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目的构建稳定表达先天性生长激素不敏感综合征相关基因-hGHR及突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R)的CHO细胞株,测定野生株和突变株的STAT5-磷酸化水平。方法利用已有的PUC-hGHR质粒,定点突变获得2个hGHR突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R),限制性酶切法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/(zeo+);然后用Lipofectamine2000将重组子转染至CHO细胞,通过Zeocin抗性筛选稳定表达hGHR及突变体的细胞群;并用RT-PCR和Western blot证实hGHR、STAT5-P表达水平。结果测序验证hGHR的E42K和H56R错义突变成功引入,并克隆到真核表达载体;转染后在CHO细胞株中成功检测到hGHR和突变体的mRNA和蛋白;突变细胞株(E42K、H56R)的磷酸化STAT5蛋白表达量低于野生株。结论成功构建携带稳定表达hGHR及突变体的CHO细胞株,E42K、H56R突变部分阻碍STAT5蛋白进行磷酸化。 相似文献
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总结参与式分层管理模式在口腔麻醉复苏室的应用效果。通过实施将科内人员按层级、职称、学历、工作年限及综合能力等因素分组,每组由N0-N3级护士组成:N3级护士担任组长,主要负责护理工作的检查、总结,并组织小组成员完善护理工作,N0-N2级护士为组员,主要负责护理工作的自查,依照四川省卫生计生委制定的质量考评标准考评护理质量的方式,认为此管理模式在灵活的组织环境基础上,有助于护士实施自我管理,帮助医院吸纳并留住优秀护士、减少护士流失并提高护理质量,对护理专业的发展有着非常重要的影响。 相似文献
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