99Tcm标记人源化抗人血小板膜糖蛋白Ⅲ a单克隆抗体SZ21F(ab)2血栓栓塞显像

目的用动物血栓栓塞模型显像评估99^Tc^m标记人源化抗人血小板膜糖蛋白（GP）Ⅲa单克隆抗体（简称单抗）F（ab）2片段SZ21F（ab）2的应用价值。方法通过体外抑制二磷酸腺苷（ADP）诱导的犬血小板聚集实验，评估SZ21F（ab）2与血小板结合的亲和性和特异性。以2-亚氨基噻吩盐酸盐（IT）法修饰SZ21F（ab）2分子的亚氨基，以99^Tc^m-葡庚糖酸钠（GH）转换络合法进行标记。分别用快速薄层层析（ITLC）法和ELISA测定标记物的放化纯及生物活性。对3条肺动脉血栓和8条（包括上述3条）后肢深静脉血栓栓塞比格犬模型进行显像研究。结果SZ21F（ab）2抑制ADP诱导的犬富含血小板血浆（PRP）聚集实验的半数有效剂量（IC50）为（2．49±1．88）μg／ml。ITLC法测得标记物的放化纯为90％～95％，ELISA测定结果表明标记后抗体保留了免疫活性。注射显像剂后1h，肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位均出现放射性浓聚。注射后3h，在体显像肺动脉血栓和后肢深静脉血栓栓塞模型的放射性靶／本底（T／B）比值分别为3．03±1．18和3．51±0.62。肺动脉血栓部位和后肢深静脉血栓部位的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为0．083％ID／g和0．076％ID／g。体外检测结果表明：肺动脉血栓与正常肺组织的单位质量放射性比值平均为12．8，后肢深静脉血栓与血液的单位质量放射性比值平均为5．2，与肌肉的比值平均为127.0。结论99^Tc^m-SZ21F（ab）2与人血小板具有较高的亲和力，有潜在的血栓显像应用前景。     

苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqI多态性与脑梗死的相关性研究

目的　研究苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性与脑梗死发生的相关性。 方法　应用PCR技术结合TaqⅠ酶切分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,研究了苏州地区汉族正常人与脑梗死患者血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性特点。 结果　正常对照组TaqⅠ等位基因的频率分别为C 5 3.8%、A 4 6 .2 %。脑梗死组TaqⅠ等位基因频率分别为C 5 0 .6 %、A 4 9.4 %。脑梗死组和对照组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　苏州地区汉族人血小板糖蛋白Ⅲa基因TaqⅠ多态性与脑梗死发生无关。     

人vWF-A1区蛋白的表达及其对血小板聚集的抑制作用

目的:进一步研究血栓形成的机制,开发抗血栓药物。方法: 应用基因重组技术在大肠杆菌中表达人vWF-A1区蛋白,经过纯化、复性,获得重组蛋白(rvWF-A1),同时用流式细胞术检测rvWF-A1与血小板膜糖蛋白血小板膜糖蛋白(glycoprotein, GP)Ib的结合能力,应用血小板聚集仪测定rvWF-A1对瑞斯托霉素(ristocetin)诱导的血小板聚集抑制作用。结果: 重组表达载体pQE-31-vWF-A1在大肠杆菌M15中得到高效表达,表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的30%,Ni-NTA agrose柱纯化后,其纯度为95%,经复性的rvWF-A1蛋白具有良好的生物学活性。它可与血小板模糖蛋白血小板膜糖蛋白GPIb结合,阳性率为78.6%;它可以抑制ristocetin诱导的血小板聚集,抑制率为84.7%。结论: 在原核细胞中可以成功地高效表达人vWF-A1区蛋白,该重组蛋白有可能开发为有效的抗血栓药物。     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究

为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoproteinⅥ，GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂，利用基因重组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段eDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resin纯化、复性：使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质；采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明，经测序证明PCR扩增产物与GPⅥ胞外区eDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量32kD蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta—His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合；胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论：正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。     

血栓动物模型的~(99)Tc~m-重组水蛭素显像研究

目的　探讨以凝血酶为靶，重组水蛭素（ｒＨ）为配基进行血栓显像的潜在价值。方法　氯胺Ｔ法制备１２５ＩｒＨ，采用体外放射配体结合法分析ｒＨ对凝血酶纤维蛋白复合物的亲和、定量关系和时间反应动力学。亚氨基噻吩盐酸盐修饰法制备９９ＴｃｍｒＨ，进行小鼠体内分布测定及犬动、静脉血栓模型显像。结果　ｒＨ 不能直接与纤维蛋白原结合，当凝血酶与纤维蛋白形成复合物后才能与其形成三元复合物，且这种结合呈高亲和、特异和可逆性。９９ＴｃｍｒＨ 在小鼠心、脑、肝、脾、肺摄取低，肾摄取高，１５ ｍｉｎ 达（６４－７２４±５－０４２） ％ＩＤ／ｏｒｇａｎ，血清除迅速。犬股动脉血栓于４５ ｍｉｎ 可清晰显影，靶／ 本底（Ｔ／Ｂ） 比值为１－４７。静脉血栓于注药后３０ ｍｉｎ 就出现浓聚，并随时间延长血栓显影更清晰，１ ｈ Ｔ／Ｂ比值为１－５３。结论　９９ＴｃｍｒＨ 有望成为１ 种新的较理想的血栓示踪剂     

