巨细胞病毒IE2的红色靶基因与绿色荧光-慢病毒系统的建立及其对人神经干细胞的感染

目的 RNA干扰技术沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因巨细胞病毒IE2的表达,并初步研究慢病毒感染神经干细胞的可能性。方法以人巨细胞病毒IE2 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向巨细胞病毒IE2的shRNA表达质粒,构建携带IE2的mCherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞。通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western Blot确定最佳沉默IE2序列后,将有效的UTG-IE2质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,获取高滴度慢病毒。应用慢病毒感染人神经干细胞,观察神经干细胞被慢病毒感染的情况并检测神经干细胞的绿色荧光表达情况。结果成功构建IE2-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-IE2,RT-PCR及Western Blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞IE2 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低。构建的慢病毒可以成功感染神经干细胞。结论红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率,可实现慢病毒介导的RNA干扰在神经干细胞内的有效表达,并为相关研究提供技术支持。     

多种维生素及微量元素对高温致神经管畸形的保护作用及其对纤维粘连蛋白和层粘连蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨高温致神经管畸形(NTD)的因素及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。方法:实验孕鼠随机分为A组(孕前第8天开始灌服多种维生素及微量元素)、B组(孕后第1天开始灌服)和C组(不灌服)孕鼠高温处理。对各组胎鼠进行形态学观察,记录NTD发生率;用原位杂交技术检测纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)在神经上皮细胞及其周围间充质中的转录状况。结果:(1)各组鼠胚均出现不同类型的NTD,C组NTD发生率最高,为77.5%。(2)各组鼠胚神经上皮细胞及其周围间充质中见FN和LN mRNA阳性转录信号,C组明显弱于其他组。结论:FN和LN转录降低是NTD发生的重要因素之一,多种维生素及微量元素对高温致NTD有一定的保护作用。     

恶性肿瘤患者隐孢子虫感染情况调查

目的调查恶性肿瘤患者的隐孢子虫感染情况及流行特点，为恶性肿瘤患者隐孢子虫感染的防治提供依据。方法采集山东省肿瘤医院108例恶性肿瘤病患者粪便，采用金胺-酚＋改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊。结果108例肿瘤患者隐孢子虫感染率为66．67％，男性患者与女性患者隐孢子虫感染率分别为69．70％和61．90％，差异无显著性（P〉0．05）；化疗、放疗、放疗＋化疗患者隐孢子虫的感染率分别为80．00％、50．00％和69．57％，差异有显著性（P〈0．05）；不同类别的肿瘤患者隐孢子虫感染率分别是：呼吸系统为52．38％、消化系统为77．14％、乳腺为62．50％、其他（包括脑瘤、肾上腺瘤、甲状腺瘤等）为86．67％，差异有显著性（P〈0．05）。结论恶性肿瘤患者易发生隐孢子虫感染，可能与其机体的免疫功能下降有关。     

Gab2对人肺癌细胞A549侵袭能力影响及其机制的探讨

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Grb2binding protein-2,Gab2)对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响及其机制。方法:将质粒pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#1、pGCsilencerU6/GFP/Neo-RNAi-Gab2#2和对照空载质粒转染到A549细胞中,建立Gab2低表达的siGab2/A549#1、siGab2/A549#2细胞和对照SCR/A549细胞。应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测小分子干扰RNA(siRNA)干扰Gab2表达后的基因和蛋白表达水平。趋化运动实验检测细胞的迁移能力;体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;蛋白质印迹法检测siRNA干扰Gab2表达后,A549细胞在胰岛素样生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)刺激下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase-9,MMP-9)的表达及磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化人雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamy-cin,pmTOR)的活化情况。结果:siRNA干扰Gab2表达后,RT-PCR测定A549细胞Gab2mRNA相对表达量为1.340±0.009,Scr/A549细胞为1.201±0.074,siGab2#1/A549细胞为0.315±0.008,siGab2#2/A549细胞为0.289±0.007。蛋白印迹法检测A549细胞Gab2蛋白表达量为0.205±0.003,Scr/A549细胞为0.241±0.004,siGab2#1/A549细胞为0.128±0.002,siGab2#2/A549细胞为0.066±0.001。siGab2#2/A549细胞与A549细胞比较Gab2基因表达显著降低,t=168.032,P<0.001;Gab2蛋白表达也显著降低,t=64.352,P<0.001。siGab2#2/A549细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于SCR/A549细胞,t值分别为5.101和10.812,P值分别为0.029和0.002。在IGF-1刺激下,siGab2/A549细胞的MMP-2、MMP-9蛋白的表达量不再有明显变化,t值分别为-2.051和-2.652,P值分别为0.054和0.064。siGab2/A549细胞中pAkt、pmTOR的活化也显著抑制。结论:Gab2可能通过调节Akt/mTOR信号通路,促进A549细胞的侵袭能力。     

