来源于人胚室下区神经干/祖细胞的贴壁法培养和鉴定

目的建立有效的人胚胎神经干/祖细胞分离及纯化方法以达到临床需要。方法无菌取胎脑室管膜下区组织,经反复机械吹打制备细胞混悬液,采用贴壁法进行体外培养、传代。传代后用Nestin进行细胞鉴定。结果应用贴壁法进行胎脑室管膜下区神经干/祖细胞的培养能够稳定传代20代以上;共聚焦显微镜下可见Nestin阳性细胞表达呈递增趋势,传至P3(passage3)阳性率为35%,P7为79%,P12为90%,P15为99%。传到前七代时分别做细胞存活率鉴定,可达(82.57±1.38)%。结论成功建立了来源于人胚室下区的神经干/祖细胞的贴壁法培养,为该细胞移植治疗神经系统疾病提供了技术方法支持。     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.     

人骨髓基质细胞培养、纯化和鉴定

目的:介绍一种为临床细胞学治疗提供自体骨髓基质细胞(BMSCs)的分离纯化方法.方法:采用红细胞沉降和密度梯度离心相结合的分离纯化方法从骨髓血中分离BMSCs.台盼蓝染色实验测定BMSCs活力;对BMSCs进行CD44、CD34抗体免疫荧光显色,激光共聚焦显微镜观察.结果:BMSCs活性大于95%,纯度大于85%,细胞的纯度和均一性均符合中国卫生部第三类医疗技术的要求,已达到临床应用标准.结论:本细胞制备方法简单易行,可批量获得BMSCs,满足临床治疗的需要.     

人胚胎嗅球嗅鞘细胞的制备

目的 探讨人胚胎嗅鞘细胞(OECs)培养与纯化的优化方法.方法 取3～5个月流产胚胎,无菌条件下取出嗅球,解剖镜下仔细剥离嗅球表面的软膜组织和血管,消化后用条件培养基制成密度为106个细胞/ml细胞悬液,利用差速贴壁法结合阿糖胞苷抑制法进行无血清纯化液细胞纯化培养,对不同培养时期进行观察和行P75NGFR(低亲和力神经...     

三种人胚胎许旺细胞培养方法的比较

目的比较三种不同培养方法对许旺细胞纯度影响。方法应用三种不同的培养方法对10份人胚胎样本的坐骨神经分别采用植块培养法、差速贴壁法、分次消化法进行培养观察。并采用S100免疫荧光化学方法鉴定许旺细胞,Hoechst染色标记细胞核,统计许旺细胞纯度。结果三种培养方法其获得的细胞纯度分别为:分次消化培养法为90%,差速贴壁法为75%,植块培养法为67%,分次消化培养法获得的细胞纯度明显高于其他两组(P<0.05)。结论分次消化培养法较差速贴壁法、植块培养法更易获得高纯度许旺细胞。     

人胚嗅球嗅鞘细胞原代培养的实验研究

目的拟建立人胚胎嗅球嗅鞘细胞的培养方法并探讨这些细胞在活性、纯度方面是否具备临床应用水平。方法用含有促进细胞生长的谷氨酰胺、转铁蛋白、生物素、硒酸纳的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。采用台盼蓝染色法进行活性测定,P75NGFR和S-100双标免疫荧光染色鉴定,以Hoechst复染鉴定OECs的纯度。结果可见比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆形,主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞活性大于95%,纯度大于90%。结论实验建立的人胚胎嗅球嗅鞘细胞原代培养的方法可行,细胞活性大于95%,纯度和均一性已达到临床应用水平。     

成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养与免疫学特点

目的探讨成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养方法及嗅鞘细胞(OECs)的免疫学特点。方法通过手术取成人嗅区黏膜7例,将其消化为单个细胞后采用差速贴壁法除去成纤维细胞。倒置显微镜下行形态学观察,并利用p75、S100、GFAP抗体对嗅鞘细胞进行免疫荧光化学染色,共焦显微镜下进行各种抗体阳性率的统计。结果共焦显微镜下可见嗅黏膜细胞中S100和p75阳性细胞多见,GFAP阳性细胞在嗅黏膜细胞中较少见。一般在同一细胞上可见S100和p75共同表达,而GFAP与S100、p75未见有共同表达现象;p75阳性细胞胞体大小和形态也大不相同。经统计S100和p75阳性细胞的平均百分率为(35.0±8.3)%。结论成功进行了成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养。     

两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较

目的:建立海马神经元适宜的冻存方法.方法:将新生24 h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中,复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性;培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞,分别进行Hoechst,微管蛋白(Tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)显色后,荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率,从而建立最佳冻存方法.结果:冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87.5%,冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73.8%,高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的;而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9.5%和16.5%,胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组.结论:高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长.     

波依定与银杏叶联合方案应用于老年高血压中的临床疗效刍议

目的 探讨波依定与银杏叶联合方案应用于老年高血压中的临床疗效.方法 该研究开展时间为2015年10月—2016年10月,方便选取该院收治的110例老年高血压患者,随机分组为观察组和对照组,男女各为65、45例,对照组给予银杏叶片口服治疗,观察组在银杏叶的治疗基础上,加上服用波依定口服,观察比较两组患者治疗效果、血压水平、血清C反应蛋白水平、内皮素水平、IL-6水平和不良反应发生率.结果 ①与对照组(72.73%)对比,观察组临床有效率(96.36%)明显更高,数据比较差异有统计学意义(P<0.05).②与对照组对比,观察组治疗后SBP(129.91±3.30)mmHg、DBP(75.55±3.35)mmHg、CRP(1.63±1.35)mg∕L,ET(15.5±3.3)μg∕mL、IL-6(45.55±5.55)pg∕L明显更低,数据比较差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前对比,观察组SBP、DBP、CRP、ET、IL-6明显降低,数据比较差异有统计学意义(P<0.05).③两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 波依定与银杏叶联合方案应用于老年高血压中的临床疗效显著,能够有效地保护患者的靶器官受损,具有临床应用价值.     

分析和探讨妇产科护理中感染问题

目的对妇产科护理过程中发生的感染问题进行深入的思考。方法择取本院妇产科2016年5月至2018年3月收治的住院患者80例设置为本次的观察对象,并对其感染问题进行调查分析。结果妇科与产科的感染发生率均为5.0%,比较数据无统计学意义;比较妇科与产科患者的住院时间差异显著(P0.05)。结论妇产科患者发生感染的原因与感染种类多种多样,临床上需加强疾病护理工作,使得感染发生率显著降低,确保患者的治疗效果。