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1.
目的 构建基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,用于临床表型耐药检测。方法 扩增LacZ基因,插入并替换原骨架质粒pLWJ-SV40-Luc中耐药检测片段构建新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ,利用In-fusion定向克隆技术,将耐药检测片段插入到改造后的骨架质粒中构建耐药检测载体(RTV),并与膜蛋白表达质粒VSV-G共转染293T细胞产生HIV假病毒,在药物干预下,通过检测感染细胞中Luc+表达量来反应其对药物的敏感性。结果 成功引入蓝白斑筛选改造出新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ。36例临床检测样本成功扩增出30例,利用In-fusion无缝连接技术成功构建26例RTV,其中21株产生的假病毒具有活性。药物敏感性实验结果显示所得的假病毒表型耐药检测结果与基因型耐药解释结果完全一致。结论 成功构建出基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,可应用于临床耐药检测,以指导临床抗病毒治疗。 相似文献
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目的 了解福建省HIV-1 新近感染者流行毒株的亚型分布和流行特征。方法 随机抽取福建省2011-2012 年使用BED捕获酶免疫试验检出的104 例新近感染者血样标本,采用反转录巢式PCR扩增,gag、pol 和env 基因片段,并测定和分析核酸序列。结果 目标人群中存在B亚型和01_AE、07_BC、08_BC、55_01B 四种流行重组型,其中以01_AE 和07_BC 流行重组型为主,分别占45.68%和35.80%。基因亚型的流行特征分析显示,亚型分布中01_AE 所占比例下降,07_BC 所占比例上升;性传播是主要感染途径,其中同性传播比例明显上升。结论 福建省HIV-1 流行毒株亚型分布众多,随着时间推移,亚型构成和传播途径已发生改变,应加强对HIV-1感染的分子流行病学趋势动态监测。 相似文献
3.
双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。 相似文献
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目的了解福建省2015年新报告的经性传播男性HIV感染者的流行病学特征,为AIDS防治提供参考。方法以2015年新报告经性传播1 060例男性HIV感染者为研究对象,开展个案调查并统计分析。结果 1 060例中同性性传播者470例、异性性传播者590例。同性性传播患者以未婚为主(62.3%),≥大专学历者居多(35.5%),有异性性行为接触史51.9%,与异性性传播的患者比较,在年龄、婚姻、户籍、文化程度和性行为接触史上差异均有统计学意义;同性性传播和异性性传播患者在近3个月性行为时安全套坚持每次使用率分别为19.3%和19.7%。结论经不同性传播途径感染HIV的男性患者,在部分流行病学特征上存在差异,且安全套使用率均较低。应开展有针对性的健康教育和行为干预策略,采取有效措施提高性行为时安全套使用率。 相似文献
5.
目的 运用异源双链泳动分析法(HMA)进行人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)基因亚型分析。了解福建省HIV-1亚型的流行情况。方法 收集细胞培养中HIV-1感染的外周血单个核细胞(PBMC),聚合酶链反应(PCR)扩增HIV-1膜蛋白基因(env)区的核酸片段,与标准亚型的对照质粒的PCR产物进行杂交,形成异源双链二聚体,根据其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的泳动率确定其亚型,并进一步对标本进行序列测定和系统树分析,结果 15份标本中,80.00%为E亚型,6.67%为B亚型,2份不能确定其亚型,比较异源双链泳动法和序列测定法的结果,显示两种分析方法对HIV-1病毒基因分型有较高的一致性,其亚型一致率为86.67%。结论 福建省流行的HIV-1毒株以E亚型为主,亚型分析5法具有快速,简便,经济和高特异性的特点,可用作对HIV流行毒株进行长期监测的重要手段。 相似文献
6.
目的 评价多引物嵌套式聚合酶链反应(Nested-PCR)在艾滋病病毒(HIV)感染诊断中的应用。方法 采用柱离心式小量组织/细胞基因组脱氧核糖核酸(DNA)抽提试剂盒提取DNA。用3套分别来自于长末湍重复序列(LTR)-gag、pol、env不同区域的序列引物进行嵌套式PCR扩增。结果 用多引物嵌套式PCR对28例不同来源标本进行检测,其中13例为HIV感染者,4例为HIV可疑感染者,4例为人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)感染者且HIV抗体检测为阴性,7例为正常者。经过检测每一套引物均漏检了1份标本,即每一套引物敏感性均为92.3%。HTLV标本经检测均为HIV阴性。根据判断标准,该检测方法敏感性和特异性均达到100%,最低检测线达到103外周血单核细胞(PBMC)。结论 多引物嵌套式PCR具有高敏感性及特异性,在鉴定HTV感染方面有重要的意义.可作为蛋白印迹试验的补充和辅助诊断。 相似文献
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应用B超研究儿童甲状腺体积 总被引:3,自引:0,他引:3
综述近几年来应用B超诊断儿童甲状腺肿的方法及测量值研究进展。用B超测量甲状腺体积是一种精确、客观、且安全、无创伤性的方法。目前,我国8~10岁碘充足儿童甲状腺体积正常值均低于WHO/ICCIDD推荐的正常值。因此,WHO/ICCIDD推荐的儿童甲状腺体积正常值对中国儿童并不适用,有必要重新建立年龄和体表面积分组的碘充足的中国儿童甲状腺体积正常值。 相似文献
8.
