黄芩素通过抑制ERK通路下调HeLa细胞中基质金属蛋白酶的表达

目的观察不同浓度黄芩素处理宫颈癌细胞后,细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)与基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9 mRNA及蛋白水平表达的变化。方法体外培养HeLa细胞株,分为空白对照组、100μmol/L、200μmol/L黄芩素处理组,培养24 h。明胶酶谱法检测上清液中MMP-2、MMP-9的活性变化。反转录PCR法检测ERK1/2及MMP-2、MMP-9的mRNA水平的表达变化。Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2及MMP-2、MMP-9的蛋白水平的表达变化。结果黄芩素处理24 h后,与空白对照组相比较,MMP-2、MMP-9的活性变化逐渐降低,且呈浓度依赖性(P0.05)。ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白表达随着黄芩素浓度的增强逐渐降低(P0.05)。结论黄芩素通过激活ERK1/2信号通路下调MMP-2、MMP-9的表达。     

黄芩素抑制宫颈癌HeLa细胞迁移作用机制的研究

目的：观察不同浓度黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后,细胞迁移、细胞培养基中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase,MMP9）活性的变化,以及MMP2、MMP9 mRNA和蛋白表达水平的变化。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,分空白对照（Control）组、50、100、200、300μmol/L干预组,培养12、24、48 h。镜下观察细胞形态及数量的变化;流式细胞技术法检测细胞周期的变化;细胞迁移实验观察细胞迁移的改变;明胶酶谱法检测细胞培养基中的MMP2、MMP9活性变化;RT-PCR检测MMP2、MMP9 mRNA表达水平的变化;Western Bloting检测MMP2、MMP9蛋白表达水平的变化。结果：黄芩素干预24 h后,与空白对照组相比较,各黄芩素干预组的细胞G1期均受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度成正向变化;黄芩素能有效抑制HeLa细胞的迁移,迁移距离与黄芩素干预浓度成反向变化;细胞培养基中MMP2及MMP9的活性受抑制,抑制程度与黄芩素干预浓度成正向变化;MMP2及MMP9 mRNA及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势（P〈0.05,P〈0.01）。结论：黄芩素可有效抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移,阻滞细胞周期中G1期、降低MMP2、MMP9活性,下调MMP2和MMP9的表达,发挥抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用。     

妇科千金片联合克罗米芬治疗多囊卵巢综合征合并不孕的疗效观察

目的:观察妇科千金片联合克罗米芬治疗多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)合并不孕的疗效及对炎性反应及氧化应激反应的影响。方法:选取2014年1月至2016年6月西南医科大学附属中医院收治的PCOS合并不孕患者96例,随机分为观察组和对照组,每组48例,对照组给予克罗米芬治疗,观察组在对照组基础上给予妇科千金片治疗,疗程为3个月经周期。观察2组治疗前后临床症状体征、卵巢变化、机体性激素水平、月经恢复、排卵及妊娠情况;记录2组治疗前后炎性反应及氧化应激反应相关指标的变化。结果:观察组治疗后体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、多毛评分及卵巢体积均较治疗前显著降低(P0.05),观察组改善情况均显著优于对照组(P0.05);2组治疗后血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)以及LH/FSH比值均显著降低,观察组上述指标均低于对照组(P0.05);观察组治疗后月经恢复情况、宫颈黏液评分、子宫内膜厚度、排卵及妊娠率均优于对照组、流产率低于对照组(P0.05)。2组治疗后血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平均显著改善,观察组改善情况优于对照组(P0.05)。结论:妇科千金片联合克罗米芬治疗能够显著PCOS患者的临床症状体征,调节机体性激素,并促进排卵及妊娠,其机制可能与抑制机体炎性反应及氧化应激反应有关。     

血管紧张素-(1-7)抑制低氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化

目的观察血管紧张素-(1-7)[Ang(1-7)]对氯化钴(Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)间质转分化的影响并探讨其可能机制。方法体外培养NRK52E细胞,分为对照组、Co组、Ang-(1-7)组、Co+Ang-(1-7)组,培养6 d。免疫细胞化学染色法检测NRK52E细胞低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot法、细胞免疫化学染色法检测p-ERK1/2蛋白表达水平;酶联免疫吸附法检测细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的含量。结果 6 d后,与对照组比较,Co组与Co+Ang-(1-7)组细胞HIF-1α、α-SMA、ColⅠ及p-ERK1/2表达量显著增加(P<0.05);与Co组比较,Co+Ang-(1-7)组细胞HIF-1α、α-SMA、ColⅠ及p-ERK1/2表达量明显减少(P<0.05)。结论 Ang-(1-7)可抑制Co诱导的低氧状态下肾小管上皮细胞间质转分化,减少细胞外基质的生成,可能是通过p-ERK1/2信号通路实现的。     