人vW因子A3区基因在大肠杆菌中表达及其生物学流行性的研究

血管性血友病因子(vWF)是介导血小板粘附到细胞外基质的桥梁,在血栓形成过程中发挥重要作用,可通过阻断vWF与细胞外基质的结合而阻断血小板的粘附.本研究目的是研究一种抗血栓形成的新疗法.应用RT-PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vWFA3区基因并在大肠杆菌中表达;应用胶原结合试验及竞争抑制实验分析rvWF-A3蛋白的生物学活性.结果表明表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的46%,包涵体经过变性、纯化和复性,获得重组蛋白(rvWF-A3);rvWF-A3具有很好的胶原结合活性,且能竞争性抑制野生型vWF与胶原结合.结论大肠杆菌中高效表达的rvWF-A3具有良好的生物学功能,可作为阻断剂用于干预vWF介导的血小板黏附过程,是一种有开发前景的抗血栓药物.     

经颅多谱勒检测兔大脑中动脉微血栓栓子的研究

目的应用经颅多谱勒（TCD）动态检测兔血栓栓塞模型大脑中动脉（MCA）的微栓子信号（MES），观察栓子的负荷量与缺血性脑血管病（ICVD）发生的相关性。方法将实验动物随机分为3组，即A组含3—5个栓子，B组含6-10个栓子，C组为生理盐水对照组。采用自体动脉血微栓子建立兔局灶性脑缺血模型同时TCD监测MES。栓塞后6h进行磁共振成像（MRI）及兔脑组织病理观察。结果A、B组TCD均监测到MES；B组MRI的T1WI、T2WI及病理观察见梗死灶，而A组仅在弥散加权成像（DWI）见可疑小缺血灶。结论TCD实时、动态观察微栓子信号，能预测缺血性脑血管病发生的危险性，为临床及早干预治疗提供科学依据。     

用2-IT修饰单抗SZ-51制备99Tcm-IT-SZ-51血栓显像药盒

目的 研究^99Tc^m标记抗P-选择素单克隆抗体SZ-51血栓显像药盒的制备方法。方法 用2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）修饰SZ-51。用^99Tc^m-葡庚糖酸钠转换络合标记法标记IT-SZ-51,测定标记物的放化纯度及生物活性,以最佳标记条件制备体内血栓显像药盒。结果 以最佳比例修饰SZ-51,每分子抗体游离疏基数为13个,纸层析法测得标记率大于90%,酶联免疫吸附测定结果表明标记物保留了抗体的免疫活性。制成的药盒4℃条件下可保存3个月。结论 该标记方法简便快速。     

用2-IT修饰单抗SZ-51制备~(99)Tc~m-IT-SZ-51血栓显像药盒

目的　研究99Tcm 标记抗P 选择素单克隆抗体SZ 5 1血栓显像药盒的制备方法。方法用 2 亚氨基噻吩盐酸盐 (2 IT)修饰SZ 5 1。用99Tcm 葡庚糖酸钠转换络合标记法标记IT SZ 5 1,测定标记物的放化纯度及生物活性 ,以最佳标记条件制备体内血栓显像药盒。结果　以最佳比例修饰SZ 5 1,每分子抗体游离巯基数为 13个 ,纸层析法测得标记率大于 90 % ,酶联免疫吸附测定结果表明标记物保留了抗体的免疫活性。制成的药盒 4℃条件下可保存 3个月。结论　该标记方法简便快速     

可溶性尿激酶受体的免疫放射测定及其临床应用

目的　以免疫放射测定法（IRMA）,特异性地检测可溶性尿激酶受体（suPAR）,以了解其生理水平及在病理状态下的改变。方法　应用2株抗人suPAR的单克隆抗体,用氯胺T法以125I标记其中一株单抗,建立suPAR双抗夹心IRMA,测定健康成人、良性肿瘤及恶性肿瘤患者血清suPAR的水平,并比较健康成人和阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者血浆suPAR的水平。结果　IRMA检测suPAR的最小可测值为1.95μg/L,单抗与重组人uPAR的亲和常数为4.75×109mol/L,平均回收率为1.013,批内及批间CV分别为(6.40±2.57)%和(10.48±2.65)%。62名健康成人血清suPAR水平为（2.71±1.12）μg/L,21名健康成人血浆suPAR水平为(1.73±0.96)μg/L。与健康成人相比,24例良性肿瘤患者血清suPAR水平增高,而47例恶性肿瘤患者血清suPAR水平则显著增高。PNH患者血浆suPAR水平也较健康成人增高。结论　suPAR以IRMA法检测敏感性、重复性好,准确性较高,恶性肿瘤患者和PNH患者血清（浆）suPAR水平明显增高。