MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定

目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。     

活性氧介导铁过载对正常及辐射损伤小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的 探讨铁过载对正常及病态骨髓间充质干细胞(MSCs)的损伤作用及其机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、及照射加铁剂组,给予铁剂4周.分离培养MSCs,普鲁士蓝铁染色检测MSCs内铁颗粒、流式细胞仪检测可变铁池(LIP)及活性氧(ROS)水平,CCK8检测MSCs增殖能力,油红-O染色检测MSCs成脂定向分化能力、茜素红染色检测成骨定向分化能力,实时定量-PCR(real-time PCR)检测成骨相关基因表达.结果 与对照组及照射组相比,铁剂组及照射加铁剂组MSCs内明显存在铁颗粒,LIP水平明显增高(P ＜0.05);ROS水平明显增加(P＜0.05);细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);成骨分化能力下降(P＜0.05),向成脂细胞分化能力增强.结论 铁过载可介导ROS升高影响正常及病态骨髓MSCs的增殖、定向分化能力,降低其造血支持作用,并间接引起骨损害.     

CD22 CAR-T挽救治疗CD19 CAR-T治疗后短期复发的TP53突变阳性难治急性B淋巴细胞白血病一例 #br#

难治急性淋巴细胞白血病病死率极高,CAR-T 细胞免疫治疗为此提供新的选择。本文介绍 1 例 CD19 CAR-T细胞治疗缓解后短期复发的 TP53突变阳性难治急性 B淋巴细胞白血病,经 CD22 CAR-T联合单倍体异基因 造血干细胞移植治疗成功的病例。本研究采用流式细胞术观察患者 CD19 CAR-T细胞和 CD22 CAR-T细胞两次治 疗的外周血 CAR-T细胞比例,PCR法检测 CAR基因表达;临床观察患者 2次 CAR-T细胞治疗过程中的疗效和不良 反应。结果显示,CD19 CAR-T和 CD22 CAR-T细胞 2次治疗均于第 14天达到骨髓完全缓解,且不良反应轻微。但 CD19 CAR-T细胞治疗缓解后 2周骨髓复发,患者外周血检测到异常 19 CAR基因表达,同时 TP53突变水平亦增高。 最终 CD22 CAR-T 细胞挽救治疗桥接单倍体造血干细胞移植后成功。由此表明在细胞制备过程中应进一步提高 CD3+细胞纯度;CD22 CAR-T治疗可以作为CD19 CAR-T治疗复发的一个挽救治疗措施。     

活性氧与组织器官纤维化

活性氧(ROS)是需氧细胞在代谢过程中产生的一类氧衍生的分子,主要包括超氧化物、羟自由基、烷氧基、过氧化氢、次氯酸、臭氧等。ROS可导致DNA、蛋白质等生物大分子损伤、脂质过氧化,破坏细胞的结构和功能。同时,ROS可通过多种信号途径参与多种致纤维化因子的信号转导,调节细胞的增殖、分化、凋亡等生理功能,并与肝纤维化、肺纤维化等多种组织纤维化疾病的发生发展有关;另外,近年来研究表明,ROS在骨髓纤维化中也可能扮演了重要的角色。因此,ROS在组织器官纤维化中发挥着不可忽视的作用。本文就ROS与常见组织器官纤维化的关系作一综述。     

急性B淋巴细胞白血病自体CD19 CAR-T制备中CD19 CAR转入体系残留白血病细胞的体外研究

目的分析复发/难治性急性B淋巴细胞白血病(R/R B-ALL)自体CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)制备过程中,培养体系中残留白血病细胞导致CD19 CAR转入白血病细胞的特征和体外杀伤研究。方法①收集30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者及6例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC);②流式细胞术分析R/R B-ALL患者PBMC经CD3磁珠分选后及体外培养过程中体系白血病细胞残留情况;③患者及健康志愿者PBMC CD3+T细胞转染CD19 CAR及CD22 CAR慢病毒,制备CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞;④复苏Nalm-6细胞株,CD19 CAR慢病毒转染Nalm-6细胞,制备CD19 CAR-Nalm-6细胞,同时转染患者原代ALL细胞;⑤流式细胞术检测转染率;⑥CCK-8法检测细胞增殖;⑦乳酸脱氢酶(LDH)法检测CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞对Nalm-6细胞及CD19 CAR-Nalm-6细胞杀伤活性。结果①30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者中,2例CD3+T细胞中发现3.32%、2.04%的白血病细胞残留,随体外培养时间延长,在培养第4天,白血病细胞完全消失。②体外培养中CD19 CAR-Nalm-6细胞增殖率高于Nalm-6细胞。③效靶比为1∶1且共培养24、48、72 h,CD19 CAR-T细胞对Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-Nalm-6细胞;与CD19 CAR-T细胞相比,CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性更高。④相同效靶比情况,单独应用CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-T联合CD22 CAR-T细胞。结论CD19 CAR-T细胞制备过程中培养体系残留白血病细胞可能会导致CD19 CAR被引入白血病细胞中而导致CD19 CAR-T细胞治疗失败,在细胞制备过程中需要检测培养体系中白血病细胞的残留情况。CD22 CAR-T细胞治疗可作为上述情况的挽救治疗措施之一。