泡球蚴感染小鼠中Tim-3 对Th1 / Th2 细胞因子平衡的影响作用研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠Tim-3、Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、Th2细胞因子白细胞介素4(IL-4)的变化。方法:建立泡球蚴感染小鼠模型和对照组,取小鼠脾脏,分离脾淋巴细胞,流式细胞技术检测脾淋巴细胞Th1和Th2细胞水平以及Tim-3在Th1和Th2上的表达水平,用流式微珠阵列技术(CBA)法检测小鼠外周血清中IFN-γ、IL-4水平。结果:与正常对照组相比,泡球蚴感染小鼠脾淋巴细胞Tim-3在Th1中表达增高,Tim-3+Th1细胞与IFN-γ水平呈负相关。结论:泡球蚴诱导小鼠Tim-3在Th1细胞高表达,下调Th1免疫应答介导了Th1/Th2失衡。     

IL-21 / BCL-6 / Blimp-1 在囊性包虫病中的表达特点研究

目的:研究IL-21/ BCL-6/ Blimp-1 在囊性包虫病患者体内的表达,和参与包虫病发病的作用机制。方法:收集27 例新疆医科大学第一附属医院住院肝包虫病患者及同期30 名健康体检者的外周静脉血。用ELISA 方法检测血浆IL-21 水平,确诊的CE 患者用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测患者外周血单个核细胞中IL-21/ BCL-6/ Blimp-1 mRNA 的表达量。同时,在包虫病患者组中追踪17 例治愈者,测定其在治疗前、治疗后IL-21/ BCL-6/ Blimp-1 的表达量。结果:(1)实时荧光定量PCR 结果显示,与健康对照组相比,囊性包虫病患者外周单个核细胞中IL-21/ BCL-6 mRNA 水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。但Blimp-1 升高不明显。在包虫病治疗前治愈后的结果对比中可观察到IL-21/ BCL-6/ Blimp-1 mRNA 的表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)ELISA 方法结果显示,CE 患者外周血清中IL-21 水平与健康对照组相比显著升高并在治愈之后基本回至正常水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-21 与BCL-6 呈正相关(r =0.733,P<0.01);IL-21 与Blimp-1 无相关性(P=0.179);Blimp-1 与BCL-6 无相关性(P = 0.157)。结论:在人感染细粒棘球蚴的病程发展中,BCL-6、Blimp-1 可能通过调节IL-21 的表达,促进人体免疫系统抵抗寄生虫感染。IL-21、BCL-6、Blimp-1 在手术有效治疗后明显下降,表明这三种因子参与了包虫病发展的免疫机制。     

细粒棘球蚴感染中TGF-β/Smad信号通路对IL-9调控作用的研究

目的检测细粒棘球蚴病患者肝组织中转化生长因子β(TGF-β)、 Smad3、 Smad7、转录因子PU.1和白细胞介素-9 (IL-9) mRNA表达水平,初步探讨TGF-β/Smad信号通路在细粒棘球蚴感染病灶中对Th9细胞的调控作用。方法以新疆医科大学第一附属医院住院手术的30例棘球蚴病患者(CE患者组)和20例肝血管瘤患者(对照组)为研究对象,取手术中切除的肝脏组织,用Percoll法分离肝脏单个核细胞,实时荧光定量PCR分别检测CE患者组和对照组肝脏单个核细胞中TGF-β、 Smad3、 Smad7、 PU.1和IL-9 mRNA的相对表达水平。采用Spearman相关性分析方法分析感染组肝脏单个核细胞中Smad3 mRNA的相对表达水平与PU.1 mRNA的相对表达水平的相关性。在CE患者组肝脏单个核细胞中加入Smad3抑制剂SIS3进行体外干预(SIS3阻断组),另设PBS对照组,加入等量PBS,采用实时荧光定量PCR检测两组肝脏单个核细胞中PU.1和IL-9 mRNA的相对表达水平, ELISA检测细胞培养上清中IL-9水平。结果实时荧光定量PCR结果显示, CE患者组肝组织中单个核细胞的TGF-β、 Smad3、 PU.1和IL-9 mRNA相对表达水平分别为2.55±1.32、 2.26±1.35、 1.71±0.66和1.67±0.75,均高于对照组的1.54±0.76、 1.34±0.51、 1.27±0.62和1.01±0.50 (P 0.01或0.05); Smad7的相对表达水平为0.49±0.37,低于对照组的0.88±0.50 (P 0.01)。Spearman相关性分析结果显示, CE患者组肝脏单个核细胞中Smad3 mRNA的相对表达水平与PU.1 mRNA的相对表达水平呈正相关(r=0.397, P 0.05)。用SIS3阻断TGF-β/Smad信号通路后,肝脏单个核细胞中PU.1和IL-9 mRNA的相对表达水平为1.00±0.57和0.85±0.50,低于PBS对照组的1.46±0.64和1.32±0.72 (P 0.01)。ELISA检测结果显示,细胞培养上清中IL-9水平为(128.45±41.97) pg/ml,低于PBS对照组的(166.64±57.90) pg/ml (P 0.05)。结论细粒棘球蚴病患者肝脏组织中TGF-β、 Smad2、 Smad3、 PU.1和IL-9表达上调, TGF-β/Smad通路可能参与调控细粒棘球蚴感染中IL-9的表达。     

