一株草鱼呼肠孤病毒检测用单克隆抗体的制备及其特性

草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(Grass CrapReovirus,GCRV)引起的病毒性疾病,传染性强,对草鱼的致死率极高,是危害我国水产养殖业最严重的疾病之一[1]。因此,采用快速有效的手段检测草鱼呼肠孤病毒对诊断草鱼出血病具有重要的意义。鉴此,本实验在制备了对GCRV具有良好中和能力     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析

目的:制备环丙沙星单克隆抗体,并分析其免疫学特性,为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法:用人工抗原环丙沙星-小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB/c小鼠,产生预期免疫应答后,将小鼠脾细胞与瘤细胞融合,经初筛、复筛和再克隆,筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和8F56株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果:1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a;6H2和8F5的抗体亚型为IgG1;6G11的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD,轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中,细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6.4×102和1∶5.6×105,亲和力常数可达2.85×109L/mol,IC50值可达245.86ng/ml,最低检测限为45.25ng/ml,对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应,与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为84.6%。结论:本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性,可用于环丙沙星残留免疫学检测。