三维斑点追踪成像技术评价不同年龄正常成人左心室整体应变

目的 应用三维斑点追踪成像技术(3D-STI)探讨不同年龄正常成人左心室心肌纵向、径向、圆周应变及面积追踪特征,并探讨其与年龄的关系。方法 将153名健康志愿者按年龄分为青年组(年龄18~45岁,n=54)、中年组(年龄46~64岁,n=51)和老年组(年龄≥65岁,n=48),行常规超声心动图检查,获取一般资料,然后采集心尖四腔切面动态二维图像,获得左心室全容积图像,存储图像并应用3DT分析软件在线分析。结果 与青年组和中年组比较,老年组整体纵向应变、整体径向应变、整体圆周应变和整体面积追踪明显减低(P均<0.05);青年组与中年组整体纵向应变、整体径向应变、整体圆周应变差异均无统计学意义(P均>0.05),而中年组整体面积追踪低于青年组(P<0.05)。左心室16节段分析示青年组纵向峰值应变、径向峰值应变和峰值面积追踪从二尖瓣至心尖水平逐渐减低,圆周峰值应变逐渐增大;中年组纵向峰值应变、径向峰值应变、圆周峰值应变及峰值面积追踪均从二尖瓣至心尖水平逐渐减低;老年组纵向峰值应变、径向峰值应变、圆周峰值应变及峰值面积追踪在乳头肌水平最小,而在二尖瓣水平最大。结论 随着年龄增长,左心室心肌纵向、径向、圆周应变及面积追踪有降低趋势。     

黄芩素干预宫颈癌细胞凋亡机制的研究

摘要:目的　观察通过使用不同浓度黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后,TIMP2及凋亡相关因子Bax、Bcl2 mRNA及蛋白水平表达的变化。方法　体外培养HeLa细胞株,分为空白对照组、100 μmol/L干预组、200 μmol/L干预组,培养24 h。相差显微镜下观察细胞形态及数量的变化。流式细胞技术法检测细胞周期的变化。RT-PCR法检测TIMP2、Bax、Bcl2 mRNA水平的表达变化。Western Blot法检测TIMP2、Bax、Bcl2蛋白水平的表达变化。结果　黄芩素干预24 h后,与空白对照组相比较,各组细胞G1期均受阻滞,组织程度与黄芩素干预浓度成正向变化,Bcl2的mRNA及蛋白表达与黄芩素干预浓度浓度相关,呈逐渐降低的趋势（P＜0.05）,TIMP2、Bax的mRNA及蛋白水平表达趋势为随黄芩素浓度增加而逐渐增强（P＜0.05）。结论　黄芩素通过阻滞细胞周期中G1期,上调Bax,下调TIMP2和Bcl2的表达,促使HeLa细胞凋亡。     

黄芩素和U0126 体外协同抗人膀胱癌细胞的作用及机制研究

目的：探讨黄芩素和U0126体外协同抗人膀胱癌T-24细胞的作用及机制研究。方法：用黄芩素、U0126及二者联合处理T-24细胞,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡;显微镜下计数细胞数量变化;TUNEL法检测细胞凋亡指数;实时定量PCR和Western blot分别检测T-24 细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 、CyclinD1、GSK-3β和AKT ＲNA水平、蛋白水平,分析黄芩素与U0126对膀胱癌细胞凋亡和增殖的影响。结果：T-24细胞经不同浓度黄芩素处理后, 细胞凋亡率显著增加;T-24细胞经黄芩素处理24 h,G0/G1 期细胞比例明显增多,S 期细胞比例明显下降,细胞数减少,采用黄芩素联合U0126 处理T-24细胞24 h,S 期细胞比例显著降低;黄芩素或U0126单独处理T-24细胞引起明显细胞凋亡,二者联合处理凋亡更明显;利用两种药物单独或联合作用T-24细胞24 h,GSK-3β、ERK1/2、AKT磷酸化水平显著降低, ERK1/2、CyclinD1的 mRNA表达减少,联合处理作用更显著。结论：黄芩素和U0126 均可诱导T-24细胞凋亡,增加G0/G1 期细胞比例,降低S 期细胞比例,联合应用效果更明显。     

