FACS Aria流式细胞分选仪质量控制体系的优化

FACSAria是BD公司2003年推出的世界首款台式高速多荧光检测和分选的流式细胞仪，其主要特点是将所研究或调查的靶细胞快速从细胞群体中分选出来，还可以将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上进行下一步的功能实验，同时借助全新的光学装置和收集系统等可大大提高样本获取细胞信息时的数量和质量。     

CD4+T淋巴细胞的活化在HIV-1感染长期非进展者及典型进展者之间差异的研究

目的了解CD4 T淋巴细胞的活化在长期感染非进展者(LTNP)及典型进展者(TP)之间的差异,探讨HIV感染的免疫基础。方法收集24例HIV-1感染患者(7名LTNP患者,17名TP患者)及15例健康对照的抗凝血标本,流式细胞术检测CD4 T淋巴细胞的活化标志物CD38并检测其CD4计数等指标;bDNA方法检测患者体内的病毒载量。结果与正常人相比,LTNP患者的CD4 T淋巴细胞的活化的差异无统计学意义(P>0.05)而TP患者的活化程度明显增高(P<0.01);HIV感染者CD4 T淋巴细胞CD38的表达水平与CD4计数呈正相关,与病毒载量呈负相关。结论随着疾病的进展,CD4 T淋巴细胞的活化程度逐渐增高;LTNP患者CD4 T淋巴细胞的活化程度没有明显增高可能是其疾病长期不进展的原因之一。     

流式细胞分析中用低浓度皂角苷处理溶血不完全的血标本

在应用流式细胞仪(FCM)检测全血标本过程中,通常须裂解红细胞以获取目的细胞,使样品中不可避免地存在着死细胞及碎片,影响分析结果.一般情况下,残留的红细胞、血小板、碎片等可经适当转速的离心除去,也可以通过7AAD染色设门排除[1].但特殊的病理性样本(如重型肝炎患者全血标本),用市售溶血素预处理后,经常会溶血不完全,剩余的红细胞和杂质容易与目的细胞群信号发生重叠,造成细胞分群界限不明显,背景不清晰,影响实验结果.我们发现用自配低浓度皂角苷液处理此类标本,可以获得满意结果,现以检测重型肝炎患者血标本mDC细胞为例介绍如下.     

调节性T细胞稳态与慢性HIV-1感染引起的异常免疫活化研究

目的本研究旨在探讨CD4＋Foxp3＋调节性T细胞（regulatory Tcells,Treg）稳态与慢性HIV-1感染者疾病进程及免疫活化的相关性。方法选择50例慢性HIV-1感染者,包括AIDS患者15例（AIDS组）、典型进展（typical progressor,TP）患者25例（TP组）、长期非进（long-term non-progressor,LTNP）患者10例（LTNP组）,另选健康对照者（healthy control,HC）15例（HC组）。用流式细胞仪检测Treg的增殖标志Ki-67和凋亡标志半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3,同时检测Treg的活化标志CD38和人白细胞抗原-DR。结果在HC组和慢性HIV-1感染者中,Treg的增殖和凋亡速率均显著高于CD4＋Foxp3非调节性T细胞,这种稳态的改变在TP组和AIDS组中更为明显。进一步研究发现Treg增殖和凋亡与其活化程度呈正相关。结论慢性HIV-1感染导致Treg的过度活化,进而导致Treg稳态的改变。Treg稳态可以作为预测HTV/AIDS患者疾病进展的一项指标。     

丙型肝炎病毒感染者外周血淋巴细胞亚群的变化及意义

目的调查丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化及影响因素。方法利用流式细胞术检测241例丙型肝炎患者和117例健康人群外周血淋巴细胞亚群数值,通过回顾性分析,调查我国丙型肝炎人群淋巴细胞亚群变化及其相关的影响因素。结果在健康人群中,CD3＋CD4＋T细胞、CD3＋CD16＋CD56＋NKT细胞频率以及CD4/CD8比值与年龄呈显著正相关;而在慢性丙型肝炎人群中,CD3＋CD4＋T细胞与年龄呈显著正相关,CD3-CD19＋B细胞则与年龄呈显著负相关;在肝硬化人群中,只有CD3-CD16＋CD56＋NK细胞频率与年龄呈显著正相关;在15～49岁的健康人及慢性肝炎人群中,女性CD3＋CD4＋T细胞亚群频率高于男性,而在肝硬化患者中女性CD3-CD19＋B细胞频率低于男性;同时,在HCV感染的不同阶段,CD3-CD16＋CD56＋NK细胞亚群频率均较正常人显著降低,而CD3＋CD8＋T细胞频率则显著升高,在15岁以上人群,CD3-CD19＋B细胞在健康人、慢性肝炎、肝硬化人群中呈持续升高的现象。结论通过回顾性分析健康人群和HCV感染不同阶段人群淋巴细胞亚群的分布特点及其与HCV疾病进展、年龄、性别的关系,为临床科学评价丙型肝炎人群免疫状态提供重要的免疫指标。     

