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1.
双歧杆菌是人和动物肠道内重要的益生菌。近年来,随着基因工程技术的发展,选择具有益生功能的双歧杆菌作为载体传递系统,在细菌、病毒、肿瘤、寄生虫等领域构建了一系列重组双歧杆菌,具有广泛的应用前景。 相似文献
2.
目的 研究猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)疫苗的人工传代稳定性。方法 将重组质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18电转入L.lactis,经PCR鉴定阳性菌株pMG36e-TSOL18/L.lactis、pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis,在无红霉素抗性和含红霉素抗性条件下,连续人工传代20次,通过测定质粒遗传稳定率和双酶切鉴定,分析质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的稳定性情况。结果 质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代后,在无红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为100%,在含红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为99%。将各代次的质粒采用限制性内切酶SacI/HindIII进行双酶切鉴定,琼脂糖凝胶电泳显示大小正确,连续传至20代时,与原代质粒相符。结论 提示质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代时,均有较好的遗传稳定性,为猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的进一步研究奠定了基础。 相似文献
3.
目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。 相似文献
4.
目的 研究黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性细胞黏附分子1(sICAM-1)的调节作用。 方法 49只SD大鼠随机均分7组,分别为正常对照组(A组)、免疫抑制对照组(B组)、有效药物对照组(C组)、黄芩苷预防组(D组)、黄芩苷低(E组)、中(F组)和高剂量治疗组(G组)。A组不做任何处理,其他各组均于腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠(每次3.5 mg/只,每周2次,连续注射6周),诱导其免疫抑制建立大鼠卡氏肺孢子虫感染动物模型。D组注射地塞米松磷酸钠3周后,灌胃黄芩苷100 mg/(kg?d)连续5周。C、E、F和G组于连续注射地塞米松磷酸钠6周后给药,其中C组灌胃磺胺甲基异恶唑(SMZ)250 mg/(kg?d)和甲氧苄胺嘧啶(TMP) 50 mg/(kg?d),连续2周; E、F和G组分别灌胃黄芩苷100、200和400 mg/(kg?d),均连续2周。B组不给药。各组大鼠均于第8周末摘眼球取血、分离血清,用放射免疫分析法检测TNF-α含量,ELISA法检测sICAM-1含量。同时剖杀大鼠取肺组织制作印片(六胺银染色)和病理切片(HE染色),观察其病理学变化。 结果 大鼠血清TNF-α含量,黄芩苷预防组[(2.14±0.14) ng/ml]及低[(2.57±0.15) ng/ml]、 中[(1.46±0.14) ng/ml]和高[(1.12±0.13) ng/ml]剂量治疗组均高于正常对照组[(0.70±0.21) ng/ml](P<0.05), 低于免疫抑制对照组[(3.65±0.73) ng/ml](P<0.01)。有效药物对照组[(1.59±0.14) ng/ml]明显高于正常对照组(P<0.01), 低于免疫抑制对照组(P<0.01)。血清sICAM-1含量, 黄芩苷预防组[(618.68±52.42) pg/ml]及低[(814.29±61.11) pg/ml]、 中[(498.08±32.56) pg/ml]、 高[(377.06±56.56) pg/ml]剂量治疗组均低于免疫抑制对照组[(1 247.39±288.57) pg/ml](P<0.05),有效药物对照组[(386.95±44.98) pg/ml]低于免疫抑制对照组(P<0.01)。黄芩苷各治疗组肺组织炎症较免疫抑制对照组明显减轻,肺间质炎性细胞浸润及肺泡腔泡沫样渗出物均明显减少。 结论 黄芩苷能降低PCP大鼠血清TNF-α和sICAM-1含量,减轻肺部炎性反应。 相似文献
5.
目的研究细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法 56只SPF级雌性Balb/c小鼠随机均分7组,分别为重组Bb-Eg95-EgA31皮下注射组(A组)、肌肉注射组(B组)、鼻腔内接种组(C组)、口服灌胃组(D组)、空载体对照组(E组)、Bb对照组(F组)和Bb培养用液体培养基(MRS)对照组(G组)。免疫后8周各组鼠用50个Eg原头节攻击,攻击25周后,处死小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE和脾细胞上清液IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平;MTT法测定脾细胞增殖反应;流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞百分比和脾细胞凋亡发生率。结果重组Bb-Eg95-EgA31免疫组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgG1水平升高,IgG3和IgE降低;脾IFN-γ、IL-12和TNF-α水平升高,IL-10水平降低;脾T淋巴细胞明显增殖;脾CD4+和CD8+T细胞显著增加;脾细胞凋亡发生率显著降低。结论细粒棘... 相似文献
6.
目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞增殖的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾细胞增殖反应,同时设有空载体、Bb和MRS对照。结果以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾细胞明显增殖;鼻腔内接种和口服免疫组的脾细胞增殖显著高于皮下和肌肉注射组。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫反应。 相似文献
7.
目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞增殖的变化.方法 将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)或刀豆素A(ConA)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠脾细胞增殖反应,同时设有空载体、Bb和MRS对照.结果 以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾细胞明显增殖:鼻腔内接种和口服免疫组的脾细胞增殖显著高于皮下和肌肉注射组.结论 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫反应. 相似文献
8.
目的探讨rSj 26-Sj 32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立HRP-IgG-Dot-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,观察二者的检测结果。结果 rSj 26-Sj 32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者阳性检出率均为100%,特异性分别为95.35%和93.02%;二者均与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。 相似文献
9.
目的 探讨rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法用于慢性日本血吸虫病疗效考核价值的研究。方法 采用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原(SjAWA)作为包被抗原建立ELISA方法检测慢性日本血吸虫病患者体内治疗前后血清中特异性IgG4抗体水平的变化。结果 rSj26-Sj32融合蛋白组中,化疗前、化疗后3个月、化疗后6个月和化疗后12个月血清中IgG4抗体阳性率分别为95.00%、77.27%、60.00%和30.43%;而SjAWA组中血清特异性IgG4抗体阳性率分别为97.50%、81.82%、55.00%和34.78%。结论 rSj26-Sj32-IgG4-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的疗效考核。 相似文献
10.
目的检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1水平。方法建立清洁级SD大鼠PCP动物模型,同时设正常对照组,检测血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量。并观察肺脏病理学的变化。结果PCP模型组血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量分别是(3.65±0.73)ng/mL、(0.65±0.12)ng/mL和(1247.39±288.57)pg/mL,正常对照组的含量分别是(0.70±0.21)ng/mL、(0.14±0.10)ng/mL和(261.40±53.21)pg/mL,并且PCP模型组肺组织炎症反应明显。结论卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1的含量均升高,并且肺组织炎症反应明显。 相似文献