4种免疫法促甲状腺素检测系统结果的一致性评价王丹晨,禹松林,尹逸丛,国秀芝,程歆琦 ,邱玲,马超超,张瑞丽,刘茜,刘荔,高学慧,张葵 (中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科,北京100730)

目的 比较4种免疫法促甲状腺素(TSH)检测系统结果的一致性。方法 性能验证。收集2018年3至4月北京协和医院临床检测剩余新鲜血清标本共102份,用于方法学比对。参考CLSI EP15-A2 及EP9-A2方案进行精密度评价及方法学比对。分别采用雅培 i2000、贝克曼 DXI 800、西门子 ADVIA Centaur XP及罗氏 e601(标为A~D)全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂检测102份血清的TSH水平,应用Passing Babloke及Bland Altman进行比对分析。以0.27、5.33mU/L为医学决定水平,比较各检测系统的预期偏倚。 结果 A~D四种检测系统的精密度分别为1.7~3.3%、1.8~3.9%、0.7~2.3%、0.6~1.5%,中位数(P25 ~P75 )分别为1.898(0.518~4.809)mU/L、2.819(0.719~7.020)mU/L、2.502(0.692~6.888)mU/L、3.105(0.886~7.905)mU/L。4种检测系统回归方程的决定系数R2均>0.975,相关系数(r)在0.9935~0.9971之间,截距和斜率分别为0~0.06、0.59~1.15,其中B与C两个检测系统直线回归图斜率为1.02,截距为0,相关性最好；偏差图显示不同检测系统的百分偏倚在-48.1~17.3%,A与D检测系统偏倚最大为-48.1%,B与C检测系统偏倚最小为0.3%。4种检测系统在医学决定水平处的预期偏倚为-40.7~37.2%。结论 贝克曼与西门子TSH检测试剂一致性较好,罗氏、雅培TSH检测试剂与另外两家一致性存在差异。     

ADVIA Centaur全自动免疫分析仪电磁阀故障及排除一例

ADVIA Centaur全自动免疫分析仪是德国拜尔公司最新推出的一种化学发光免疫分析仪器.它采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术,广泛用于内分泌激素、过敏源、心肌标志物、肿瘤标志物等重要指标的测定.     

贝克曼4代和5代总β亚单位人绒毛膜促性腺激素测定试剂的分析性能验证及比较

目的 对Beckman第5代化学发光法检测总β亚单位人绒毛膜促性腺激素(total β-human chorionic gonadotropin,total βhCG)试剂分析性能进行评估.方法 参照CLSI EP15-A、EP6-A、EP9-A2方案,使用Beckman UniCel Dxi-800全自动免疫分析仪评估Beckman第4代和第5代Total βhCG试剂盒的精密度、分析测量范围、稀释回收率、携带污染率及第4代和第5代试剂的可比性.选择335名表观健康女性建立5代βhCG的参考区间(年龄19～ 84岁,其中绝经后162名).结果 第4代和第5代试剂检测低、中、高水平质控物的批内CV分别为2.2％～5.0％和2.0％～2.5％,总CV分别为3.5％ ～5.1％和2.4％～2.6％;定量下限分别为0.337和0.275 IU/L;2种试剂携带污染率均小于3％;分别使用wash buffer、蒸馏水、生理盐水对样本进行1∶1～1∶199倍稀释后,使用第4代和第5代试剂分别测定,稀释回收率分别为92％～ 114％和99％～ 113％.第5代与第4代试剂比对试验的回归方程为Y=1.144X+ 10.61 (R2 =0.990),百分偏差为-10.34％ ～ 35.62％.绝经后女性的βhCG水平显著高于绝经前女性(P＜0.01),第95百分位数分别为2.10和5.60 IU/L.结论 第5代试剂的各项指标能够满足临床需求,但两种试剂之间存在一定的系统偏差,实验室应重新建立和使用新的参考区间,并做好临床沟通.     