细粒棘球蚴感染者中Tim-3~+CD4~+CD25~+Treg细胞及相关因子的表达

目的通过检测细粒棘球蚴感染者外周血中Tim-3~+CD4~+CD25~+Treg细胞及相关因子的表达水平,探讨细粒棘球蚴感染者中Tim-3与CD4+CD25+Treg细胞的关系及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞对该疾病持续性发展的作用。方法选取30例细粒棘球蚴感染者和30例健康对照人群,用流式细胞术检测感染组和对照组外周血中Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞的比例变化;实时荧光定量PCR法分别检测感染组和对照组外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA的表达;ELISA法检测感染组和对照组血清中IL-10和TGF-β的水平;Pearson相关法分析感染者外周血中Tim-3 mRNA的表达与Foxp3 mRNA的相关性以及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的相关性。结果与对照组相比,细粒棘球蚴感染组外周血中Tim-3~+CD4~+CD25+Treg细胞的比例均显著升高(P0.001);外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA水平显著升高(P0.001);血清中IL-10(P0.001)和TGF-β(P=0.046)水平显著升高;细粒棘球蚴患者外周血Tim-3 mRNA与Foxp3 mRNA表达水平呈正相关;Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的水平均正相关。结论细粒棘球蚴感染者中Tim-3在CD4+CD25+Treg细胞上的过表达可能会促进CD4+CD25+Treg细胞的产生及其抑制功能的发挥,从而促使感染的持续性发展。     

囊性包虫病患者外周血PD-1在Treg细胞上的表达与Foxp3、TGF-β和IL-10的相关性研究

目的 通过检测囊性包虫病(cystic echinococcosis,CE)患者外周血中Treg细胞表面PD-1的表达与Treg细胞相关因子Foxp3、TGF-β和IL-10的表达情况,探讨负性共刺激分子PD-1与Treg细胞在CE患者中的关系及其对该疾病发生发展的作用。方法 选取30例CE患者和30例健康对照人群,用流式细胞术检测CE患者和健康对照人群外周血中PD-1⁺CD4⁺CD25⁺Treg细胞的比例;实时荧光定量PCR法分别检测CE患者和对照人群外周血单个核细胞中PD-1和Foxp3 mRNA的表达;ELISA法检测CE患者和对照人群血清中TGF-β和IL-10的水平;Pearson相关法分析CE患者外周血中PD-1的表达与Foxp3、TGF-β和IL-10的相关性。结果 与对照人群相比,CE患者外周血中PD-1⁺CD4⁺CD25⁺Treg细胞的比例均显著升高;外周血单个核细胞中PD-1和Foxp3 mRNA水平显著升高;血清中TGF-β和IL-10水平显著升高;CE患者外周血PD-1mRNA与Foxp3 mRNA表达水平正相关;PD-1⁺CD4⁺CD25⁺Treg细胞与TGF-β和 IL-10的水平均正相关。结论 负性共刺激分子PD-1在Treg细胞上高表达与Treg细胞及其因子TGF-β和 IL-10的产生和功能发挥相关,可能促进细粒棘球蚴的生长发展。     

囊型包虫病患者Th9细胞相关因子mRNA表达特点研究

目的通过检测囊型包虫病患者外周血中白细胞介素(IL)-9、嘌呤盒1(PU.1)和干扰素调节因子-4(IRF-4)和IL-4mRNA表达水平,初步探讨Th9细胞相关因子在细粒棘球蚴感染后机体免疫应答中所起的可能作用。方法收集已确诊为囊型包虫病未接受治疗的患者33例作为CE组、经过外科手术和阿苯达唑药物治疗成功的33例CE患者作为治疗后组(PCE组)、30例年龄和性别与患者匹配的健康对照组作为HC组,应用实时荧光定量PCR技术检测各组外周血中IL-9、PU.1、IRF-4和IL-4mRNA表达水平,并进行统计学分析。结果 CE组PU.1、IL-9的表达水平明显高于HC组,差异均有统计学意义(P0.05)。PU.1在CE组的表达水平明显高于PCE组,差异有统计学意义(P0.05),IL-9在CE组的表达水平稍高于PCE组,差异无统计学意义(P0.05)。同时,PU.1、IL-9在PCE组和HC组的表达差异无统计学意义(P0.05);IRF-4在CE组和PCE组的表达较HC组稍高,而且IRF-4在CE组、HC组、PCE组的表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05);IL-4在CE组的表达水平明显高于HC组和PCE组,差异有统计学意义(P0.05)。IL-9与PU.1、IL-4之间存在明显的正相关(P0.05),与IRF-4之间无相关性(P0.05)。结论 Th9细胞相关因子IL-9、PU.1、IL-4可能参与了细粒棘球蚴感染过程中的免疫应答和调控机制。