UPLC-Q-TOF/MS联用技术在妊娠期糖尿病血清标记物筛选中的应用

目的运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术全面筛选妊娠期糖尿病潜在血清标记物。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析妊娠期糖尿病(GDM)患者(孕中期23例,孕晚期24例)和健康对照孕妇(孕中期30例,孕晚期24例)血清中小分子代谢物差异,结合无监督的主成分分析方式和正交偏最小二乘判别分析法筛选生物标记物。结果与健康对照孕妇比较,孕中期和孕晚期GDM患者共筛选到13个潜在血清标记物,分别是参与糖代谢的丙酮酸、乳酸,氨基酸代谢的半胱氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、亮氨酸和脂质代谢的亚油酸、棕榈酸、花生四烯酸、花生二烯酸、12-过氧羟基二十四碳四烯酸、12-羟基二十碳四烯酸和十八烷二酸。结论建立的UPLC-Q-TOF/MS代谢组学分析方法可为全面研究GDM发生发展提供一个优良的技术平台,筛选到的13个血清标记物有望促进GDM的早期和系统诊断。     

适用于线粒体基因组测序的高纯度线粒体DNA提取和鉴定方法优化

目的 优化线粒体DNA(mtDNA)提取和纯度鉴定方法以满足线粒体基因组测序的要求.方法 利用简化的蔗糖密度梯度离心法、DNA酶Ⅰ并结合质粒提取试剂盒提取纯化mtDNA、尽量降低核DNA(nDNA)污染的可能.获得的mtDNA经NanoDrop检测、琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数...     

微柱凝胶法检测O型孕妇血清 IgG抗AB效价

抗AB是指O型血清中除抗A、抗B外与A型红细胞和B型红细胞均反应的交叉反应性抗体,但它不是抗A和抗B的简单混合[1]。国内有关IgG抗AB在妊娠中的意义未见文献报道,目前也无建立理想的检测方法。为此,笔者建立2-巯基乙醇(2-me)裂解-37℃吸收-56℃释放微柱凝胶法用于O型孕妇血清的Ig     

一个复合杂合变异致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症家系分析

目的探讨一个遗传性凝血因子XI(coagulation factor Ⅺ, FⅪ)缺陷症家系成员的分子致病机制。方法提取外周血基因组DNA, 并采用Sanger测序法检测先证者的15个外显子、侧翼序列及家系成员的相应变异外显子区域, 并用反向测序予以验证;ClustalX-2.1-win软件分析变异氨基酸位点的保守性;用Mutation Taster、PolyPhen2、PROVEAN三个在线生物信息学软件分析变异的致病性;用Swiss-pdbViewer软件分析变异氨基酸对蛋白质结构的影响。结果基因分析显示先证者第10外显子存在c.1107C>A(p.Tyr369stop)杂合无义变异以及第13外显子存在c.1562A>G(p.Tyr521Cys)杂合错义变异;其父亲携带c.1107C>A杂合无义变异, 其母亲和女儿均携带c.1562A>G杂合错义变异, 丈夫为野生型。保守性分析表明Tyr521在进化过程中为高度保守位点。变异碱基致病性预测发现c.1107C>A和c.1562A>G均为致病性变异。蛋白质模型分析显示在野生型FⅪ蛋白结构中, Tyr5...     

O型孕妇血清IgG抗AB效价测定的临床意义

目的对夫妻血型不合的O型孕妇进行血清IgG抗AB效价测定并初步探讨其临床意义。方法采用2-me裂解-37℃吸收-56℃释放-微柱凝胶法分别检测O型男性献血员血清和不同胎次孕妇的血清IgG抗AB效价。结果O型男性献血员血清IgG抗AB总阳性率为18．3％（11／60），且IgG抗A或抗B效价小于512者血清中均未检到IgG抗AB；孕妇组的总阳性率为52．8％（38／72），其中第一胎孕妇血清IgG抗AB阳性率为47．4％（18／38），非第一胎孕妇血清IgG抗AB阳性率为58．8％（20／34）。统计学结果表明，孕妇组与献血员组的IgG抗AB阳性率有显著性差异（P〈0．01）。结论IgG抗AB与妊娠可能密切相关，胎母血型不合的妊娠（包括流产），可能会导致O型孕妇血清IgG抗AB效价升高。通过IgG抗AB效价的动态测定有望对新生儿溶血病或者胎儿血型进行预测。     

