泛素结合酶E2T对急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药的影响

目的 探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-conjugating enzyme E2T, UBE2T)在急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药中的作用及其对泛素化介导的P53蛋白降解的影响。方法 人急性淋巴细胞白血病细胞系糖皮质激素耐药株CEM-C1和糖皮质激素敏感株CEM-C7细胞,采用实时荧光定量PCR法检测2种细胞UBE2T、p53 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测2种细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量。对数生长期CEM-C1细胞分为空白组(不进行转染)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-UBE2T组(转染sh-UBE2T)、sh-UBE2T+sh-p53组(转染sh-UBE2T和sh-p53),转染48 h后采用实时荧光定量PCR法检测4组UBE2T、p53 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测4组细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测4组细胞增殖率及地塞米松对CEM-C1细胞的半数抑制浓度,采用流式细胞术检测4组细胞凋亡率,采用Transwell实验检测4组迁移细胞数和侵袭细胞数;采用放线菌酮蛋白合成抑制实...     

包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用

目的：探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法：将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^-/-)的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^-/-对照组、TNFR2^-/-ITP模型组和TNFR2^-/-HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^-/-对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^-/-M2组),加入HA-B...     

富马酸二甲酯调节巨噬细胞极化状态对原发免疫性血小板减少症小鼠的治疗效果

目的：探究富马酸二甲酯(DMF)通过调节巨噬细胞极化影响原发免疫性血小板减少症(ITP)的作用。方法：将BALB/c小鼠分为对照组、ITP组、DMF低剂量组和DMF高剂量组，每组15只，除对照组外，其余3组小鼠均构建ITP模型，DMF低、高剂量组小鼠分别以10 mg/kg、20 mg/kg DMF灌胃，1次/d，连续14 d；全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血血小板(PLT)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)以及血红蛋白(Hb)水平；ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17及TGF-β1水平；电子天平称量小鼠体质量、脾脏、胸腺，计算脏器指数；HE染色观察小鼠脾脏组织和骨髓组织内巨核细胞数目；免疫荧光染色检测小鼠脾脏组织内巨噬细胞极化情况；流式细胞术测定小鼠外周血中巨噬细胞极化情况。结果：同一时间点下造模小鼠外周血血小板数量较对照组小鼠明显下降(P<0.05)，说明造模成功；造模后，与对照组比较，ITP组小鼠PLT、RBC及Hb均下降，WBC升高(P<0.05)，血清中IFN-γ、IL-2及IL-17均升高，TGF-β1、IL-4及IL-...     

细粒棘球蚴抗原B对小鼠巨噬细胞RAW264.7的极化作用

目的探讨细粒棘球蚴抗原B (AgB)对巨噬细胞极化的调控作用。方法将RAW264.7巨噬细胞培养24 h后，分为M1、 M2、 AgB、 AgB+M1、 AgB+M2和空白对照组（M0组），每组3孔。待所有巨噬细胞贴壁3 h后，AgB、 AgB+M1、 AgB+M2组均加入羊源细粒棘球蚴囊液提取的天然AgB （终浓度为1 000 ng/ml），刺激1 h后，M1组和AgB+M1组加入脂多糖（LPS，终浓度为100 ng/ml）和γ干扰素（IFN-γ，终浓度为20 ng/ml）刺激分化20 h;M2组和AgB+M2组加入白细胞介素4 (IL-4)、IL-13 （终浓度均为20 ng/ml）刺激分化20 h；空白对照组不更换培养液，同步培养20 h。显微镜下观察巨噬细胞形态。提取各组巨噬细胞总RNA, RT-PCR检测刺激后巨噬细胞表面标志物精氨酸酶1 (Arg-1)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的mRNA相对转录水平；蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析巨噬细胞蛋白Arg-1、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的相对表达量；ELISA检测刺激后巨噬细胞培养上清中IL-10...     

NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...