对医学本科生进行科研创新能力培养的探索和体会

在我国医学高等院校中,传统的基础医学教学和管理模式已严重束缚了本科教学的改革和发展。目前,我国本科生参与专业科研活动并不普遍。本文围绕医学科研相关教学课程的特点和引导学生参与各类科研训练的相关措施,探讨了如何对医学生进行科研实践能力和创新精神的培养,以期提高高等医学院校的教学质量,培养更多的创新人才。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

叶酸及维生素C对高温致神经管畸形的保护作用

目的探讨叶酸及维生素C对高温引起的神经管畸形（NTD）的保护作用。方法孕鼠随机分为实验组（A，B，C）和对照组，A组（孕前第8天开始灌服叶酸及维生素C）、B组（孕后第1天开始灌服）和C组（不灌服）孕鼠分剐于孕第8天高温处理。对各组胎鼠进行形态学观察，记录并计算植入数、活胎数、死胎数、畸形数及NTD发生率。结果各组鼠胚均出现不同类型的NTD，C组NTD发生率最高，为78．3％．结论叶酸及维生素C对高温致NTD有一定的保护作用。     

孕早期急性感染弓形虫致先天性弓形虫病胎鼠模型的建立

目的建立孕鼠早期急性感染弓形虫RH强毒株致先天性弓形虫病胎鼠模型,观察孕早期母体弓形虫感染对胎鼠脑发育的影响。方法 SD孕鼠42只于胚胎第3天(E3)随机分为对照组、实验组、地塞米松组各14只。对照组注射灭菌PBS,实验组与地塞米松组以腹腔注射弓形虫RH株,后者同时给予地塞米松饮水。分别于胚胎第14、16天(E14、E16)处死孕鼠剖腹取胎鼠,进行胚胎形态学观察;胎盘压片镜下观察弓形虫体;PCR检测各组羊水、胎肝中的弓形虫B1基因;免疫荧光染色检测对照组、实验组及地塞米松组胎鼠不同发育时期脑组织中的Caspase-3、神经元迁移蛋白(DCX)。结果 3组孕鼠均无死亡。实验组、地塞米松组E14、E16胚胎均有出血、坏死和吸收发生,胎鼠无明显肉眼可见畸形,对照组无死胎、吸收胎出现,3组平均活胎率分别为100%、61%、18%,3组平均活胎率相比,P均<0.05。仅地塞米松组在E14一窝别观察到2个胎盘压片有弓形虫体,羊水中检测到B1基因表达。实验组及地塞米松组胎肝中均检测到B1基因表达。E14、E16实验组胎鼠脑组织中Caspase-3表达较对照组明显增强,但较地塞米松组减低(P均<0.05);实验组DCX表达较对照组减弱,较地塞米松组增强(P均<0.05)。结论建立了稳定垂直传播的先天性弓形虫病胎鼠模型,弓形虫对胚胎脑发育具有毒性作用。     

中药露蜂房蛋白对人红白血病K562细胞影响的实验研究

研究中药露蜂房蛋白(NVP)抗白血病作用的机制,为治疗白血病的临床应用提供实验和理论依据. 1 材料与方法 应用层析、透析等技术常规制备NVP溶液.按临床用药的最大血药浓度配制实验用药.露蜂房口服常用量为12g,按下式计算其临床最大血药浓度为2.50 g*L-1.算出所提取的NVP总量为8.756 mg,然后换算出每克NVP的含量,得出NVP的最大血药浓度0.08756 mg*L-1.     

肿瘤患者隐孢子虫感染情况及感染因素的分析

目的调查恶性肿瘤患者中隐孢子虫的感染情况、感染因素及流行特点，为防治隐孢子虫病在肿瘤患者中的感染提供依据。方法从山东省肿瘤医院采集恶性肿瘤病患者粪便标本共108份，采用金胺-酚＋改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊。结果隐孢子虫感染阳性率为66．67％，明显高于正常人。男性患者与女性患者隐孢子虫的感染率分别为69．70％和61．90％，差异无显著性（P〉0．05）；化疗、放疗、放疗＋化疗患者隐孢子虫的感染率分别为80．00％，50．00％和69．57％，差异有显著性（P〈0．05），化疗组高于其他治疗组；不同类别的肿瘤患者隐孢子虫感染率是：呼吸系统为52．38％，消化系统为77．14％，乳腺为62．50％，其他（包括脑瘤、肾上腺瘤、甲状腺瘤等）为86．67％，差异有显著性（P〈0．05）。结论恶性肿瘤患者的隐孢子虫感染率明显高于正常人，可能与其机体的免疫功能下降有关。