茶皂素对高脂血症模型大鼠血液流变学、心肌酶活性的影响

目的探讨茶皂素对高脂血症模型大鼠血液流变学、心肌酶活性的影响。方法将Wistar大鼠30只随机分为对照组、高脂血症模型组（以下简称模型组）和茶皂素组。根据实验要求,按标准喂养15周后,测定每组动物个体血液流变及心肌酶的变化。结果与对照组比较,模型组动物血清中胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）升高（P〈0.01）,高密度脂蛋白（HDL-C）值明显降低（P〈0.01）,心肌酶大量释放（P〈0.01）,血液流变异常明显改变（P〈0.01,P〈0.05）;与模型组比较,茶皂素组动物血清中TC、TG、LDL-C明显降低（P〈0.01）,HDL-C值升高（P〈0.05）,心肌酶的释放受到明显抑制（P〈0.01）,血液黏度、红细胞和血小板聚集能力明显降低（P〈0.01,P〈0.05）。结论茶皂素具有调节血脂、改善血流状态、保护心肌细胞膜完整性的作用。     

肠致病性大肠埃希菌比色检测的适配体生物传感器研究

目的 结合纳米技术,构建一种可以快速比色检测肠致病性大肠埃希菌的适配体生物传感器.方法 对已有的适配体序列进行截短设计,将截短后的适配体通过酰胺化反应修饰到PDA纳米囊泡的表面,实现生物传感器的组装.利用适配体与LPS间特异性结合和结合后引起PDA纳米囊泡的颜色变化和比色响应值(CR)改变来定性或定量检测溶液中的肠致病性大肠埃希菌.并通过透射电子显微镜对PDA纳米囊泡与肠致病性大肠埃希菌之间的作用进行验证.结果 成功获得具有结合肠致病性大肠埃希菌功能的适配体截短序列;成功构建可以快速比色检测肠致病性大肠埃希菌的适配体生物传感器,并经透射电镜证实.其不需要特殊仪器,操作简便,检测时间短,仅需30 min;灵敏度较高,检出限为105 CFU/ml,线性范围为105～108CFU/ml;稳定性高,对106 CFU/ml菌液检测的相对标准偏差为6.08%;特异性强,对肠致病性大肠杆菌0111的检测的特异性为100%.结论 本研究成功构建了肠致病性大肠埃希菌适配体生物传感器,实现对肠致病性大肠埃希菌的快速比色检测.     

1例遗传性抗凝血酶缺陷症导致复发性流产分析

目的 对1个新的SERPINC1基因杂合错义突变导致遗传性抗凝血酶缺陷症家系进行表型和基因突变分析,探讨此基因突变与复发性流产的关系.方法 收集先证者及其家系成员临床资料(共3代5人);检测先证者及家系成员的抗凝血酶活性(antithrombin activity,AT∶A)、抗凝血酶抗原(antithrombin a...     

水中汞离子(Ⅱ)的纳米生物传感器检测法

目的 运用汞离子特异性寡核苷酸探针和纳米金,构建一种能快速比色检测水中Hg2+的纳米生物传感器.方法 对已有的汞离子特异性核苷酸探针进行优化设计,并吸附到纳米金颗粒表面,实现生物传感器的组装.利用汞离子特异性稳定T-T错配和纳米金颗粒在高盐条件下的颜色变化,从而实现对Hg2+的定量分析.结果 制备的纳米金粒径为15 nm,浓度为2.97 nmol/L;成功获得2条截短的汞离子特异性核苷酸探针(9 bp);构建的汞离子纳米生物传感器,最佳盐浓度为0.5 mol/L,检测Hg2+仅需数分钟,检出限为10 μmol/L,特异性为100％.结论 本研究构建的纳米生物传感器,不需要标记探针或者修饰纳米金,在不使用任何特殊条件下就可以实现对汞离子可视化便捷分析,具有操作简便、检测时间短、灵敏度较高、特异性强等优点,易于推广使用.