2009-2017年烟台地区甲型(H1N1)pdm09流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

目的 分析2009-2017年烟台地区甲型（H1N1）pdm09流感病毒流行情况及神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因进化特征。方法 收集2009年8月~2017年8月烟台地区两家哨点医院流感样病例咽试子标本10 236份,狗肾细胞（Madin-Darby canine kidney cell,MDCK）分离流感病毒,血凝抑制实验进行病毒分型。选取甲型（H1N1）pdm09流感毒株43株,扩增NA基因全序列并测序,应用分子生物学软件分析其遗传变异特征。结果 系统发生分析表明大部分烟台分离株属于2、7、6C、6B.1和6B.2基因型;NA蛋白分子多个氨基酸位点发生变异,与疫苗株相比,6、7基因型增加了44位糖基化位点;6B.1和6B.2基因亚型,减少了386位糖基化位点;运用固定效应似然比模型和内部固定效应似然比模型发现34和386两个正向选择压力位点,NA蛋白酶活性中心位点及周围辅助位点均未发生变异。结论 2009-2017年烟台地区甲型（H1N1）pdm09流感病毒NA基因持续发生变异,仍对神经氨酸酶抑制剂敏感,未来仍应加强流感流行状况和病原基因特征监测。     

山东省烟台地区发热伴血小板减少综合征疑似病例检测分析

目的 调查山东省烟台地区发热伴血小板减少综合征疑似病例新型布尼亚病毒(SFTSV)感染情况。 方法 采用双重探针引物实时荧光定量-聚合酶链反应方法对发热伴血小板减少综合征疑似病例血清进行新型布尼亚病毒特异性核酸检测。 结果 135份疑似病例血清样本中新型布尼亚病毒特异性核酸阳性81份,阳性率60.00%。发病第5～8天核酸检出阳性最高;发病高峰主要集中在5-8月;人群年龄分布在37～87岁之间,以60～70岁年龄组发病数最多,占总病例数的32.10%(26/81);92.59%(75/81)的患者为农民;男女性别比为1.79:1。 结论 烟台地区发热伴血小板减少综合征疑似病例存在新型布尼亚病毒感染。     

烟台沿海地区人源和猪源戊型肝炎病毒基因型别的研究

目的 调查烟台市沿海地区人源与猪源戊型肝炎病毒(HEV)基因型别的相关性.方法 应用逆转录一巢式聚合酶联反应( RT-nPCR)方法对当地急性散发戊型肝炎患者、正常人群中抗HEV-IgM阳性者和当地养猪场的猪进行HEV RNA检测,并对HEV RNA阳性标本进行克隆测序和序列分析.结果 16例急性散发戊型肝炎患者中有7例粪便标本HEV RNA阳性;51份lgM阳性正常人群血清标本中有1份HEV RNA阳性;34份猪胆汁标本中有1份HEV RNA阳性.序列分析发现该地区HEV人株与猪株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为87％～ 98.1％.7株患者的戊肝病毒基因型和1株猪的戊肝病毒基因型均为Ⅳ型,基因序列同源性在87％ ～ 98.1％之间;其中有6例患者和猪的基因序列同源性在93.9％ ～98.1％之间,为Ⅳ型a亚型;1例患者和猪的基因序列同源性为87％,为Ⅳ型d亚型.正常人群的1例戊肝病毒基因型为Ⅰ型d亚型.该地区人与猪HEV的ORF2的部分基因片段与HEV Ⅰ～Ⅳ型的代表株进行比较,核苷酸序列同源性分别是82.5％～100％,81.7％ ～92.9％,81.4％ ～93.9％,84.9％ ～ 100％.结论 该地区人群中流行的HEV存在2个基因型3个亚型,主要以基因Ⅳa型为主,与猪群中流行的HEV基因Ⅳa型同源性较高;HEV Ⅰ型在人群中散在存在.     

幽门螺杆菌hpaA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析

摘要 目的 在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(HP)hpaA基因,口服免疫小鼠后检测其免疫原性。方法 PCR方法从基因组中扩增基因hpaA,将其克隆至表达载体pNICE:sec,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的hpaA蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-hpaA的乳酸菌、灭活的HP灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。结果 扩增hpaA基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-hpaA,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr分子量约29KD的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.3%,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:sec-hpaA质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活HP组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其它组（P<0.05）。结论 表达hpaA蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和HP口服疫苗的开发提供一定的实验基础。     

血清学方法和实时荧光定量PCR方法在新型布尼亚病毒检测中的应用研究

目的探讨血清学检测方法和实时荧光定量PCR方法在新型布尼亚病毒检测中的应用。方法连续采集烟台地区莱州、蓬莱疑似发热伴血小板减少综合征患者血清,分别用胶体金实验方法、ELISA实验方法检测抗新型布尼亚病毒IgM抗体,实时荧光定量PCR方法检测新型布尼亚病毒核酸,SPSS18．0统计结果。结果胶体金方法和ELISA方法检测结果总符合率为96．67％,一致性KAPPA检验K系数为0．933;胶体金方法和实时荧光定量PCR方法检测结果均受病程影响（两者P值均小于0．05）;实时荧光定量PCR2疗法检测不受年龄、性别影响（P均〉0．05）。结论新型布尼亚病毒检测发病12天以前推荐使用实时荧光定量PCR方法,发病16天以后,可使用血清学方法检测抗新型布尼亚病毒IgM抗体。     

