刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌细胞ct26体外增殖和细胞周期的影响

目的研究刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用的分子机制。方法取对数生长期的小鼠结肠癌ct26细胞,建立弓形虫与ct26复合感染度(moi)分别为1∶1、2∶1、4∶1、8∶1、16∶1的共培养试验模型,台盼兰排斥试验连续7d绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测8∶1共培养模型组6h、12h、24h、48h细胞周期改变;采用半定量RT-PCR方法分别检测ct26细胞cyclinB1、cdc2基因转录水平变化;Westernblot方法检测细胞周期蛋白cyclinB1蛋白水平变化。结果台盼兰排斥试验发现各比例组弓形虫均能有效抑制小鼠ct26细胞的体外增殖,且呈现前4d缓慢抑制,4d后细胞大量死亡的现象,以8∶1模型组的增殖抑制作用最明显,感染7d后细胞抑制率达80.77%(P0.01);流式细胞仪检测发现8∶1模型组弓形虫可在各作用时间明显改变ct26细胞周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P0.01),24h达到作用高峰,使G2/M期百分比升高12.77%,48h则细胞G2/M期百分比下降;弓形虫感染ct26细胞3～24h,细胞cdc2转录水平在各个时间点未见明显变化,细胞cyclinB1从转录水平和蛋白水平均呈现为感染3h时表达增强,随后各时间点均明显降低的现象,cyclinB1基因转录水平在感染后24h只达到对照组的16.55%。结论弓形虫RH株速殖子可明显抑制小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖,感染前期以诱导细胞发生G2/M期阻滞为主要机制,细胞周期蛋白cyclinB1活性下降在G2/M期阻滞中起主要作用。     

抗结核新药普托马尼研究进展

由于对一线药物存在很大的耐药性,广泛耐药结核病和多药耐药结核病往往很难完全治愈。普托马尼（Pretomanid,PA-824）是目前临床试验评估中的治疗耐药结核分枝杆菌的优选药物之一,该药通过抑制细胞壁的形成和呼吸中毒两种机制,对复制型和静止型结核分枝杆菌均表现出显著的杀菌活性。本文通过探讨PA-824释放活性氮物质对结核分枝杆菌产生强氧化作用和细胞毒作用、延长早期杀菌活性、降低患者痰中结核分枝杆菌载量的速度、引起可控性不良反应等作用,全面了解该药物的抗结核作用机理,包括抑制结核分枝杆菌菌株耐药性的发展、缩短结核病治疗的持续时间等。本文还阐述了PA-824、贝达喹啉和利奈唑胺联合治疗,该联合方案具有相当的杀菌活性,在杀灭细菌和抑制耐药性方面具有协同或相加的作用潜力,对XDR-TB或者MDR-TB具有更好的治疗效果。有望进一步改善目前结核病的治疗现状     

刚地弓形虫对荷瘤小鼠肿瘤组织微血管生成的抑制作用

摘 要：目的 观察刚地弓形虫感染对BALB/c小鼠ct26细胞皮下移植瘤血管生成的抑制作用及其作用机理。方法 建立刚地弓形虫感染的小鼠结肠癌ct26皮下移植瘤模型,观察弓形虫感染对小鼠的生存延长率、对肿瘤的质量抑制率,并采用免疫组化方法检测弓形虫感染对肿瘤组织MVD、VEGF、TSP-1表达的影响。结果 弓形虫感染的小鼠生存时间比对照组长（P<0.05）,生存延长率为57.45%,肿瘤质量抑制率为47.23%;弓形虫感染的小鼠肿瘤组织中MVD及VEGF表达水平低于对照组（P=0.005,P=0.03）,TSP-1表达高于对照组（P=0.005）。结论 弓形虫感染能抑制荷瘤小鼠肿瘤组织微血管生成;下调VEGF及上调TSP-1与弓形虫感染抗肿瘤血管生成有关。     

