共价结合和物理吸附制备固相抗体在RIA技术应用中的对比分析

目的:探讨异硫氰酸荧光素(FITC)-抗FITC磁性微粒子系统与试管固相包被系统制备固相抗体在RIA应用中的方法学技术参数.方法:以FITC标记抗体,抗FITC抗体共价结合磁性微粒子为分离剂,与试管固相包被法,用相同的校准品、125I标记物通过检测FT3、sTSH进行技术研究及样本对比分析.结果:FT3两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.18 pmol/L、0.43 pmol/L,批内变异(n=10):8.96%、16.26%,批间变异(n=10):15.26%、18.83%.sTSH两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.06 μIU/ml、0.04μIU/ml,批内变异(n=10):7.6%、6.92%,批间变异(n=10):8.55%、14.23%.FT3磁性微粒子法测值与PR法测值r=0.9825,FT3试管固相包被法测值与PR法测值r= 0.9102;sTSH磁性微粒子法测值与试管固相包被法测值r=0.9987.结论:FITC磁性微粒子系统应用于FT3、sTSH检测,降低反应时间,共价结合提高均一性.     

第五代放射免疫分析方法及有关问题探讨

磁性微粒子固相RIA是最近发展起来的一类新型RIA,它克服了目前市售常规试剂检测程序多,流程长的缺点,已列为第五代RIA技术.本文就试剂制备,免疫反应模式、技术特征和对比分析及应用前景等方面作简要评述.     

磁性微粒子在放射免疫诊断试剂中的应用

自从1975年Hersh等首先报告了在地高辛RIA中用磁性微粒子作为分离剂以来, 人们对磁性微粒子的制备方法进行了系统的研究, 并取得了显著的成果[1].特别是纳米技术的出现, 更加促进了磁性微粒子的应用.这种磁性微粒子很小, 加至反应液中呈悬浮状态, 待反应平衡后, 放至磁板上可迅速分离, 是目前RIA很有发展前景的方法.本文作了一些研究, 现将其结果报道如下:     

宽范围β-HCG双标记液相免疫放射检测方法建立

[目的]研制一种宽范围血清β-HCG液相IRMA检测试剂。[方法]将两株高特异性抗β-HCG单克隆抗体分别标记异硫氰酸荧光素和^125I混合作为标记试剂，将待测样品和标记试剂在液相中生成双标记夹心免疫复合物，加入连接抗异硫氰酸荧光素的磁性微粒子分离。[结果]本法最小检出值34．42mIU／ml，标准曲线范围75～7500mIU／ml，批内和批间CV分别为4.0％和8．8％，回收率在90％～110％，平均为101．7％。[结论]双标记液相IRMA是一种新型检测方法，最高检出值7500mIU／ml是常规最高检出值500mIU／ml的15倍，血清高值不必稀释，对临床应用具有简便快速的优点。     

C-肽双标记液相IRMA方法的实验研究

本文探讨应用两株高特异性配对C-P McAb分别标记125I和异硫氰酸荧光素(FITC),采用抗FITC磁性微粒子固相抗体作为分离剂,建立血清C-P IRMA检测法。结果表明,本法标准曲线范围为0.125~4.0pmol/mL,灵敏度为0.06 pmol/mL,批内批间CV分别为5.6%和8.7%,回收率为92.1%~96.0%,和胰岛素交叉反应为零。各项技术参数表明本法操作简便快速,为今后开发肽类的IRMA检测提供了特异性更高的手段。     

FSH双标记液相IRMA的方法建立及实验研究

目的：探讨磁性微粒子双标记IRMA检测FSH的临床应用价值及其重要意义。方法：利用^125Ⅰ和异硫氰酸荧光素（FITC）分别标记的单克隆抗体（McAb）与抗原进行夹心反应,然后加入抗荧光素抗体包被的磁性微粒进行沉淀分离。结果：检测样品值两法高度相关（r〉0．9900）,双标记液相IRMA法批间变异CV（n=10）5．8％,包被管固相法批间变异CV（n=10）8．5％,两法差异显著。结论：双标记液相IRMA技术是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法。     

化学发光酶免疫分析法检测人血清中的铁蛋白

[目的]建立一种以辣根过氧化物酶标记铁蛋白单抗为标记物的化学发光免疫分析方法,用于检测血清样品中铁蛋白的水平。[方法]采用双抗体夹心法,将辣根过氧化物酶标记一株铁蛋白单克隆抗体,另一株铁蛋白单克隆抗体包被到不透明微孔板上,它们可以与血清样品中的铁蛋白抗原形成双抗体夹心复合物,洗涤后加入发光底物液,用发光分析仪进行检测。[结果]该方法的灵敏度为0．10ng／ml,批内变异为5．4％,批间变异为8．9％。[结论]利用此方法研制的试剂与进口试剂盒对796例血清样品进行测定,其相关系数为0．9063。表明该方法可应用于诊断试剂中,并且能够满足临床检测的要求。     

化学发光免疫分析法检测糖类抗原242的方法学研究

[目的]以辣根过氧化物酶标记糖类抗原242单抗作为标记物,鲁米诺为化学发光反应底物,建立了一种高灵敏的检测血清样品中糖类抗原242的化学发光免疫分析方法。[方法]采用双抗体夹心法,将辣根过氧化物酶标记一株糖类抗原242单克隆抗体,另一株糖类抗原242单克隆抗体包被到不透明微孔板上,它们可以与血清样品中的糖类抗原242抗原形成双抗体夹心复合物,37℃孵育1h,洗涤后加入100μl发光底物液,5min后检测。[结果]该方法线性范围为10-200U／ml,批内变异为5．96％,批间变异为9．63％,平均回收率为102．48％,其余指标均良好。[结论]利用该法研制的试剂与进口试剂对542例血清样品进行测定,其相关系数为0．9049,表明此方法可应用于诊断试剂中,并且能够满足临床检测的要求。     

双标记液相免疫放射分析技术的实验研究

[目的]通过双标记液相IRMA方法的建立，探讨其技术主要优点及临床应用价值。[方法]选择垂体前叶糖蛋白激素TSH和51个氨基酸组成的INS作为实验研究对象，对标记试剂中两种标记McAb的最佳比例，免疫反应温育时间，抗FITC作分离剂的用量进行优化，并和常规包被管检测血清TSH及竞争法检测血清INS作了方法学参数对比分析。[结果]本法在液相中生成双标记夹心免疫复合物时间短，精密度高于常规法，特异性在INS检测中显著较竞争法更强。测值为竞争法的75％。检测样品TSH值，双标记液相IRMA与固相包被法高度相关，r为0．9855。[结论]对比分析显示本法所设计的免疫反应模式新颖，检测方法简便快速，磁性微粒子抗FITC可共用，各项技术参数优于常规法。