2010年-2014年烟台流感病原学监测分析

目的了解2010年-2014年烟台市流感流行趋势及毒株型别,为烟台流感的防控提供依据。方法采集2010年-2014年烟台市流感监测哨点医院流感样病例标本,用MDCK细胞分离流感病毒后,用血凝抑制试验进行型别鉴定,SPSS 17.0对数据进行分析。结果共采集标本6 235份,分离病毒860株,阳性率为13.79%,2010年-2014年各年度的阳性率分别为9.66%、7.36%、17.15%、11.30%、19.88%,每个监测年度的分离高峰在每年12月-次年3月;0岁~4岁年龄组阳性率最低,为10.30%;5岁~14岁年龄组阳性率最高,为16.39%;2011年、2013年分别以新甲型H1N1及甲型H3N2为绝对优势株,而2010年、2012年、2014年则是2种或3种流感毒株混合流行。结论烟台市流感流行季节性明显,12月-次年3月高发,流感病毒为混合流行,优势毒株交替出现,主要累及青少年人群,应加强青少年的流感防控工作。     

幽门螺杆菌alpA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析

目的:在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Hp)黏附素al-pA基因,口服免疫小鼠后检测其免疫原性。方法:PCR方法从基因组中扩增alpA基因,将其克隆至表达载体pNICE:sec,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的alpA蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-alpA的乳酸菌、灭活的Hp灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。结果:扩增alpA基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-alpA,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约56 000的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.6%,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:sec-alpA质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活Hp组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组(P0.05)。结论:表达al-pA蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和Hp口服疫苗的开发提供一定的实验基础。     

山东省烟台市人与动物新型布尼亚病毒感染调查及同源性分析

目的 了解山东省烟台市人和动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 （SFTSV）感染及流行情况。方法 2011年4－11月分别在烟台市的蓬莱和莱州2个SFTS病例高发地区连续采集与人密切接触的5种家养动物 （羊、 牛、 猪、 犬、 鸡） 血清标本3 576份,应用双抗原夹心ELISA方法和Real time RT-PCR方法检测血清中SFTSV总抗体和病毒核酸; 观察不同月份感染情况; 采集两地人群血清2 590份,应用间接ELISA方法检测SFTSV IgG抗体; 用Vero细胞从核酸阳性的人和动物血清中分离病毒,通过RT-PCR方法对 SFTSV S片段进行序列扩增、 同源性分析。结果 3 576份动物血清标本中SFTSV血清总抗体阳性1 439份,阳性率为40.24%,病毒核酸阳性163份,阳性率为4.56%。其中羊、 牛、 鸡、 犬、 猪抗体阳性率分别为62.78%、 52.97%、 45.56%、28.73%和1.45%,核酸阳性率分别为5.72%、 4.63%、 3.02%、 5.25%和3.73%。动物体内的抗原抗体随季节消长而变化。2 590份人群血清SFTSV IgG抗体阳性率为5.41%。对10株来自人的毒株和3株来自动物的毒株进行S片段基因序列扩增分析,显示其同源性在95.23%～100.00%,与国内其他省市分离毒株比较,其同源性在94.72%～99.13%,高度同源。结论 烟台地区存在SFTSV流行,人与家养动物普遍易感,其基因序列高度同源,提示家养动物可能作为SFTSV的增殖宿主和扩散宿主,应引起高度重视。     

2017年烟台市病毒性腹泻病原学监测分析

目的研究2017年烟台市病毒性腹泻病原学的分布特征,为感染性腹泻防治提供依据。方法采集烟台市二级以上医院2017年1月-12月的病毒性腹泻病例粪便标本。采用ELISA法检测轮状病毒(Rotavirus,RV),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对得到的阳性标本进行RV-A病毒的检测,用RT-PCR法进一步对阳性标本进行基因分型。诺如病毒(Norovirus,NV)利用qRT-PCR法检测并分型。利用SPSS 17.0软件进行数据统计分析。结果共检测753份标本,ELISA法检测轮状病毒阳性率为16.33%(123例),qRT-PCR法检测阳性率轮状病毒A组为13.94%(105例),诺如病毒为10.36%(78例)。轮状病毒腹泻主要在冬春季流行,3月和12月份阳性率较高。诺如病毒全年均可发病,主要在6月份流行。2种病毒各年龄段均可感染,轮状病毒婴幼儿感染居多。2种病毒感染无性别差异。轮状病毒A组基因型以G9型和P[8]型为主,诺如病毒基因型以GⅡ型为主。结论病毒性腹泻全年均可发生,各年龄组男女均可感染。轮状病毒阳性检出率较高,为烟台地区病毒性腹泻的主要病原。     

烟台市一起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情调查及存活病例1年随访分析

目的 分析报告烟台市首起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情,并了解人感染H7N9禽流感病例临床治疗后各项指标的恢复情况。 方法 对该起疫情进行流行病学调查,并对存活病例进行随访,对发病后1、3、6、12个月的复查结果进行比较、分析。 结果 病例1(父)有活禽接触史,救治无效死亡;病例2(子),与其父密切接触后发病,经治疗康复出院。存活病例发病1个月后复查血常规、肝功能和超声心动图检查正常;6个月后,自觉症状消失,肺部听诊无异常。发病1年内,心律异常持续存在,肺功能逐渐改善,肺部病灶逐渐吸收,仍留有条索状影及结节状高密度影。 结论 此疫情为人感染H7N9 禽流感家庭聚集性疫情,感染途径可能为禽类暴露和有限的人传人。人感染H7N9禽流感病毒造成的肝脏和肺部损害有逐渐恢复的可能,心律失常可否恢复尚待进一步观察。