CardioChek PA床旁血脂检测仪的准确性验证

  目的  验证CardioChek PA床旁血脂检测仪测定全血总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)和高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)的准确度及其与全自动生化分析仪结果的可比性。  方法  使用同一批号试纸条分别在3台CardioChek PA血脂检测仪上连续检测低、中、高三个浓度水平全血20次, 评价TC、TG和HDL-C各项目的批内不精密度和仪器间总不精密度; 在同一台仪器上使用三个批号的试纸条检测全血各10次, 计算批内不精密度和总不精密度。筛选血脂浓度覆盖高、中、低三个水平的54名志愿者, 清晨空腹采集末梢全血, 在3台床旁血脂仪上测定血脂; 同时采集静脉血, 在4种不同的全自动生化分析仪检测血清TC、TG及HDL-C。绘制Bland-Altman图, 比较CardioChek PA与各生化分析仪测定结果的离散趋势; 将CardioChek PA检测结果与不同生化分析系统及参考方法检测结果进行线性回归; 计算CardioChek PA与不同生化分析系统的偏差及百分偏差, 同时判定在医学决定水平处偏差是否符合相关要求。  结果  3台CardioChek PA仪器低、中、高水平的总不精密度TC分别为:2.69%、4.88%、3.51%, TG分别为5.51%、5.27%、4.96%, HDL-C分别为7.27%、6.84%、6.79%;相同仪器、不同批号试纸间总不精密度TC为4.70%, TG为7.66%, HDL-C为8.61%。CardioChek PA检测系统与4种全自动生化仪分析比对结果显示:TC与各系统的偏差最小, 在-2.21%~2.56%之间, HDL-C在-1.12%~5.57%之间, TG除与BeckmanDxC 800偏差较大外(25.85%), 与其他3个系统的平均百分偏差在-4.55%~13.34%之间。医学决定水平偏差分析显示:TC在不同医学决定水平处的偏差在-3.27%~1.96%之间, TG在-11.05%~13.06%之间, HDL-C在-5.86%~11.56%之间, 均满足美国国家胆固醇教育计划总允许误差标准(15%)。进一步的正确度验证结果显示:与参考方法比对, TC在医学决定水平处偏倚分别为1.96%和0.77%;HDL-C分别为2.34%和4.87%。  结论  CardioChek PA床旁血脂检测仪准确度满足临床需求, 适用于临床血脂异常筛查及治疗检测。     

五种血脂检测系统测定结果的可比性调查

目的 通过比较5个常用的不同血脂检测系统在使用参考方法赋值新鲜血清校准前后的结果可比性,探讨实现血脂检测一致化的方法。方法采用室内质控总变异(CV%)评价5个血脂检测系统的不精密度。参考美国临床及实验室标准化委员会(CLSI)EP 9A2方案,比对54份新鲜患者血清在5个临床常用的总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)检测系统上的结果,并将不同检测系统结果与均值进行偏倚评估。其中8份样本采用参考方法定值,并评估不同系统的偏倚。尝试采用参考方法赋值的新鲜冰冻血清校准以上检测系统,并使用相同的54份患者新鲜血清再次进行比对及偏倚评估。比对校准前后54份样本在不同检测系统测定的变异。结果 5个检测系统TG总不精密度在3.76%～23.65%之间,TC在2.19%～23.43%之间。各系统结果相关良好,TG和TC的r值分别在0.996 7～0.999 6和0.956 2～0.996 7之间,但系统间结果存在较明显的偏差,各系统最大百分偏差TG在14.72%～34.21%,TC在3.11%～14.57%。用参考方法赋值的血清对不同系统进行校准之后系统间偏差和变异均明显降低。结论用参考方法赋值的新鲜血清校准不同的血脂检测系统,可以有效地提高测定结果的一致性。     

