构建ltB-TpN47融合基因原核表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导表达。结果所构建的ltB-TpN47融合基因核苷酸序列与从GeneBank中查询并处理得出的数据基本一致。所构建的表达系统pET32-ltB-TpN47的目的重组蛋白（rltB-TpN47）表达量高达细菌总蛋白的1/3左右。结论本文成功地构建了ltB-TpN47融合基因高效原核表达系统。     

RpN47重组抗原的表达及其产物反应原性的初步鉴定

目的探讨梅毒螺旋体外膜蛋白（TpN47）重组抗原及其临床意义。方法采用PCR技术扩增TpN47重组抗原,再进行T-A克隆及测序,然后亚克隆至原核表达载体中,以亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白作为抗原制备酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒,对正常人血清200份、类风湿性关节炎（RA）阳性血清55份、系统性红斑狼疮（SLE）阳性血清34份及梅毒可疑患者阳性血清135份进行检测,其结果与梅毒血凝试验（TPHA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）的检测结果进行比较。结果成功地构建了pET32-TpN47重组表达载体,重组的TpN47蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达。对梅毒可疑阳性血清采用ELISA、TPHA、TRUST检出阳性率分别为81.48%、98.52%、71.11%;TRUST测出的8份可疑阳性样品及31份阴性样品TPHA检测结果均为阳性,而ELISA检测结果阳性19份。ELISA检测阳性率与TRUST和TPHA比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论TpN47重组抗原具有较好的免疫反应活性,ELISA试剂特异性、敏感性次于TPHA,但明显高于TRUST。     

临床检验基础实践技能在临床应用的调查分析

对二级医院、三级医院检验科开展的化验项目进行调查，发现《临床检验基础》教材中一些实践技能项目已被逐渐淘汰或被其他方法替代，而一些原来不够重视的新项目已局部或广泛开展，尤其是检验仪器的使用越来越普遍，因此。应及时调整教学内容和课时，以适应医学检验技术的发展。     

淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因序列分析及原核表达系统的构建

目的： 分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列，构建PIA基因的原核表达系统。方法：采用高保真PCR扩增9株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列，T-A克隆测序后与GenBank公布的序列进行同源性比较。构建PIA原核表达系统。采用不同浓度IPTG诱导重组目的蛋白rPIA表达，10%SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rPIA表达情况。采用Ni-NTA亲和层析法提纯rPIA，SDS-PAGE检测提纯效果。结果： 与报道的PIA基因序列（GenBank No: L19962）比较，9株淋病奈瑟菌核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.6%-100%和99.1%-100%，均属于IA6血清型。rPIA表达量可占细菌总蛋白量的50.1%，提纯后仅显示单一的目的蛋白条带。结论： IA6为本地区淋病奈瑟菌优势血清型，该基因序列相当保守。所构建的PIA基因原核表达系统能高效表达rPIA，为今后研制淋病奈瑟菌血清学检测试剂盒及疫苗研制奠定了基础。     

梅毒螺旋体TpN15重组抗原的克隆与表达

目的：用基因工程技术表达梅毒螺旋体TpN15重组抗原,为进一步研制梅毒螺旋体疫苗和ELISA诊断试剂盒奠定基础。方法：采用PCR技术扩增梅毒螺旋体TpN15基因,进行T-A克隆及测序,然后亚克隆到原核表达载体中,以亲和层析法纯化重组蛋白。结果：成功地构建了pET32-TpN15重组表达载体,TpN15重组蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达。结论：梅毒螺旋体TpN15基因在大肠杆菌中的成功表达为临床检测梅毒感染的新方法和梅毒螺旋体疫苗的研制奠定了基础。     

TpN17重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用

目的用基因工程技术表达梅毒螺旋体TpN17重组抗原,并建立操作简便、特异性好、敏感性高的梅毒血清抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。方法采用PCR技术扩增梅毒螺旋体TpN17基因,再进行T-A克隆及测序,然后亚克隆到原核表达载体中,以亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白包被于反应板,建立检测血清中梅毒抗体的ELISA间接检测法,利用该法与梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)同时检测血清样品,对其结果进行比较研究。结果TpN17重组蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达,并成功建立了检测血清中梅毒抗体的ELISA间接检测法及试剂。对135例梅毒可疑患者血清进行检测,ELISA、TPHA和TRUST的检出阳性率分别为82.96%、98.52%和71.11%,而TRUST测出的8例可疑样品及31例阴性样品中,TPHA结果全部阳性、而ELISA只有2例阴性。结论TpN17重组抗原ELISA试剂在特异性和敏感性上明显优于TRUST法。     

乙型肝炎病毒DNA阳性患者血清中前S1蛋白的检测及其临床意义

乙型肝炎病毒的外层衣壳上存在主要蛋白、中分子蛋白和大分子蛋白.这3种蛋白含有表面抗原(HBsAg)、前S1蛋白和前S2蛋白.中分子蛋白的N末端加上128个氨基酸序列构成大分子蛋白,这128个氨基酸序列就是前S1蛋白的所在部位.前S1蛋白的21-47肽段是HBV感染肝细胞的结合位点,与HBV侵入肝细胞有关.本文通过对212例乙肝患者血标本进行前S1蛋白、乙肝三系及HBV-DNA的联合检测,对它们作相关分析,并探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性患者血清中前S1蛋白的检测意义.     

梅毒螺旋体TpN15-47融合基因原核表达系统的构建

目的构建梅毒螺旋体TpN15-47融合基因及其原核表达系统。方法分别克隆TpN15和TpN47基因,利用T4连接酶构建TpN15-47融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白TpN15-47表达情况。结果连接的TpN15-47基因测序分析表明,插入的基因片段为TpN15-47融合基因,与GenBank报道相同。目的重组蛋白TpN15-47表达产量约为细菌总蛋白85.79%,主要以包涵体形式存在。结论所构建的原核表达系统能高效地表达TpN15-47融合蛋白,为后期梅毒螺旋体基因疫苗和临床检测试剂盒的研制奠定了基础。     

5370名健康体检者乙肝病毒感染情况调查分析

乙肝病毒在城市人群中感染已相当普遍。我们于 1998年对金华市 5 370名工人、学生、教师等健康体检者进行ＨＢＶ感染情况调查分析 ,旨在使人们对ＨＢＶ的感染及其危害有足够的认识和重视 ,积极采取及时有效的预防措施。1　对象与方法1 1　对象 :参与体检的有制药厂工人、大中专学生、教师及其他人员 (包括市农电所、市建行、种猪场和兴华房产等单位的工作人员 )。1 2　方法 :受检者空腹采血 ,采用上海实业科华生物制品有限公司提供的试剂盒 ,按试剂说明书做ＥＬＩＳＡ。2　结果　检测结果见表 1。表 1　ＨＢｓＡｇ阳性者乙肝三系检测结果对…     

宫颈癌组织中HPV16 URR基因多态性分析

目的 分析宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)基因多态性.方法 收集宫颈癌组织标本25例,提取DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增URR目的 片段,扩增产物直接或构建克隆重组质粒后测序,以GenBank Blast软件分析序列.结果 宫颈癌组织标本中,HPV16检出率为72%(18/2...