黄芩素对宫颈癌细胞凋亡的影响

目的：观察不同浓度的黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后细胞迁移及细胞周期的变化,观察细胞培养基中具有活性的金属基质蛋白酶－2（MMP －2）、金属基质蛋白酶9（MMP －9）的变化,及 MMP －2、MMP －9、金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）、细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）、B 细胞淋巴瘤／白血病－2（Bcl －2）相关 X 蛋白（Bax）、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平表达的变化。方法体外黄芩素干预 Hela 细胞株24 h,分不含黄芩素的无血清DMEM 高糖培养基培养的细胞为空白对照组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为100μmol／L 的黄芩素为100μmol／L 组,无血清 DMEM 高糖细胞培养基中加入终浓度为200μmol／L 的黄芩素为200μmol／L 组,共3组。镜下观察各组细胞形态及数量的变化、细胞迁移实验检测细胞迁移的改变、流式细胞技术法检测细胞周期发生的变化、RT －PCR 法及 Western blot 法检测 MMP －2、MMP －9、TIMP2、CyclinD1、Bax、Bcl －2 mRNA 及蛋白水平的表达变化。结果黄芩素干预24 h 后,与空白对照组比较,两干预组细胞周期 G1期受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度一致（P ＜0．05）,细胞迁移受抑制,随着黄芩素浓度逐渐增加,迁移距离逐渐减少（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9活性受到抑制,抑制程度与黄芩素浓度呈正相关（P ＜0．05）,MMP －2、MMP －9、CyclinD1、 Bcl －2的mRNA 及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势（P ＜0．05）,TIMP2、Bax 的 mRNA 及蛋白表达趋势随黄芩素浓度增加而逐渐增强（P ＜0．05）。结论黄芩素干预宫颈癌 HeLa 细胞,通过阻滞细胞周期 G1期,抑制 MMP －2、MMP －9活性,上调 TIMP2、Bax 的表达,下调 MMP －2、MMP －9、CyclinD1、Bcl －2的表达,促进 HeLa细胞的凋亡。     

黄芩素联合 U0126 诱导人乳腺癌细胞株MCF-7 凋亡的分子机制研究

探讨黄芩素和 U0126 诱导人乳腺癌细胞株 MCF-7 凋亡的分子机制。方法 单独及联合使用 20μmol 黄芩素、10 μmol U0126 处理 MCF-7 细胞 24 h;光学显微镜观察细胞数量变化,流式细胞术检测 MCF-7 细胞周期变化,CCK8 法检测细胞增殖变化,TUNEL 法和流式细胞术检测细胞凋亡,实时聚合酶链反应（Real Time PCR）和 Western blot 检测凋亡相关因子 mRNA 和蛋白的表达水平。结果 与黄芩素单独刺激 MCF-7 细胞相比,黄芩素联合 U0126 刺激 MCF-7 细胞时,S 期细胞比例降低更明显;MCF-7 细胞经不同浓度黄芩素或 U0126 处理后,增殖抑制,且具有浓度依赖性（ <0.05）;与黄芩素单独处理 MCF-7 细胞相比,黄芩素与 U0126 联合处理时,细胞凋亡更加显著（ <0.05）,早期凋亡和晚期凋亡均增多（ <0.05）;与黄芩素或 U0126 单独处理 MCF-7 细胞相比,黄芩素和 U0126 联合处理 MCF-7 细胞时,凋亡抑制因子 Bcl-2 的mRNA 水平降低（ <0.05）,凋亡促进因子 Bax 的 mRNA 水平增高（ <0.05）,ERK1/2、GSK-3β 和 P38 的磷酸化水平降低（ <0.05）,凋亡促进因子 Bax 表达量增高（ <0.05）,凋亡抑制因子 Bcl-2 表达量降低（ <0.05）。结论 黄芩素或 U0126 通过调控 Bcl-2/Bax 的表达水平以及 ERK1/2、GSK-3β 和 P38 的磷酸化水平抑制 MCF-7 细胞增殖,促进细胞凋亡,且具有协同效应。因此,黄芩素和 U0126 可联合用于临床治疗乳腺癌,具有重要临床意义。