刚地弓形虫RH株速殖子协同VP-16体外杀伤小鼠结肠癌细胞ct26的作用

目的探讨刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞周期的影响及其协同细胞周期特异性抗癌药依托泊甙(VP-16)对ct26细胞的杀伤作用。方法建立弓形虫RH株速殖子与小鼠结肠癌ct26细胞不同比例的共培养模型(虫/细胞比例分别为2:1、4:1、8:1、16:1),流式细胞仪检测24h细胞周期改变;以虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h,CCK-8比色法观察不同浓度VP-16对细胞增殖抑制的改变;荧光显微镜观察VP-16(40μg/mL)对感染虫体细胞的形态学改变。台盼蓝染色观察不同浓度VP-16分别作用弓形虫RH株速殖子悬液(1×106/mL)2h、4h、12h、24h的虫体存活度改变。琼脂糖凝胶电泳观察VP-16(20μg/mL)对虫体DNA影响。结果流式细胞仪检测发现各浓度弓形虫速殖子均可明显改变ct26细胞24h周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P0.01)。2×106个速殖子感染细胞24h可使S期和G2期细胞百分比共同增长14.92%。CCK-8比色法检测结果显示虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h可有效增强各浓度VP-16对ct26细胞的杀伤作用;Hochest33258染色结合荧光显微镜观察到虫体胞质寄生形态及VP-16诱导感染细胞凋亡典型形态;10μg/mL及更高浓度VP-16作用弓形虫4h以上均可使虫体全部死亡;琼脂糖凝胶电泳发现VP-16(20μg/mL)可使弓形虫速殖子DNA呈现典型的云梯状条带。结论弓形虫RH株速殖子可使小鼠结肠癌ct26细胞发生G2/M期,可有效增强细胞周期特异性抗癌药VP-16的抗癌作用,且弓形虫增殖亦明显受抑并发生凋亡。     

hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响

目的 构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况.方法 依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体.采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株.采用酶切、测序检测载体构建;Western blot检测E-钙粘蛋白的表达.结果 酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功.Western blot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比,转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加(P<0.01),密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%.结论 成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体,hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达.     

轮状病毒NSP4胞质区在杆状病毒系统的表达及其黏膜佐剂效应评价

目的：应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒（RV）非结构蛋白NSP4的胞质区（CF）片段（47～175 aa）,并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法：将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体介导Bac-NSP4-CF转染sf9细胞,收获细胞并传代培养。测定病毒滴度,Western blot检测目的蛋白表达情况。纯化后的重组NSP4-CF与卵清蛋白（OVA）滴鼻共免疫小鼠,并检测其黏膜免疫佐剂效应。结果：在杆状病毒系统中成功获取了NSP4-CF重组蛋白,Western blot检测可见约16 kD的特异性条带;重组NSP4-CF与OVA共免疫小鼠后,小鼠血清OVA特异性IgG、IgA抗体水平与肠道SIgA水平较OVA单独免疫组均有升高（P<0.05）;ELISPOT检测结果表明NSP4-CF佐剂组（5μg）分泌IFN-γ的脾细胞平均数均高于OVA组（P<0.05）。结论：经昆虫细胞表达系统可获得RV NSP4胞质区（47～175 aa）重组蛋白,该蛋白与模式抗原经黏膜途径免疫小...     

子午流注指导下练习瑜伽改善肾虚症状的试验研究

【目的】评价子午流注指导下练习瑜伽对改善肾虚症状的有效性。【方法】采用单盲对照试验方法,共纳入21例肾虚证者,分为试验组10例和对照组11例。对照组脱落1例,最终试验组为10例,对照组为10例。试验组于肾经时间北京时间18∶25－19∶25（广州地方时酉时）练习瑜伽,对照组于非肾经时间10∶00—11∶00练习相同的内容。课程形式为阴瑜伽和流瑜伽。试验期为1个月。【结果】（1）试验组总有效率为80．0％,对照组为60．0％,2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）练习瑜伽后,试验组肾阴虚腰膝酸软、五心烦热和肾阳虚腰膝酸软、气促等症候有明显改善,与练习瑜伽前比较差异有统计学意义（P＜0．05）;对照组除夜尿频多有明显改善（P＜0．05）外,其他肾虚症候积分与练习瑜伽前比较,差异无统计学意义（P＞0．05）;2组练习瑜伽后比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。（3）在练习瑜伽过程中,2组均未出现明显的不良反应。【结论】在酉时练习刺激肾经的瑜伽体位,其改善肾虚症状的效果具有优于在其他时间练习同样瑜伽体位的趋势,但是子午流注指导下练习瑜伽改善肾虚症状的有效性尚不具有统计学意义。     

神经莱姆病诊治进展

莱姆病(Lyme disease,LD)是由伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)引起的一种多阶段、多系统的疾病,主要影响皮肤、心脏、关节和神经系统 [1].LD在北美、欧洲、亚洲不同地区包括中国、澳大利亚和非洲等都有报道 [2].LD的发病率在过去数十年里大幅增加,美国每年有超过25 000例新的确...     

高强度聚焦超声结合微泡造影剂杀伤原头蚴的效果

目的:探讨高强度聚焦超声结合不同比例微泡造影剂对离体原头蚴的杀伤效应.方法:在原头蚴悬液中加入不同比例的微泡造影剂（含氟脂质体微泡）,以相同超声功率及辐照时间作用（治疗声功率为50W,辐照时间为30s）.台盼蓝排斥试验计数原头蚴杀伤率,光镜检测原头蚴形态结构变化.结果:超声剂量一定时,加入适宜比例的微泡造影剂组原头蚴杀...