甲型流感病毒荧光RT-PCR检测方法的设计和检定

目的　设计甲型流感病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法并对其进行检定。方法　用DNAStar和PrimerPremier5. 0软件设计甲型流感病毒荧光PCR检测所用引物和探针 ;在GenBank中进行Blast以及电子对比证明其具有高度的特异性和保守性 ;和标准RT-PCR进行比较 ,检测此方法的灵敏度。结果　所设计的引物和探针高度特异和保守 ,灵敏度比标准RT-PCR方法高 3～ 27倍 ,并且反转录和PCR可合并为一步。结论　设计了甲型流感病毒TaqMan检测方法 ;该方法具有特异、灵敏和简便的特点     

四川资阳猪源猪链球菌病病原的分离与鉴定

目的四川省部分地区发生的不明原因的猪源人畜共患病病原菌的分离与鉴定。方法采用普通RT-PCR和实时荧光PCR相结合的方法对流感和尼帕病毒的RNA进行检测，在Vero细胞和SPF鸡胚同时进行病毒分离，用血清平板对病料进行细菌分离，同时用革兰染色、生化试验、血清凝集试验和PCR进行鉴定，并对分离到的细菌进行药敏试验。结果排除了流感病毒和尼帕病毒感染的可能性。从病料组织中成功分离到3株链球菌，证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定，结果发现溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外蛋白因子（EF）均为阳性。进一步的药敏试验证实：分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅵ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢呋肟等抗菌药高度敏感。结论病原为猪链球菌Ⅱ型。     

应用多重荧光Real-time PCR快速鉴定猪链球菌2型

目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR方法。结果能在3h内对送检组织样品检测确定S.suis2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml。与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍。与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis1型、9型等无交叉反应。同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著。用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis2阳性,MRP阳性。而在肌肉中,S.suis2和MRP均为阴性。结论建立的多重荧光Real-timePCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis2型组织样品的快速定型和毒力鉴定。     

大鼠静脉输注罗哌卡因与利多卡因混合液的毒性反应

目的 探讨罗哌卡因与利多卡因混合应用对中枢神经系统(CNS)和心血管(CV)毒性反应的影响。方法 Wistar大鼠36只,随机分为3组,每组12只。A组静脉注射(ⅳ)0.5％罗哌卡因2mg·ks~(-1)·min~(-1),B组ⅳ 1.0％利多卡因4mg·ks~(-1)·min~1,C组ⅳ 0.5％罗哌卡因2mg·kg~(-1)·min~(-1) 1.0％利多卡因4mg·kg~(-1)·min~(-1)。麻醉及相关操作后持续监测脑电图、心电图、平均动脉压(MAP)。待呼吸、循环稳定20min后,血气分析值正常,记录此时的MAP、心率(HR)作为基础值,输入相应的局麻药。记录出现CNS毒性(SZ)、心律失常(DYS)和心脏停搏(ASYS)三个中毒点的时间、计算输入局麻药累积剂量。在各点采动脉血,用高效液相色谱仪测血浆中局麻药浓度。结果 A组发生SZ、ASYS时罗哌卡因累积剂量大于C组(P<0.05),但发生DYS时差异无显著性。B组发生SZ、DYS、ASYS时利多卡因累积剂量大于C组(P<0.05)。A组发生SZ、DYS、ASYS时罗哌卡因血药浓度与C组比较差异无显著性;B组发生SZ、DYS、ASYS时利多卡因血药浓度与C组比较差异无显著性。结论 0.5％罗哌卡因与1.0％利多卡因混合应用后增加了CNS和CV系统毒性。