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目的: 构建两种完全可调控诱导不同剪接形式小鼠era的真核表达载体,检测不同剪接形式的鼠Era蛋白对细胞生长状态的影响.方法: 构建两种不同剪接形式鼠era的完全可调控诱导表达载体,分别与受体表达载体pERV3稳定共转染鼠成纤维细胞系L-929.用PonA进行诱导表达后,以Western Blotting检测Era蛋白表达水平,以MTT法测定细胞生长曲线,以流式细胞仪检测细胞周期.结果: 成功获得稳定的可完全诱导表达两种不同剪接形式鼠Era蛋白的细胞系;经过PonA诱导后,过表达两种剪接形式Era蛋白的L-929细胞,生长速度加快,G2/M期细胞数量明显减少.结论: 两种剪接形式鼠Era蛋白在真核细胞周期中发挥重要作用. 相似文献
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目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。 相似文献
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目的:调查陕南地区汉族人群9个STR基因座(D3S1358,vWA,FGA,D8S1179,D21S11,D18S51,D5S818,D13S317,D7S820)的遗传多态性分布. 方法: 采用ABI-310分析仪对Profiler Plus系统的9个STR基因座的复合扩增产物进行电泳分离和四色荧光自动分析检测. 结果: 在449名无关个体中,共检测到104个等位基因, 基因频率分布在0.0011~0.3579之间. 9个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05). 9个STR基因座的多态信息量均大于0.6765,杂合度均大于0.7248,个体识别力均大于0.8751,非父排除率均大于0.4589,随机个体相同表型的偶合率在0.0405~0.1294之间. 结论:获得了陕西地区汉族人群9个STR座位的多态性分布资料;陕西汉族人群的9个STR座位具有较高的遗传多态性,可用于法医亲子鉴定、个体识别和人类群体遗传学等研究领域. 相似文献
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人DOC-2氨基端PID结构域酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:获得人DOC-2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域(PID)cDNA基因,构建酵母双杂交诱饵载体,并检测对报告基因的激活作用。方法:PCR扩增含人DOC-2编码区的全长cDNA片段,克隆入诱饵载体pGBKT7,再亚克隆得到含PID结构域的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-nDOC2。将重组质粒导入酵母菌AHl09,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。结果:成功构建人DOC-2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域(PID)酵母双杂交诱饵载体,该段基因表达的蛋白对酵母菌AH109既无毒性,对报告基因也没有激活作用。结论:我们可利用构建的酵母双杂交诱饵载体来钓取人DOC-2氨基端PID结构域的相互作用蛋白,以利于对DOC-2基因功能进行研究。 相似文献
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目的:构建人era真核表达载体并初步研究这一人类新基因对体外培养细胞形态和细胞周期的作用。方法:构建带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人era真核表达载体,转染体外培养细胞NIH3T3,用荧光显微镜观测和流式细胞仪进行分析。结果:无论EGFP融合于人Era的C端或N端,融合蛋白均表达于细胞浆接近核膜处,细胞形态无明显变化,细胞周期检测S期细胞所占百分数降低。结论:人era可能参与细胞周期调控,为阐明人era的功能提供了资料。 相似文献
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兔抗人Bit1抗血清的制备及其纯化 总被引:3,自引:2,他引:3
目的:利用大肠杆菌中表达的人Bitl(hBitl)蛋白,制备兔抗人Bitl抗血清并对其进行纯化。方法:在大肠杆菌中诱导表达人Bitl融合蛋白:以其免疫家兔,制备兔抗人Bitl抗血清,用非特异性去除法纯化抗体,并以Western blot对所纯化的兔抗人Bitl抗血清进行鉴定。结果:大肠杆菌中表达的人Bitl蛋白占菌体总蛋白的40%。用纯化的抗血清可特异地检出大肠杆菌表达的人Bit融合蛋白。结论:人Bitl融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并成功地制备并纯化了兔抗人Bitl抗血清。 相似文献
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目的:构建人UROC28基因的真核表达载体,观察其在HEK293细胞中的表达。方法:以PUC-19-UROC28质粒为模板,扩增UROC28基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pcDNA3中,酶切鉴定目的基因。重组质粒用脂质体转染HEK293细胞,Western blot观察基因表达情况。结果:PCR扩增的特异性片段长度为430bp,以此构建的重组质粒pcDNA3-UROC28,经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5.4kb和430bp左右的两条片段,测序结果与GenBank中的人UROC28cds序列一致。证明UROC28因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcD-NA3中。Western blot证实pcDNA3-UROC28转染HEK293细胞24 h后有UROC28的表达。结论:成功构建了pcD-NA3-UROC28重组真核表达载体,并在HEK293细胞中表达。 相似文献