成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达

目的　 研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达的变化。结果　 正常纹状体内可观察到微弱的淡染nestin样免疫活性阳性细胞 ;大鼠纹状体KA损伤后 1d ,nestin样免疫活性增强 ;第 3天nestin样免疫活性达峰值 ,nestin样免疫活性阳性细胞的胞体肥大 ,突起粗大 ,分支增加 ;此后nestin样免疫活性阳性细胞染色强度减弱 ,其胞体和突起逐渐变小变细。 结论　 成年大鼠纹状体内注射海人藻酸可诱导nestin的大量表达 ,该表达可能与脑损伤后的自身修复相关。     

Nlrp3敲减对cuprizone诱导的脱髓鞘小鼠焦虑症状的影响

目的:探讨NOD样受体家族pyrin域3(Nod like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)对脱髓鞘损伤致小鼠焦虑情绪的影响。方法:雄性C57BL/6小鼠分为对照组、双环己酮草酰二腙(CPZ)模型组、CPZ+Nlrp3 shiNA组和Nlrp3 shRNA组;将对照或Nlrp3 shRNA慢病毒分别立体定位注射至小鼠胼胝体。1周后,小鼠喂食CPZ并测量喂食期间小鼠体质量;开场实验检测小鼠活动区域与距离,LFB-PAS染色观察脱髓鞘程度。结果:CPZ喂食2周内,小鼠平均体质量急剧下降;到5周时,CPZ模型组平均体质量显著低于对照组与CPZ+Nlrp3 shRNA组。行为学检测显示,对照组和CPZ+Nlrp3 shRNA组小鼠后肢站立次数较CPZ模型组明显减少,而中央区域活动距离与活动总距离的比值CPZ模型组显著增加。LFBPAS染色显示CPZ模型组胼胝体膝部髓鞘几乎完全缺失,其髓鞘化评分显著低于正常和CPZ+Nlpr3shRNA组。结论:Nlrp3敲减可缓解CPZ诱导的小鼠髓鞘脱失,并改善其焦虑症状。     

局灶性脑缺血后神经干细胞增殖及GDNF表达变化的实验研究

目的研究局灶性脑缺血后大鼠脑内神经干细胞(NSCs)增殖情况及与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化的关系。方法将24只SD大鼠随机分为假手术组和模型1组、模型2组、模型3组各6只,后三组用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,分别于术后3、7、14 d处死;假手术组除不以尼龙线阻塞大脑中动脉起始部外,其他操作与模型1组相同。采用免疫组化染色法观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的细胞及巢蛋白(Nestin)、GDNF阳性细胞表达,BrdU/Nestin免疫荧光双标法观察NSCs变化。结果模型2组损伤侧脑室下层(SVZ)BrdU阳性细胞显著多于假手术组(P<0.05),模型3组与假手术组相似;模型2、3组皮层梗死灶周围BrdU阳性细胞均显著多于假手术组(P<0.01、0.05);模型1、2组皮层梗死灶周围Nestin阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.01),BrdU/Nestin免疫荧光双标显示BrdU阳性细胞几乎均为Nestin阳性;模型2、3组皮层梗死灶周围GDNF阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血后3～14 d内源性NSCs增殖加快,GDNF表达增加可能对其起促进作用。     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的 对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法 新生1~2 d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8 d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2 d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果 光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论 通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

多发性硬化患者外周血S100A8/A9、TLR4和MMP-2表达水平的变化

目的:探讨多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者外周静脉血血清钙结合蛋白复合物(S100A_8/A_9)、Toll-样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和基质金属酶蛋白2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达水平的变化。方法:选取MS患者16例作为MS组,健康体检者16例作为对照组。采用蛋白芯片检测法对血清样本进行检测,定量分析血清S100A_8/A_9、TLR4和MMP-2表达水平的变化。结果:MS组血清S100A_8/A_9、TLR4和MMP-2水平均高于对照组(P0.01);MS组患者血清中上述3个指标具有明显相关性(P0.05)。结论:MS患者血清S100A_8/A_9、TLR4和MMP-2表达上调,联合检测三者可能有助于临床MS疾病活动状态的判断。     

成年神经发生及其在缺血性脑损伤治疗中的应用前景

近年来的研究表明，成年哺乳动物中枢神经系统存在神经干细胞。并且在整个成年期有持续的神经发生。中风能使齿状回颗粒下层和脑室下层的神经发生增加。新产生的神经元能够迁移到损伤区并表达已死亡神经元的标记物。这些研究为脑损伤后的自身修复带来了希望。本文作者主要对成年神经发生和调节以及中风诱导的神经发生和调节进行综述，并进一步探讨中风或其他脑损伤后神经再生的研究方向。     

血管内皮细胞生长因子在缺血性脑损伤中血管新生、神经发生和神经保护的作用

血管内皮细胞生长因子（VEGF）是血管发生和神经营养因子，不仅能促进血管新生，还能直接作用于神经细胞发挥神经营养和神经保护作用。缺血性脑损伤诱导VEGF及其受体表达，促进血管内皮细胞增殖，减少梗死体积；并通过IP3K／Akt／NF-κB和MAPK／ERK信号途径介导神经营养和神经保护作用，减少凋亡，促进神经干细胞增殖、迁移和分化，改善神经功能。但由于VEGF能增加血管通透性，在缺血早期可能加重脑水肿。     

对神经生物学实验教学的几点体会（摘要）

神经生物学是生命科学中发展最迅速的一门前沿学科,研究神经系统特别是脑的形态结构和活动规律,具有无限的生命力和发展潜力.神经生物学是一门以实验为主的自然学科,掌握好神经生物学实验课对学生的将来发展具有重要的意义.但是神经生物学是一门新兴的学科,在高校教学中远远没有那些经典的学科如解剖学、药理学等那样成熟,现将我对这门实验课教学的几点体会介绍如下.     

立足本学科特色加强神经生物学基础知识与临床的联系（摘要）

我校神经生物学教研室暨神经生物学研究中心成立于1996年,同年成为江苏省第一个神经生物学专业硕士学位授予点,现神经生物学实验室已建设成为我院重点实验室.神经生物学学科在我校除开设有本科生的专业选修课程外,还开设有研究生专业或专业基础课程,近年来,每年选修本课程的研究生人数已达200多名.20余年的教学和科研使我们认识到研究生的教学内容应考虑到不同层次学生的专业背景和研究方向.     

miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠发病的作用

目的:探讨在体过表达miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脱髓鞘病变的作用。方法:构建含稳定表达miR-30a的shRNA慢病毒载体,以含有空载体的慢病毒为对照(LV-ctrl)。雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(normal)、对照慢病毒(LV-ctrl)组和miR-30a慢病毒(LV-miR-30a)组,2组慢病毒经尾静脉注射,注射7 d后用MOG35-55多肽免疫小鼠。Kono 5分法检测发病情况,快蓝(LFB)染色及透射电镜检测脊髓脱髓鞘程度及髓鞘结构的变化。结果:LV-ctrl组小鼠在MOG_(35-55)多肽免疫的第10天开始发病,到第21天,其Kono评分为2.57±0.79,LV-miR-30a组小鼠的Kono评分显著低于LV-ctrl组小鼠;miR-30a处理可显著提高小鼠体质量增长率,同时LFB评分也较LV-ctrl组显著增加;髓鞘超微结构显示LV-ctrl组小鼠脊髓髓鞘板层松解且稀疏,而LV-miR-30a组小鼠的髓鞘结构相对完好,髓鞘厚度显著大于LV-ctrl组。结论:过表达miR-30a可以明显减缓EAE的发病,减轻脊髓脱髓鞘程度。