基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法的建立

目的建立一种基于RAA-CRISPR/Cas12a的特异性强、灵敏度高的猴痘病毒核酸检测方法。方法根据已知猴痘病毒基因保守区设计合成重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification, RAA)引物和成簇规律间隔的短回文重复序列RNA(clustered regularly interspaced short palindromic repeats RNA, CRISPR RNA, crRNA), 利用荧光检测技术筛选特异crRNA, 通过荧光计数读取CRISPR/Cas12a检测结果, 同时对所建立方法的灵敏性和特异性进行评价。结果建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法, 其灵敏度为2.5拷贝/反应, 且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应, 具有高特异性。结论建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法, 为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。