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1.
结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展 总被引:10,自引:0,他引:10
吴雪琼 《中华结核和呼吸杂志》2006,29(5):340-342
结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白。分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中,在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中。将培养不超过5d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白,这是记忆性免疫CD4^+T淋巴细胞的靶分子;将培养7d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白,随着培养时间的延长,滤液中蛋白越来越多,由于部分MTB开始裂解死亡,释放胞质蛋白,培养42d时滤液中已有100多种蛋白质。结核病保护性免疫主要是细胞免疫,诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中,其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原,将成为新疫苗研究的首选靶抗原。现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下。 相似文献
2.
用限制性内切酶PstⅠ消化人型结核杆菌H37RvDNA,与质粒pUC19 DNA连接后转化大肠杆菌,经同位素32P标记的人型结核杆菌H37Rv全染色体DNA探针筛选出6个阳性克隆(MT1 ̄6),其中克隆DNA片段MT2(4.2Kb)、MT4(3.5Kb)和MT5(3.0Kb)标记成探针,检测了22种分支杆菌标准株和15侏人型结核杆菌临床分离侏以及2种非分支杆菌,其杂交结果完全相同,与人型结核杆菌及 相似文献
3.
目的 应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法 设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 rrs基因复合 PCR产物进行反向斑点杂交 ,并与 PCR-单链构象多态性 ( PCR- SSCP)和 PCR-直接测序 ( PCR- DS)结果比较。结果 5 2株结核分枝杆菌临床分离株中 ,9株敏感株rps L和 rrs基因的 SSCP图谱、膜芯片杂交结果与标准株完全相同 ;4 3株耐 SM菌株中 ,33株存在 rps L 基因4 3位密码子 AAG→ AGG突变 ,5株有 rrs基因 5 13位 A→C突变 ,1株有 rrs基因 5 13位 A→ T突变 ,突变率为 90 .7%。结论 膜芯片技术检测结核分枝杆菌耐 SM基因型灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于临床耐药性检测 相似文献
4.
结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法,以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照,11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同;限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示,11株耐EMB分离株中4株(36.4%)不被NlaⅡ消化;46例结核病痰标本中10例(21.7%)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。 相似文献
5.
应用PCR-反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐链霉素基因型 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素(SM)的耐药性。方法 设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和ms的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交,并与PCR-单链构象多态性(PCR—SSCP)和PCR-直接测序(PCR-DS)结果比较。结果 53株结核分枝杆菌临床分离株中,三种检测方法符合率为100%。9株敏感株rpsL和ms基因的SSCP图谱、膜杂交结果与标准株完全相同;44株耐SM菌株中,33株存在rpsL基因43位密码子AAG→AGG突变,6株有ms基因513位A→C突变,1株有ms基因513住A→T突变,突变检出率为90.9%,40株耐SM菌株和9株敏感株可用膜杂交方法检测出来,与传统药敏试验方法检测符合率为49/53。结论 应用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐SM基因型灵敏度高、特异性好、简便、快速,可用于临床耐药性检测。 相似文献
6.
目的构建结核分枝杆菌Ag85b-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性和治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85b的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得Ag85b基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了Ag85b基因pYU295重组质粒。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-Ag85b重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:Ag85b-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85b蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了Ag85b-卡介苗重组疫苗。 相似文献
7.
分枝杆菌菌种鉴定DNA微阵列的初步研究与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的制备快速鉴定分枝杆菌菌种的DNA微阵列。方法根据19种分枝杆菌标准株的16SRNA序列设计寡核苷酸探针,制备DNA微阵列,通过反向杂交技术鉴定19种分枝杆菌标准株、9种非分枝杆菌标准株和31株分枝杆菌临床分离株带荧光标记的PCR产物。结果该DNA微阵列与9种非分枝杆菌标准株不杂交,具有分枝杆菌特异性;可将19种分枝杆菌标准株鉴定到群或种,具有较高的分枝杆菌种特异性。应用PCR-SSCP分枝杆菌初步菌种鉴定方法对31株分枝杆菌临床分离株进行初步的鉴定,9株为结核分枝杆菌复合群和22株为非结核分枝杆菌。应用DNA微阵列进一步进行菌种鉴定,9株与探针a杂交阳性,为结核分枝杆菌复合群;2株与探针c杂交阳性,为胞内分枝杆菌;8株与探针d杂交阳性,为堪萨斯分枝杆菌或瘰疬分枝杆菌或猿猴分枝杆菌或胃分枝杆菌;1株与探针k杂交阳性,为戈登分枝杆菌;2株与探针p杂交阳性,为龟分枝杆菌脓肿亚种;2株与探针r杂交阳性,为偶然分枝杆菌;1株与探针s杂交阳性,为草分枝杆菌;2株与探针a和p杂交阳性,为结核分枝杆菌和龟分枝杆菌脓肿亚种复合感染株;1株与探针a和r杂交阳性,为结核分枝杆菌和偶然分枝杆菌复合感染株;3株与该芯片杂交阴性。2株临床分离株经基因测序也证实DNA微阵列鉴定的特异性。结论该DNA微阵列有可能简便、快速、准确地 相似文献
8.
