用锅柄聚合酶链反应法克隆卡地腐霉Pr1基因的未知片段

目的：分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知片段的3′端未知序列。方法：采用PANHANDLE PCR，以基因组DNA为模板，通过链内退火及延伸形成一个类似锅柄形状的结构，经嵌套式PCR扩增得到未知目的片段。通过已知cDNA片段设计引物，PCR扩增得到该蛋白酶部分基因组序列，采用限制性内切酶BamH Ⅰ消化卡地腐霉基因组DNA，经去磷酸化处理后，在消化片段3′端连接一段与卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因5′端已知序列互补的5′端磷酸化寡核苷酸链NA，经链内退火及聚合酶延伸形成一锅柄状结构。结果：获得一大小为876bp的PCR产物，经序列分析验证，该panhandle PCR产物包含了已知卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因3′端未知的853bp核苷酸序列。结论：这种特殊的PCR方法可以高度有效地克隆和鉴定已知片段两侧的未知基因片段。     

金龟子绿僵菌酸性海藻糖酶基因的序列特性分析

目的 获得酸性海藻糖酶基因(ATM1)并对其序列进行分析.方法根据已知序列设计引物,PCR扩增出金龟子绿僵菌ATM1的cDNA和DNA序列,对其推导的氨基酸序列基于多序列局部比对和结构的序列比对进行分析.结果ATM1 cDNA序列包含开放阅读框(ORF)3 219 bp,3'端非翻译区(3'UTR)175 bp和5'端非翻译区(5'UTR)498 bp.结论成功获得ATM1基因,通过序列分析确定出4组保守性功能序列.ATM1基因在CQMal02基因组中为单拷贝.     

成纤维细胞生长因子(FGFs)促进血管形成的研究进展

血 管新生 (angiogenesis)又称为新血管形成 ,是时常发生的生理和病理现象 ,如妇女子宫内膜的周期性重建 ,伤口愈合 ,慢性心肌和肢体缺血等都存在新血管形成现象 ,其形成过程非常复杂。新血管形成通常是在原有血管网络的基础上形成新的血管分支 ,这些分支再相互连接形成成熟的血管。其形态学变化包括如下几步 :(1)释放血管生长因子 ,内皮细胞表达蛋白酶使细胞基底膜断裂 ;(2 )内皮细胞粘附解体 ;(3)内皮细胞迁移至基膜 ;(4)内皮细胞增殖 ;(5 )管腔形成 ;(6 )基膜再生 ,募集外膜细胞 ,形成成熟血管。无论是生理的或病理的血管形成 ,血管生长…     

酸性成纤维细胞生长因子研究进展

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是一种重要的生长因子,其生物学效应广泛,具有潜在的临床应用价值.文章概述了aFGF及其受体的结构与功能关系的研究进展,提出了aFGF临床使用时可能存在的问题.     

酸性成纤维细胞生长因子研究进展

酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)是一种重要的生长因子 ,其生物学效应广泛 ,具有潜在的临床应用价值。文章概述了aFGF及其受体的结构与功能关系的研究进展 ,提出了aFGF临床使用时可能存在的问题     

载脂蛋白E基因多态性与颅脑损伤的相关性

目的探讨在中国人群中载脂蛋白E(APOE)基因多态性与颅脑损伤病情的相关性。方法收集70例颅脑损伤患者的临床资料,每对象抽取静脉血2ml,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测APOE基因型,分型结果与临床资料等分别采用SPSS11.5软件进行χ2检验和Logistic回归分析。结果在13例APOEε4等位基因携带者中有5例(38%)病情加重(较入院时脑内血肿体积增大,迟发性血肿等),明显高于非ε4等位基因携带者(12%,P<0.05);单因素和多因素logistic回归分析均提示,ε4是病情加重的危险因素。结论APOEε4等位基因是颅脑损伤患者病情加重的危险因素。     

贡嘎蝠蛾幼虫肠道菌群的分析

贡嘎蝠蛾(Hepialus gonggaensis)幼虫是名贵中药材冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的优势寄主。研究贡嘎蝠蛾幼虫肠道菌群,对研究蝠蛾的营养生理,提高幼虫成活率,进而人工培殖冬虫夏草具有重要意义。实验以四川康定采集的贡嘎蝠蛾为实验材料,对贡嘎蝠蛾幼虫的肠道细菌进行了分离和鉴定。实验结果表明,贡嘎蝠蛾肠道细菌都属低温菌,最适生长温度15℃,在15℃培养2d后才长出典型菌落。从肠道中分离纯化出12个不同菌群,其中优势菌群为葡萄球菌,菌群数量为2.05×109mL-1,检出率100%,应为幼虫肠道中的常住菌群,其它菌群检出率均低于50%,可能为肠道…