结核分枝杆菌H37Rv株重组抗原ESAT-6的表达纯化研究

目的表达纯化结核分枝杆菌(简称:结核杆菌)H37Rv株重组抗原ESAT-6,为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础。方法重组质粒pET23b-ESAT-6转化E.coli表达菌株BL21(DE3)plysE,IPTG诱导重组抗原ESAT-6表达。经SDS-PAGE电泳和Western印迹鉴定后,优化表达条件用镍离子鳌合亲和层析柱纯化重组抗原。结果成功构建了重组质粒pET23b-ESAT-6并且重组抗原ESAT-6以可溶性形式高效表达,经亲和层析后得到高纯度有免疫原性的重组抗原(纯度>95%)。结论高纯度有免疫原性的重组抗原ESAT-6为新型亚单位疫苗的研发及其结核病血清学诊断价值研究奠定了基础。     

结核病诊断技术及其临床应用

对TB作出及时准确的早期诊断对控制TB疫情至关重要。近年来随着生物技术和分子生物学的快速发展,在改善原有诊断技术的基础上也引入了多种新的TB诊断技术。新型培养技术大大缩短了细菌学检查和结核菌药敏试验的时间;分子扩增技术的应用(比如PCR)使得当日诊断成为现实;血清学方法的改善以及噬菌体测定等新技术的引入给TB临床诊断带来了希望。本文对TB的临床诊断、实验室诊断及最新技术进行了综述。     

结核分支杆菌诊断抗原的研究进展

结核病（tuberculosis，TB）是由结核分支杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）所致以呼吸系统感染为主的慢性传染病，是当今世界由单一致病菌引起的死亡率最高的疾病，严重威胁着人类健康。由于人口剧增、移民增加、旅游业发展、MTB耐药菌株的出现、人类免疫缺陷病毒（HIV）感染流行、吸毒、酗酒与贫困等原因，结核病日益严重，呈回升趋势。     

寄生蠕虫副肌球蛋白研究进展

副肌球蛋白（98-101kDa）是大多数无脊椎动物肌肉的主要结构蛋白，位于肌肉组织的粗肌丝中。大量研究表明人和家畜体内的众多寄生蠕虫都有副肌球蛋白的存在。对大多数长度而言，副肌球蛋白形成具重复疏水和亲水氨基酸序列的α螺旋盘绕结构，这使其对其它的蛋白分子有很高的亲和力。用曼氏血吸虫成虫组织匀浆免疫的小鼠能产生强烈的免疫应答，包括生成与97kDa成分结合的抗体，后经证实该97kDa成分为副肌球蛋白，由此可明显看出，副肌球蛋白的功能不止是作为寄生蠕虫的肌原纤维。     

结核杆菌H37Rv株重组PstS1蛋白的表达纯化及其免疫反应性分析

目的:表达、纯化结核杆菌H37Rv株重组Psts1(简称rPstS1)蛋白,为结核病血清学诊断价值研究及亚单位疫苗研制提供物质基础.方法:重组质粒pET15b-Pstsl转化大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)plysE,IPTG诱导rPstSI蛋白表达.经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定后,优化表达...     

HER-2阳性乳腺癌细胞检测试剂盒的研发及其初步临床应用

目的:研发HER-2阳性乳腺癌细胞检测试剂盒并初步评价其临床诊断价值。方法:优化ELISA法测定中TMB显色体系,筛选HER-2阳性乳腺癌细胞检测试剂盒的主原料,确定试剂盒的反应体系及检测工艺,并用试剂盒检测57例乳腺癌患者,分析其敏感性和特异性。结果:试剂盒初步研发成功,其诊断HER-2阳性乳腺癌的敏感性为66.7%,特异性为60%。结论:本试剂盒的研发提供了一种快速、无创、较敏感并能动态监测乳腺癌HER-2状态的新方法。     

结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析

Objective To construct esat-6-cfp-10 fusion gene (ec) and its expression vector pET-23b( + )-esat-6-cfp-10 [pET-23b( + )-ec], and express rESAT-6-CFP-10 (rEC)fusion protein of Mycobacterium tuberculosis (MTB) H37Rv and evaluate its immunoreactivity. Methods Fused gene encoding ESAT-6 and OP-10 of MTB was linked with the (Gly4Ser)3 linker by gene SOEing. Construction of TA cloning vector pMDR 19-T-esal-6-cfp-10 (pMDR 19-T-ec) was identified by PCR, restriction analysis and sequencing. After pMDR 19-T-ec was digested with double restriction enzymes (Nde Ⅰ and Xho Ⅰ ), the fused gene was inserted into prokaryotic expression vector pET-23b ( + ). The recombinant plasmid pET-23b( + )-ec was transformed into E. coli BL21(DE3) pLysE, and IPTG was used to induce the expreestion of rEC. Its expression was detected with sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot. rEC was purified by nickel-chelate affinity chromatography. The immunoreactivity of rEC was preliminarily evaluated by Western blot. Results A recombinant plasmid pET-23b( + )-ec was successfully constructed and could stably express a 21 000 rEC, which accounted for 35% total proteins of bacillus. It existed in soluble form in E. coli. After purification, the purity of rEC reached 97.2% . Its immunoreactivity was confirmed by Western blot. Conclusions The prokaryotic expression vector pET-23b( + )-ec has been constructed and the fusion protein rEC has been obtained successfully, which provides an experimental basis for the application of rEC in the diagnosis of tuberculosis.     

结核杆菌H37Rv株重组KatG蛋白的表达纯化研究

目的表达纯化结核杆菌H37Rv株重组KatG（简称rKatG）蛋白，为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法重组质粒pET23b—KatG转化大肠埃希菌表达菌株BL21（DE3）plysE,IPTG诱导rkatG蛋白表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定后，优化表达条件，用镍离子鳌合亲和层析柱纯化rKatG蛋白，对纯化产物进行过氧化氢酶活性测定。结果成功构建了重组质粒pET、23b-KatG,rKatG蛋白以可溶性蛋白形式表达，经亲和层析后的rKatG蛋白纯度为95．6％，过氧化氢酶试验阳性。结论构建的pET23b-KatG重组质粒能高效表达有酶活性的可溶性rKatG蛋白，经亲和层析后可得到高纯度的纯化蛋白。     

基于慕课和小规模私密在线课程的移动学习在医学计算机教学中的应用研究

将基于慕课和小规模私密在线课程的移动学习模式应用于医学计算机课程教学中,从实施主体、实施方法、效果评价等方面介绍具体教学实施情况,与传统教学模式进行对比分析,结果表明该模式较传统教学模式有更好的教学效果,最后对其实施条件加以分析。     

寄生蠕虫副肌球蛋白研究进展

副肌球蛋白（98～101kDa）是多种无脊椎动物肌肉的主要结构蛋白。位于肌肉组织的粗肌丝中。最初在软体动物的平滑肌--闭壳肌和缩足肌中发现,后来又相继从环节动物、节肢动物、线形动物及棘皮动物等无脊椎动物门中分离获得。副肌球蛋白为一长棒状分子。由同源二聚体构成。长约130nm。宽约2nm。是一个几乎全部是α-螺旋的蛋白质。对血吸虫成虫制备物的分析鉴定出一个高度致免疫的蛋白,后经证实为副肌球蛋白,表明副肌球蛋白的功能不止是作为寄生蠕虫的肌原纤维。