保存温度和时间对全血及血清中腺苷脱氨酶稳定性的影响

目的 探讨非抗凝全血未及时离心对血清中腺苷脱氨酶(ADA)活性的影响,以及离心后血清中ADA活性在不同温度和时间保存时的稳定情况,以指导ADA标本的合理留存.方法 非抗凝全血标本在不同保存时间(30min和1,2,3,4,6,8,24h)离心分离血清,测定ADA活性.另收集新鲜混合血清20份,分装后分别随机取1管,立即测定作为参考标准(即0h组),其余分别密封避光保存于室温(约22℃),2～8℃,-20℃和-80℃,按预定时间测定.全血组、血清组分别以30min组、0h组作为参考,求平均百分偏差,并与实验室最大允许变异(5.9%)比较,判断ADA活性在全血及血清的稳定情况.结果 非抗凝全血标本采集后以未离心状态保存于室温时,1h组ADA的活性偏倚为-4.17%,在5.9%的最大允许变异范围内,而2h组即升高至17.95%,8h组高达32.52%,呈升高趋势.离心后血清放置室温时,4h偏倚为-1.26%,8h偏倚为0.26%,在最大允许范围内;2～8℃保存时,8h组下降至-2.27%,16h组下降至-5.74%.之后各组ADA偏倚均超过-5.9%;-20℃保存24h组、-80℃保存15d组的ADA活性下降均超过最大允许变异.血清中的ADA活性随时间延长而呈下降趋势.结论 全血标本中ADA活性随时间延长而活性升高,在1h内进行离心分离血清为佳.离心后血清中ADA活性随时间延长呈下降趋势,标本离心后应尽快测定,血清室温保存时建议在8h内完成测定,血清2～8℃保存应在16h内完成测定.-20℃及-80℃冷冻保存并未能明显延长ADA活性的稳定性.     

早幼粒细胞白血病蛋白在髓系白血病细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的 探讨早幼粒细胞白血病(promyelocyte leukemia,PML)蛋白在髓系白血病中的表达及其对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测了30例慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者及24名健康对照者外周血单个核细胞中PML mRNA水平的差异.构建PML的真核表达载体,转染K562细胞后筛选出稳定表达PML的细胞株,以稳定表达空载体的细胞为对照.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术分别检测PML过表达对细胞增殖和细胞周期的影响,并进一步用反转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)检测增殖相关因子c-myc和p27kip1(p27) mRNA水平以及蛋白表达水平的改变.最后检测了CML患者及健康对照者外周血单个核细胞中c-myc和p27 mRNA水平的差异.结果 CML患者外周血单个核细胞中PML mRNA表达水平(△Ct=9.02±0.74)明显低于健康对照组(△Ct =7.91 ±0.34),差异有统计学意义(t =5.07,P＜0.001).PML过表达能明显抑制K562细胞增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞.PML稳定表达的K562细胞中,c-myc的mRNA和蛋白表达水平降低,p27的mRNA和蛋白表达水平升高.CML患者外周血单个核细胞中c-myc的mRNA表达水平(△Ct =7.13 ±0.43)显著高于健康对照组(△Ct =9.35 ±0.82),差异有统计学意义(t=6.78,P＜0.001),而p27的mRNA表达水平(△Ct =4.56±0.58)则显著低于健康对照组(△Ct=3.29±0.92),差异有统计学意义(t=2.93,P＜0.01).结论 PML在CML患者中低表达,PML可能通过调节c-myc和p27的表达从而抑制白血病细胞的增殖.     

基于半胱氨酸蛋白酶抑制素C建立的肾小球滤过率预测公式的适用性研究

目的 探讨基于Cys C建立的GFR预测公式在我国CKD患者及其分期中的适用性.方法 选择2007年9月至2009年7月我国不同区域(北京、上海、大连、长沙)4家三级甲等医院就诊的CKD患者176例,其中男90例,女86例.通过双血浆法99mTc-二乙三胺五乙酸(99mTc-DTPA)血浆清除率测定入选对象rGFR.应用PETIA和PENIA两种方法检测血浆Cys C浓度,分别将Larsson公式、Grubb公式、Hoek公式、Filler公式、Rule公式、Stevens公式和Hojs公式的eGFR与rGFR进行一致性、偏差、精确度、准确度和分期正确性比较.结果 176例CKD患者rGFR水平为[40.70 (19.09～86.49)] ml·min-1·(1.73 m2)-1.同一公式采用不同Cys C检测方法计算的eGFR结果差异有统计学意义(P均＜0.01).各公式的eGFR与rGFR存在相关,组内相关系数(ICC)在0.874～0.938之间.所有预测公式应用两种方法检测eGFR的30％准确性均低于60％;CKD各期正确分期百分比不理想,2～4期正确分期百分比低于65％.在CKD1期,由PENIA法建立的预测公式低估GFR水平;在CKD5期,由两种方法建立的公式均高估GFR水平.结论 本研究验证的8个基于Cys C建立的GFR预测公式不是我国CKD人群GFR预测的理想公式,不能直接应用于我国CKD患者,需综合种群及年龄等多方面因素进一步修正基于Cys C的GFR预测公式.