目的研究不同工艺制备的中药复方牛贝消核提取物的体外抑菌活性,为制备抗结核中成药制剂提供实验基础。方法制备分别含50,100,200 g·L-1牛贝消核水提取物、醇提取物的改良罗氏培养基,并分别制备含1,10μg/ml异烟肼(Isonicotinic acid hydrazide,INH)和50,250μg·ml-1利福平(Rifampicin,RFP)的改良罗氏培养基为对照,将3株耐多药结核分枝杆菌分离株、牛结核分枝杆菌和4株非结核分枝杆菌分别接种于含药的改良罗氏培养基中,置37℃培养4周,测定其最低抑菌浓度(MICs)。结果牛贝消核水提取物对这8株供试菌的MICs均为200 g·L-1;醇提取物对牛结核分枝杆菌和母牛分枝杆菌的MICs均为100 g·L-1,对3株耐多药结核分枝杆菌分离株、胞内、瘰疬、偶发分枝杆菌的MICs均为200 g·L-1。结论牛贝消核水提取物和醇提取物对敏感或耐药的结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌均有不同程度的抑制作用,醇提取物的抑菌活性比水提取物略强。 相似文献
9.
基因芯片技术在分支杆菌研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
吴雪琼 《中国现代医学杂志》2002,12(10):41-43
结核病一直是发展中国家较严重的传染病 ,1 985年以来艾滋病的流行、结核感染者的涌入和贫困等原因使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势。目前全世界有结核病人约 2 0 0 0万 ,每年新增结核病人 80 0~ 1 0 0 0万 ,每年死亡人数约 3 0 0万。 1 993年世界卫生组织 (WHO)史无前例地宣布处于“全球结核病紧急状态” ,1 998年又重申遏制结核病的行动刻不容缓。我国的结核病疫情和耐药情况也相当严重 ,是全球 2 2个结核病高负担国家之一 ,结核病人数位居世界第二 ,仅次于印度。 2 0 0 0年第四次全国结核病流行病学抽样调查的初步结果表… 相似文献
10.
用耐药基因检测方法指导老年肺结核病人治疗的临床研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:了解老年肺结核病人的结核分支杆菌耐药情况,评价它们的临床应用价值。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分支杆菌rpoB,katG,rpsL,pncA,embB基因突变和药物敏感试验(比例法),了解117例老年结核病人结核分枝杆菌耐药情况。探讨和比较2种耐药性检测方法的检测效果。结果:1/2上的肺结核病人至少耐2种抗结核药物,对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率为82.1%、71.7%、63.2%、51.2%和35.0%,耐多药率为67.5%,rpoB,katG,rpsL,PpncA和embB基因突变率分别为72.8%、64.9%、59.8%、41.0%和30.7%,多基因突变株达76.0%,结核杆菌耐药基因突变与耐药水平联系密切,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药区,也有少数基因突变发生在低耐药区。根据药敏试验和耐药基因检测,耐多药结核病人6个月治愈率分别达到54.8%和62.8%,治疗效果满意,两种方法没有显著性差异(P>0.05)。结论:耐药基因检测指寻治疗是一种新探索,PCR-SSCP方法敏感,特异,可以快速检测结核菌rpoB,katG,rpsL,pncA和embB耐药基因突变,可能会成为临床指导用药的好方法。 相似文献