目的摸清云南省HIV感染的流行势态.方法哨点监测、现患调查、常规监测和献血员筛查结果的综合分析.结果(1)新报告感染州1个、县8个,至今全省16个地州、市,111个县、市均报告感染,感染以静脉吸毒、男性、汉族、农民和无业为主,15~49岁占98.5%.(2)首次检出1例男性同性恋感染者.(3)全省哨点监测各类人群的HIV感染率分别为静脉吸毒波动于2.6%~75.0%之间,全省平均感染率为27.8%(335/1 204),比1998年的24.4%上升了13.9%,潞西为47.1%,比1998年上升了125.4%;卖淫人群的平均感染率为2.2%(19/847),男性性病病人为1.8%(53/2951),孕产妇为0.2%(14/6417),与1998年比均无显著性差异,但昆明市皮防院哨点嫖娼人群为1.1%(1/95),比1998年的0.3%(1/325)上升了266.7%,保山性病哨点的男性性病病人感染率为4.1%,比1998年的1.0%上升了310%;瑞丽无关联人群的HIV感染率为1.4%(11/800),比1998年上升了1 300%,比历史最高的1995年(0.8%)上升了75%.(4)献血员检出率为0.01%.结论 HIV感染已在我省普遍播散,静脉吸毒仍为我省主要流行因素,且平均感染率仍呈上升趋势,性传播以及孕产妇的HIV平均感染率与1998年比无显著性差异,但值得注意的是HIV感染在静脉吸毒高流行区瑞丽的无关联人群中已超过了1%,昆明市皮防院哨点嫖娼人群,保山男性性病病人的HIV感染率与1998年比有明显上升. 相似文献
9.
目的了解我省艾滋病患者的抗病毒疗效与基因耐药性突变发生情况,为抗病毒治疗提供依据。方法采集我省25例接受抗病毒治疗的艾滋病患者外周静脉抗凝全血进行CD4+T淋巴细胞计数,分离血浆进行HIV病毒载量检测,并提取血浆标本中HIVRNA,用RT-PCR方法扩增HIVpol区蛋白酶基因全序列与部分逆转录酶序列。所得扩增片段进行序列测定后,数据运用ContigExpress编辑校正后上传至斯坦福大学HIV耐药数据库进行比对,同时运用Bio-Edit、Clustal和Mega等软件进行系统发生分析。结果本研究中的17例(68%)患者的病毒载量在1000cp/ml以下,其中40%(10例)降至检测限之下。RT-PCR获得10例患者的扩增片段。对其序列亚型测试结果表明:7例属于HIV-1AE亚型,2例HIV-1B亚型,1例为HIV-1D亚型;耐药性分析表明:10份序列对PI(蛋白酶抑制剂)药物均表现为敏感,8份序列对NRTI(核苷类逆转录酶抑制剂)及NNRTI(非核苷类逆转录酶抑制剂)表现出至少对3种药物高度耐药,最常见的突变位点为G190A、K103N和M184V,造成对NVP、3TC的高度耐药。结论目前我省艾滋病患者的抗病毒治疗取得预期效果。随着治疗时间延长,患者免疫功能也逐渐恢复,但耐药性突变发生种类和数量有所增加,出现对现有各类一线药物不同程度的耐药。为保证可持续性治疗策略的施行,需加强对抗病毒治疗患者的依从性教育,同时加强耐药性监测,及时评估治疗失败者耐药性情况,必要时提供二线药品,减少我省HIV病毒耐药株的产生与传播,保障抗病毒治疗的有效进行。 相似文献
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间接免疫荧光试验在HIV抗体检测中的应用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:评价间接免疫荧光试验(IFA)作为一种确认实验在HIV抗体检测中的应用。方法:用T嗜性的HIV毒株感染MT4细胞制备抗原片,并与不同稀释度的免疫血清相结合,再滴加荧光素标记的羊抗人IgG,在荧光显微镜下检测特异性免疫荧光,结果:用IFA检测43分血清样本(其中包括17份WB阳性血清,14份阴性血清和12份ELISA阳性或WB出现可疑条带但按标准不能判为阳性的可疑血清),除HIV-2血清呈阴性反应外,其余检测结果与WB相符,IFA对HIV-1抗体检测的敏感性和特异性均达到100%,HIV-1阳性血清抗体最高滴度达到1:10240。结论:IFA可用于HIV-1抗体检测的确认,它可作为Western Blot的一种补充或替代实验。 相似文献