利用ARMS-PCR等位基因分型方法对德国小蠊钠通道基因新突变的检测及分型研究

目的 了解南京市德国小蠊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性水平,建立一种快捷方便的抗性基因检测分型方法,对kdr(knockdown resistance,kdr)基因突变进行检测和分型。方法 利用圆球法检测高效氯氰菊酯、氯菊酯、胺菊酯以及右旋反式氯丙炔菊酯对德国小蠊的半数击倒时间(KT₅₀),PCR扩增检测kdr基因突变情况。针对1 059位氨基酸位点的碱基突变设计引物建立ARMS-PCR检测方法。结果 在100 mg/m³剂量时,氰菊酯、氯菊酯、胺菊酯和右旋反式氯丙炔菊酯对德国小蠊试虫的KT₅₀值分别20、19、17和8 min。同时在kdr基因的1 058-1 059氨基酸位点处检测到6种突变基因型,并成功地建立了针对D1 059K突变基因型的ARMS-PCR检测方法。结论 采集到的德国小蠊对拟除虫菊酯类杀虫剂产生了不同程度的抗性,且其kdr基因存在着多种新型突变位点。