中国乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群频率参考值范围

目的 调查中国乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群频率参考值范围.方法 利用流式细胞术检测2846例乙型肝炎患者和117例健康人群外周血淋巴细胞亚群数值,调查我国健康人群和乙型肝炎人群的参考值范围.结果 调查了16～60岁健康人群和HBV感染相关的急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎和肝硬化人群外周血CD3+T淋巴细胞、CD3+CD...     

新型冠状病毒肺炎患者血浆纤维蛋白原样蛋白1的表达特点及其临床意义

背景 白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在新型冠状病毒肺炎患者细胞因子风暴的发生发展中扮演着重要角色,是重症化的预测指标之一.有研究表明纤维蛋白原样蛋白1(fibrinogen-like?protein?1,FGL1)在急性感染中能够被IL-6诱导产生,在肝细胞稳态维持方面具有重要作用.目的 探讨FG...     

长期记忆CD8＋T细胞的减少与HIV-1慢性感染进程相关性分析

目的 探讨在HIV-1慢性感染进程中,长期记忆CD8＋T细胞的变化特点及临床意义。方法 研究入组26例未行抗病毒逆转录治疗和26例经抗病毒逆转录治疗的HIV-1感染者,以及11例健康人对照,分离外周血单个核淋巴细胞,利用流式细胞术检测长期记忆CD8＋T细胞的频数及功能,分析其在抗病毒治疗前后的变化,及与CD4＋T细胞计数、CD4/CD8比值、病毒载量的关系,并探讨在HIV-1慢性感染中影响长期记忆CD8＋T细胞的因素。结果 与健康对照组相比,未治疗组外周血的长期记忆CD8＋T细胞的频率和计数显著降低,经抗病毒治疗后不能完全复常。在未治疗组中,CD8＋T长期记忆细胞的频率与CD4＋T细胞计数、CD4/CD8比值呈正相关,与病毒载量呈负相关。结论 HIV-1慢性感染疾病进程中伴随长期记忆CD8＋T细胞的持续受损。     

乙型肝炎患者体内滤泡辅助性T细胞的功能特点及临床意义研究

目的 通过分析HBV感染者体内滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)的频率和功能，探讨其在HBV感染中的临床意义。方法 本研究入组HBV感染者36例，包括6例急性恢复期(acute recovery,AR)患者和30例慢性HBV感染者，其中慢性HBV感染者又包括免疫耐受期(immune tolerance,IT)患者10例、免疫活化期(immune activation,IA)患者20例。另外纳入8例健康对照(health control,HC)。通过流式细胞术和多色免疫组化技术比较HC组和HBV感染者外周血和肝内Tfh的表达差异，以及通过单细胞分泌蛋白组芯片检测Tfh的功能特点，并对HBV感染者Tfh的频率与HBV相关临床指标(HBV表面抗原、HBV载量、ALT、AST)的相关性进行分析。结果 IA组外周血中Tfh频率显著高于HC组(1.487%vs.0.876%,t=2.126,P=0.043)和IT组(1.487%vs.0.737%,t=3.144,P=0.004)；与外周血一致，肝内Tfh也在IA组患者中富集。外周血中Tfh的频率与肝脏炎症...     

成人接种2剂新冠灭活疫苗12个月后T细胞免疫应答特点

目的 评估成年人接种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)灭活疫苗12个月后不同抗原特异性T细胞免疫应答的特点。方法 解放军总医院第五医学中心2022年4-6月招募15名健康成年人,于接种2剂新冠灭活疫苗12个月后采集其静脉血标本,以基于多色流式细胞术的活化诱导标记法(AIM)检测SARS-CoV-2抗原特异性T淋巴细胞水平,并分析其记忆表型与亚群分化特点。结果 成年人接种2剂灭活疫苗12个月后,90%以上个体可检测到Spike及Non-spike特异性CD4⁺T细胞反应(S:14/15,P=0.0001;NS:15/15,P<0.0001);80%个体检测到Spike及Non-spike特异性CD8⁺T细胞反应(S:12/15,P=0.0463;NS:12/15,P=0.0806)。抗原特异性CD4⁺T细胞主要表现为中央记忆细胞(CM)、1型效应记忆细胞(EM1)记忆表型,以及1/17型辅助性T细胞(Th1/17)、2型辅助性T细胞(Th2)辅助表型。结论 灭活疫苗接种后能诱导广泛且持久的抗原特异性CD4^...