穿心莲内酯对前列腺癌细胞的增殖及神经内分泌分化的抑制作用

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对前列腺神经内分泌癌细胞增殖及神经内分泌分化的影响.方法 Andro处理前列腺癌细胞(PC3),用MTT法检测48 h时Andro作用的最大效应浓度及对PC3细胞增殖的时间依赖性;进一步提取细胞蛋白,通过Western blotting检测神经内分泌分化标志物(NSE、CgA)表达情况.结果 Andro作用48 h时7.5 μmol/L达到最大效应浓度,且随着时间的延长Andro抑制PC3细胞增殖的作用越显著;Andro能明显抑制PC3细胞的增殖,并具有浓度和时间依赖性.Western blotting检测结果显示,NSE、CgA是PC3细胞中神经内分泌的标志物,Andro能显著抑制NSE、CgA的表达.结论 Andro可抑制PC3细胞增殖及神经内分泌分化.     

p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型的建立

 目的：建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,为研究p110δ在小鼠结直肠癌癌前病变中的作用提供实验模型。方法：将C57BL/6J背景的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠与p110δ突变失活小鼠（p110δD910A/D910A）进行杂交建系,通过PCR技术鉴定子代小鼠基因型,获得p110δ突变失活的ApcMin/+小鼠。对适龄小鼠进行肠道取材,亚甲蓝染色后,观察肠道结构,对腺瘤和微腺瘤进行统计。肠道组织进行石蜡包埋、切片,做HE染色进行进一步观察。结果：获得p110δ突变失活的ApcMin/+杂交鼠（ApcMin/+;p110δD910A/D910A）并得以稳定传代。ApcMin/+;p110δD910A/D910A杂交小鼠的肠道组织中,腺瘤数目和体积比ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠均有减少。结论：成功建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,并得到小鼠肠道肿瘤的初步表型,为进一步研究p110δ在肠道肿瘤发生发展中的作用提供重要的工具动物。     

TRAMP小鼠前列腺癌发生的病理进程观察

目的 探讨不同周龄转基因前列腺癌小鼠模型(transgenic adenocarcinoma of mouse prostate,TRAMP)的病理学特点.方法 TRAMP小鼠饲养于SPF级环境中,记录其生存周期;通过组织病理学切片、HE染色及免疫组化法观察不同周龄TRAMP小鼠前列腺的病理学变化、SV40 T antigen(Tag)表达及细胞增殖.结果 TRAMP小鼠普遍生存周期为30 ～ 55周,随着周龄的增加其前列腺异型增生程度愈加明显,16周左右处于明显增生期,24周左右发生腺瘤,32周左右出现低分化癌,55周时发现明显的前列腺癌神经内分泌分化现象.免疫表型:随着周龄的增加,TRAMP小鼠前列腺上皮细胞Tag的表达增强且增殖明显.结论 TRAMP小鼠可稳定自发前列腺癌,出现前列腺上皮内瘤、高分化腺癌、低分化癌和神经内分泌癌的病理学特点,可作为人类前列腺癌研究的经典动物模型.     

穿心莲内酯对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖及细胞周期的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论基础.方法 将实验分为对照组及Andro组,Andro组加入终浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L的Andro[Andro粉末先用DMSO溶解,再用培养基稀释至细胞处理浓度,控制DMSO的含量为0.1%(v/v)],对照组仅用0.1%DMSO溶剂.采用CCK8检测Andro不同浓度及不同处理时间(24、48、72 h)对MCF-7细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测两组细胞周期分布情况;应用预胶化淀粉细胞块制作方法 ,将两组细胞制作成石蜡切片,应用免疫组织化学方法 检测切片中MCF-7细胞增殖相关的核抗原Ki67及细胞周期相关抗原周期素D1(Cyclin D1)及周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 CCK8检测结果 显示Andro浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50值为25μmol/L,并且在IC50浓度下24、48、72 h Andro均显著抑制MCF-7细胞的增殖,并随着作用时间的延长,抑制作用越明显.细胞周期检测结果 Andro处理后G0/G1期细胞数量达(75.51±1.56)%,与对照组(49.16±1.35)%比较,显著升高(P<0.05),而S期的细胞数量仅为(12.69±0.87)%,与对照组(44.07±0.98)%比较,显著降低(P<0.05).细胞块免疫组织化学结果 显示对照组与Andro组Ki67的表达分别为(91.77±2.75)%、(78.05±2.61)%,显著降低(P<0.05),Cyclin D1的IOD值分别为(2.14±0.17)×107、(1.27±0.22)×107,显著降低(P<0.05),CDK4的IOD值分别为(1.14±0.014)×107、(1.16±0.024)×107,无明显差异.结论 Andro可通过抑制MCF-7细胞的增殖及抑制Cyclin D1的表达从而阻断MCF-7细胞的细胞周期进程从而发挥抗肿瘤作用,Andro不能通过影响CDK4的表达发挥阻断MCF-7细胞周期.