新鲜人羊膜微粒与自体微粒皮混合移植对创面愈合的实验研究

目的观察新鲜人羊膜（简称羊膜）微粒混合自体微粒皮促进大鼠创面愈合的作用。方法在24只SD大鼠背部切取4 cm×4 cm全层皮肤,切下的皮肤用取皮鼓反向切取0.15 mm厚皮片,用微量电子天平称量0.1 g制作微粒皮,称取0.2 g、0.4 g羊膜制作羊膜微粒。按移植治疗方法的不同随机分为3组,即自体皮组、治疗1组、治疗2组,每组8只。①自体皮组,用0.1 g自体微粒皮治疗;②治疗1组,用0.1 g自体微粒皮混合0.2 g羊膜微粒治疗;③治疗2组,用0.1 g自体微粒皮混合0.4 g羊膜微粒治疗。移植术后第21、28天,对各组大鼠创面进行大体观察、组织病理检查并测定创面愈合率和收缩率。结果①移植后21天：3组未愈创面为肉芽组织,有少量渗出,3组创面收缩均不明显;与自体皮组比较,治疗1组、2组创面愈合面积大。创面愈合率：治疗2组大于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组大于自体皮组（P〈0.05）。创面收缩率：治疗2组小于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组小于自体皮组（P〈0.05）。组织学观察3组表皮层增生,真皮层毛细血管丰富,表-真皮连接处可见乳头,但自体皮组真皮层内成纤维细胞和毛细血管明显,胶原纤维排列稍乱,并有少量炎症细胞浸润。②移植后28天：治疗1组、2组创面基本愈合或痊愈,自体皮组创面愈合面积增大,裸露创面为肉芽组织且渗出较多,治疗1组、2组较自体皮组收缩小。与自体皮组比较,治疗1组、2组表皮层明显增厚,真皮层胶原纤维排列整齐,表-真皮交接处有明显钉突形成。创面愈合率：治疗2组大于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组大于自体皮组（P〈0.05）。创面收缩率：治疗2组小于治疗1组（P〉0.05）,治疗1、2组小于自体皮组（P〈0.05）。组织学观察自体皮组真皮层内毛细血管较丰富,可见炎症细胞浸润,成纤维细胞增生明显。结论羊膜微粒与自体微粒皮混合移植可以促进创面愈合。     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。 目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。 方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。 结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002) ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P < 0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P > 0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

不同抗冻剂预处理对直接快速液氮冻存人羊膜活性的影响

目的:筛选一种抗冻剂配方,为建立深低温高活性保存的羊膜库提供依据。方法:选取12只健康剖宫产产妇羊膜,根据预处理抗冻剂的不同随机分为4组:A组(空白对照组),B组(DMEM/甘油组),C组(DMEM/甘油/DMSO组),D组(DMEM/甘油/DMSO/海藻糖组)。冷冻保存后第1,3个月取羊膜行HE与台盼蓝染色,分别观察羊膜结构,计算羊膜上皮细胞死亡率,并与新鲜羊膜(E组)比较。结果:E组:上皮细胞呈柱状、排列整齐紧密,细胞膜清晰,细胞核圆润蓝染,基底膜连续,细胞死亡率为(6.95±1.95)%。A组:保存1,3个月羊膜上皮层结构完整性均破坏、核固缩呈深蓝染,基底膜渐变为模糊不清。细胞死亡率分别为(39.96±5.84)%,(81.50±4.50)%,两组比较差异有统计学意义(t=13.796,P<0.05)。B组:保存1,3个月细胞变形,核固缩加剧,基底膜渐变为不连续。细胞死亡率分别为(21.61±6.65)%,(36.76±10.72)%,两组比较差异有统计学意义(t=2.940,P<0.05)。C组:保存1个月后类似新鲜羊膜,保存3个月后羊膜上皮细胞扁平,细胞核深染固缩,基底膜较完整。细胞死亡率分别为(14.08±3.21)%,(29.68±8.19)%,两组比较差异无统计学意义(t=4.344,P>0.05)。D组保存1,3个月形态结构接近新鲜羊膜,死亡率分别为(8.51±1.75)%,(12.70±5.70)%,两组比较差异无统计学意义(t=1.722,P>0.05)。保存1个月的A、B、C组死亡率与D、E组比较均有统计学差异(P<0.05),D、E组间比较差异无统计学意义(P>0.05);保存3个月的A、B、C、D、E各组间比较均有统计学差异(P<0.05),但D组存活率仍然达到87.3%。结论:DMEM/甘油/DMSO/海藻糖可作为新型抗冻剂用于深低温高活性保存羊膜。     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞（RSC96）生长的影响。方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数（0,10,15,20,25%）分组。结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为（470.625±2.546）,（4.121±0.026）和（0.172±0.002） ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组（P 0.05）。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时（10%和15%）具有促进RSC96增殖作用,高浓度时（20%和25%）抑制RSC96增殖。