柴胡疏肝散对大鼠胃Cajal间质细胞活性及细胞内钙离子浓度的影响

目的观察柴胡疏肝散含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)活性及细胞内钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法按照血清药理学通法制备大鼠含药血清,将血清分为柴胡疏肝散组(浓度为5%、10%、20%)、多潘立酮组(10%)、空白组,急性分离并采用酶解法提取胃窦ICCs进行常规培养,免疫荧光染色法鉴定ICCs,MTT法测定ICCs对数生长曲线,以含药血清继续培养对数生长期的ICCs 3天后,通过CCK-8法检测ICCs活性,激光共聚焦显微镜进行Fluo-3荧光检测ICCs细胞内Ca2+变化,比较各组含药血清对大鼠胃窦ICCs生长的影响。结果成功分离、培养和鉴定ICCs后,通过各组含药血清作用,与空白组同期比较,多潘立酮组、柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P0.05);与多潘立酮组同期比较,10%、20%柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P0.05);与5%柴胡疏肝散组同期比较,10%、20%柴胡疏肝散组ICCs活性(48、72 h)与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P0.05)。结论柴胡疏肝散可以通过增强细胞内Ca2+浓度促进ICCs活性,促进其分化生长。     

谷氨酸诱导大鼠胃Cajal间质细胞自噬模型的建立

目的:通过谷氨酸诱导离体大鼠胃Cajal间质细胞(ICCs)建立细胞自噬模型。方法:使用高、中和低浓度(分别为10 mmol/L、5 mmol/L和2.5 mmol/L)的谷氨酸作用于原代培养的ICCs不同时间(3h、6h和24h),然后通过CCK-8法检测不同浓度谷氨酸对ICCs活力的影响;Western blot检测不同浓度谷氨酸在不同作用时点对ICCs自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平的影响;透射电镜观察谷氨酸干预后细胞内自噬体和超微结构的变化;免疫荧光检测谷氨酸诱导后自噬蛋白LC3的荧光表达。结果:与空白对照组相比,谷氨酸显著降低了大鼠胃ICCs活力(P0.01)。中、高浓度谷氨酸作用不同时间均可显著提高自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比值(P0.01),其中以中浓度谷氨酸作用3 h的LC3-II/LC3-I比值最高(P0.01)。透射电镜检测中浓度谷氨酸干预3 h发现,细胞内自噬体数量明显增加,线粒体和内质网数量及结构遭到破坏。免疫荧光结果提示,与空白对照组比较,谷氨酸中浓度组平均每个细胞内自噬蛋白LC3荧光表达显著增强(P0.01)。结论:应用谷氨酸可成功诱导大鼠胃ICCs自噬,谷氨酸的最佳诱导条件为5 mmol/L作用3h。     

枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内钙离子浓度、钙调蛋白表达的影响

目的:观察单味中药枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内Ca2+、钙调蛋白表达的影响.方法:按照血清药理学通法制备大鼠枳实含药血清,将血清分为枳实组(10%、20%、50%枳实含药血清)、空白血清对照组,酶解法提取胃窦平滑肌细胞并进行培养,倒置显微镜下观察各组对胃窦平滑肌细胞收缩效应,激光共聚焦显微镜技术检测各组加药前后胃窦平滑肌细胞内Ca2+浓度变化,免疫组织化学方法观察各组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白的表达.结果:10%、20%、50%枳实含药血清对胃窦平滑肌细胞收缩及细胞内Ca2+荧光强度的影响呈药物剂量依赖关系,细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度随药物浓度的增高而增强(P<0.05),20%、50%枳实含药血清与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度差异有统计学意义(P<0.05),50%枳实组与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:枳实含药血清可以促进胃窦平滑肌细胞收缩,其机制可能与增加细胞内Ca2+浓度、调节钙调蛋白的表达有关.